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基于Calpain-ERK信号通路研究Calpeptin对雌激素诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响

中国药房 2020年第13期31卷 1549-1556页

作者：张艳王旭东金爱何艳詹云惠沈敬堃董宇华宛蕾贵州医科大学基础医学院生理学教研室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵阳550025 贵阳市第一人民医院超声科贵阳550002

目的:研究钙激活中性蛋白酶(Calpain)抑制剂Calpeptin对雌二醇(E2)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响,并探讨其作用机制。方法:以人乳腺上皮细胞MCF-10A为研究对象,采用E2诱导制备转化细胞模型。将细胞分为对照组[0... 详细信息

目的:研究钙激活中性蛋白酶(Calpain)抑制剂Calpeptin对雌二醇(E2)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响,并探讨其作用机制。方法:以人乳腺上皮细胞MCF-10A为研究对象,采用E2诱导制备转化细胞模型。将细胞分为对照组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]、E2转化组(50 nmol/L)、E2转化+Calpeptin组(50 nmol/L E2+1μmol/L Calpeptin),以相应含药培养基连续培养15代。然后采用MTT法检测细胞的增殖率(24、48 h),采用平板克隆试验检测细胞的克隆形成率,采用悬浮成球试验检测细胞的成球数;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测细胞中干性标志物(CD44、Nanog、OCT4)和细胞外信号调节激酶(ERK)m RNA表达水平,并采用Western blotting法检测细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平。另取E2转化细胞分为对照组(0.1%DMSO)和U0126(ERK抑制剂)组(10μmol/L),按上述方法测定细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平,以验证ERK表达抑制与转化细胞生物学行为及干性标志物表达之间的关系。结果:与对照组比较,E2转化组细胞的增殖率(24、48 h)、克隆形成率均显著升高(P<0.01),细胞成球数均显著增加(P<0.01),细胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK m RNA表达水平及CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与E2转化组比较,E2转化+Calpeptin组细胞的增殖率(24、48 h)、克隆形成率均显著降低(P<0.01),细胞成球数显著减少(P<0.05),细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK mRNA表达水平及CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。加入ERK抑制剂U0126后,E2转化细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中p-ERK、CD44、Nanog、OCT4蛋白表达水平均显著增加或升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Calpeptin可抑制E2诱导的人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达,其机制可能与抑制Calpain-ERK信号通路的激活有关。

关键词： Calpeptin 雌二醇人乳腺上皮细胞MCF-10A 细胞转化干性标志物细胞外信号调节激酶机制

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卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的简易测定法

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上海第一医学院学报 1985年第2期 155-157页

作者：蒋宪成庄庆祺梅美珍上海第一医学院药学系药理生化教研室上海第一医学院药学系药理生化教研室

用两酶(胆固醇氧化酶和辣根过氧物酶)系统测定血清在37℃保温40min后游离胆固醇的减少量,以表示卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性(胆固醇酯化量每小时nmol/ml血清)。操作简便、准确、重复性好(CV<3％)。我们应用此法测定了四氧嘧... 详细信息

用两酶(胆固醇氧化酶和辣根过氧物酶)系统测定血清在37℃保温40min后游离胆固醇的减少量,以表示卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性(胆固醇酯化量每小时nmol/ml血清)。操作简便、准确、重复性好(CV<3％)。我们应用此法测定了四氧嘧啶性糖尿病大鼠和正常大鼠血清LCAT的活性分别为82.72±6.3和52.80±3.3(±SE),前者显著高于后者(p<0.001),与文献报道一致。

关键词：卵磷脂胆固醇酰基转移酶动脉粥样硬化胆固醇胆固醇酯实验性糖尿病

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2型糖尿病合并脂肪肝动物模型制备方法研究

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中国临床药理学杂志 2015年第18期31卷 1846-1848页

作者：闫冬李思怡魏媛媛新疆医科大学基础医学院药理学教研室新疆医科大学第一附属医院检验科新疆医科大学基础医学院生理学教研室

目的探讨建立最佳2型糖尿病合并脂肪肝大鼠模型方案。方法用不同方案给予链脲佐菌素、烟酰胺及高脂饲料干预大鼠8周后,制备脂肪肝动物模型。尾静脉取血,测定空腹血糖(FPG),全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肝和血清谷... 详细信息

目的探讨建立最佳2型糖尿病合并脂肪肝大鼠模型方案。方法用不同方案给予链脲佐菌素、烟酰胺及高脂饲料干预大鼠8周后,制备脂肪肝动物模型。尾静脉取血,测定空腹血糖(FPG),全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肝和血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);放免法检测空腹胰岛素(FINS),计算肝指数及胰岛素抵抗指数;光镜下观察肝组织改变。结果先注射链脲佐菌素50 mg·kg-1、高脂饲料喂养后,大鼠血糖、血脂、肝功能有显著的变化,组织病理学观察肝细胞出现脂变。结论先注射STZ后高脂饲料喂养可以成功复制糖尿病并脂肪肝动物模型,且符合人类此病的发病特点。

关键词： 2型糖尿病合并脂肪肝烟酰胺链脲佐菌素动物模型

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小鼠HepA腹水型肝癌细胞核转录活性的研究

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1983年第5期 447-456页

作者：赵前李茂深何开玲上海第一医学院基础部生物化学教研室

本文对小鼠HepA腹水型肝癌(简称HepA,下同)细胞核与正常小鼠肝细胞核的转录活性进行了一些比较研究,发现HepA细胞核的转录活性比正常肝细胞核升高约80%,其中,依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱ(简称RPase Ⅱ,下同)的活性比RPase Ⅰ有更显著的增加... 详细信息

本文对小鼠HepA腹水型肝癌(简称HepA,下同)细胞核与正常小鼠肝细胞核的转录活性进行了一些比较研究,发现HepA细胞核的转录活性比正常肝细胞核升高约80%,其中,依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱ(简称RPase Ⅱ,下同)的活性比RPase Ⅰ有更显著的增加,转录活性的升高以起始速率的增强为主。两种细胞核内的RPase Ⅱ的性质有明显的差别。

关键词：细胞核肝素 RNA 核(细胞学) 蛋白多糖转录活性 HepA 正常小鼠腹水型

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肝穿刺活体组织电镜检查在小儿病毒性肝炎中的应用

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中华儿科杂志 1982年第2期 85-87页

作者：段恕诚朱启镕徐华芳胡锡琪应越英翟为溶陈细法郑培君上海第一医学院儿科医院传染病科上海第一医学院基础部生物物理教研室上海第一医学院基础部病理解剖教研室

病毒性肝炎(简称肝炎)一般根据流行病学资料、临床表现、肝功能及某些免疫学指标等来诊断,但这些指标常不能确切反映肝脏病变的情况,因此肝脏组织学检查至今仍为国内外所重视。我院于1980年4月至1981年3月

关键词：

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白花前胡对麻醉开胸猫急性心肌梗塞的影响

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中国医科大学学报 2000年第2期29卷 84-87页

作者：常天辉陈磊姜明燕王玉萍中国医科大学基础医学院临床药理学教研室沈阳110001 中国医科大学第一临床医院药剂科中国医科大学基础医学院药理学教研室

目的 :观察中药白花前胡对急性心肌梗塞 (AMI)的影响。方法 :用结扎麻醉开胸猫左冠状动脉前降支诱发 AMI模型 ,于结扎后 10 min经 12指肠给药 ,做冠脉循环及心脏血流动力学 ,心肌耗氧量 ,心外膜电图 ,血清酶活性 ,组织 N- BT染色以及 AM... 详细信息

目的 :观察中药白花前胡对急性心肌梗塞 (AMI)的影响。方法 :用结扎麻醉开胸猫左冠状动脉前降支诱发 AMI模型 ,于结扎后 10 min经 12指肠给药 ,做冠脉循环及心脏血流动力学 ,心肌耗氧量 ,心外膜电图 ,血清酶活性 ,组织 N- BT染色以及 AMI程度 (Σ- ST)和范围 (N- ST)等检测。结果 :白花前胡醇提物增加冠脉流量 ,降低冠脉阻力、左室压、左室舒张末压、左室最大上升速率、心率、心肌耗氧量、心肌氧摄取率和率压积。给药 (0 .2 g/kg)后 1h,血清乳酸脱氢酶和心肌 MB型肌酸激酶的变化率 ,由对照组的 (6 1.1± 12 .8) %和 (191.1± 2 2 5 .2 ) % ,分别降至(9.1± 44 .6 ) % ,P <0 .0 5和 (- 1.5± 87.2 ) % ;Σ- ST和 N - ST由 (34 .7± 41.2 ) %和 (5 3.6± 8.6 ) % ,分别降至(- 19.0± 15 .4) % ,P <0 .0 5和 (2 2 .2± 4.3) % ,P <0 .0 1;给药后 5 h,左室梗塞率由 (2 3.6± 6 .7) % ,减至 (15 .0±5 .7) % ,P<0 .0 5。结论 :中药白花前胡有抗急性心肌梗塞作用。

关键词：白花前胡急性心肌梗塞乳酸脱氢酶肌酸激酶

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人脐带内皮细胞受到血流剪切应力刺激后表达凋亡蛋白X连锁抑制物(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 2003年第5期17卷 328-332页

作者：金鑫舒强凌光烈王怀良中国医科大学基础医学院药理学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学第一附属医院外科局部解剖学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院临床药理学教研室辽宁沈阳110001

目的　生理水平的血流剪切应力有抑制内皮细胞凋亡等作用 ,进而发挥抗动脉粥样硬化作用 ,本研究的目的是阐明血流剪切应力抑制血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法　人脐静脉内皮细胞培养于DMEM培养液 ,当细胞融合时将细胞暴露于 2 0dyne&... 详细信息

目的　生理水平的血流剪切应力有抑制内皮细胞凋亡等作用 ,进而发挥抗动脉粥样硬化作用 ,本研究的目的是阐明血流剪切应力抑制血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法　人脐静脉内皮细胞培养于DMEM培养液 ,当细胞融合时将细胞暴露于 2 0dyne·cm-2 的剪切应力 ,分别用免疫印迹杂交及实时聚合酶链反应法检测凋亡蛋白X连锁抑制物 (X linkedinhibitorofapoptosisprotein ,XIAP)mRNA及蛋白的表达。结果　 2 0dyne·cm-2 的剪切应力刺激 1～ 4h ,可诱导内皮细胞产生XIAPmRNA ,4h时表达最多。 2 0dyne·cm-2 剪切应力刺激 6,1 2和 2 4h ,XI AP蛋白表达明显增加。结论　生理水平的剪切应力明显诱导内皮细胞XIAPmRNA和蛋白的表达 ,这可能是剪切应力抑制内皮细胞凋亡。

关键词：凋亡蛋白X连锁抑制物细胞凋亡剪切应力内皮细胞人脐带

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灯盏花黄酮对狗离体脑血管张力和椎动脉流量的影响

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中成药 1985年第1期 24-25页

作者：胡国钧张云扬王宏徐晋良南通医学院教师上海第一医学院药理教研室

在狗离体脑血管的实验中,灯盏花黄酮能明显降低大脑中动脉的张力,对抗5-羟色胺收缩基底动脉的作用以及15-甲基前列腺素F收缩大脑中动脉的作用。静注本药对狗椎动脉流量无明显影响,但可使兔主动脉流量和心率有下降的趋势。

关键词：灯盏花大脑中动脉灯盏细辛离体脑血管黄酮黄酮类化合物

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高效液相法测定心律平血浓度及其药代动力学研究

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中国临床药理学杂志 1985年第1期 12-17页

作者：陈秋潮诸骏仁江文德李志善沈鸣华陈伟力杨金铭上海第一医学院药理学教研室上海第一医学院附属中山医院

本文研究和建立了用反相高效液相色谱法测定心律平血浓度的方法。本法的最低检测限为5ng,血浆中最低测定浓度为50ng/ml,平均回收率为99.23%。一日内回收率为98.25%,四日内回收率为100.2%。心律平的药物动力学符合双室模型,正常人静注70m... 详细信息

本文研究和建立了用反相高效液相色谱法测定心律平血浓度的方法。本法的最低检测限为5ng,血浆中最低测定浓度为50ng/ml,平均回收率为99.23%。一日内回收率为98.25%,四日内回收率为100.2%。心律平的药物动力学符合双室模型,正常人静注70mg后平均生物半衰期为2.60h,血浆清除率为0.79L/h/kg。

关键词：心律平药代动力学高效液相色谱法

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葡萄糖神经酰胺合成酶siRNA表达载体的构建

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郑州大学学报（医学版） 2007年第3期42卷 467-470页

作者：张艳周慧聪陈辉乐晓萍夏彬陈香红张钦宪郑州大学基础医学院药理学教研室郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450001 郑州大学第一附属医院消化内科郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450001

目的构建针对葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)mRNA的siRNA表达载体,并观察其对转染细胞中GCS表达的影响。方法根据人GCSmRNA编码序列,设计并合成3对针对GCS的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入pSUPEREGFP载体重组构建RNAi质粒,进行... 详细信息

目的构建针对葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)mRNA的siRNA表达载体,并观察其对转染细胞中GCS表达的影响。方法根据人GCSmRNA编码序列,设计并合成3对针对GCS的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入pSUPEREGFP载体重组构建RNAi质粒,进行双酶切及测序鉴定。重组质粒用脂质体包裹转染入SGC7901/VCR细胞,采用RT-PCR检测GCSmRNA表达水平的变化。结果重组构建的载体经酶切鉴定与测序分析,显示特定位点靶序列与设计序列完全一致。转染SGC7901/VCR细胞后,GCSmRNA表达明显降低。结论GCSsiRNA表达载体构建成功,并可有效抑制人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞中GCS的表达,为后续研究及肿瘤的基因治疗奠定了基础。

关键词：葡萄糖神经酰胺合成酶 siRNA 表达载体胃肿瘤

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