检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第2期24卷 184-187页

作者：张建鹏仲燕任绪义周雍冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半... 详细信息

目的 :啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞 (支持细胞、间质细胞和生精细胞 )与肝脏金属硫蛋白 (MT)及其亚型 MT1、MT2表达的研究 ,阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法 :采用半定量 RT- PCR、EL ISA、原子分光光度吸收法 ,观察镉处理后不同时相大鼠睾丸三种类型细胞与肝脏 MT基因表达的变化。结果 :睾丸组织中存在 MT。同时还发现 0 h对照组大鼠镉处理后肝脏 MT m RNA增加并保持较高的基础水平 ,3h达峰值后下降 ;而睾丸支持细胞和间质细胞则在 6 h达高峰。镉中毒大鼠睾丸支持细胞和肝脏 MT1m RNA的变化幅度要低于MT2 m RNA,而在间质细胞中则相反。此外 ,生精细胞 MT1m RNA在镉处理后 0～ 3h减少 ,然后增加 ,而 MT2 m RNA的变化则相反 ,而且它们的诱导变化幅度较其他细胞低。镉暴露后肝脏 MT m RNA和 MT均升高 ,但在睾丸三种类型细胞中 MT的表达并没有增加。结论 :镉诱导后 MT m RNA的表达具有细胞和时间依赖性 ;镉虽然能诱导睾丸 MT m RNA的转录但没有促进其 MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸间质细胞生精细胞肝脏

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核转录因子κB RNA适体重组腺病毒载体的构建

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第二军医大学学报 2003年第6期24卷 650-653页

作者：游兴姬杨生生蔡在龙张志珍焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :构建核转录因子 κB(NF- κB) RNA适体 (aptamer)重组腺病毒载体 p Adeasy- aptamer,制备重组腺病毒 Ad- ap-tam er并测定其活性。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 aptamer c DNA的 6个寡核苷酸片段并拼接完整 ,克隆至 p GEM- 7Z载体... 详细信息

目的 :构建核转录因子 κB(NF- κB) RNA适体 (aptamer)重组腺病毒载体 p Adeasy- aptamer,制备重组腺病毒 Ad- ap-tam er并测定其活性。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 aptamer c DNA的 6个寡核苷酸片段并拼接完整 ,克隆至 p GEM- 7Z载体中 ,经酶切鉴定和测序后把 aptam er c DNA定向插入穿梭质粒 p Shuttle- CMV的多克隆位点上 ,再将重组质粒 p Shuttle- CMV-aptamer与腺病毒载体 p Adeasy在大肠杆菌 BJ5 183中同源重组产生重组腺病毒载体 p Adeasy- aptam er。用脂质体转染p Adeasy- aptam er至 HEK2 93细胞 ,产生有感染能力的重组腺病毒 Ad- aptam er,RT- PCR检测重组腺病毒在感染细胞中的表达 ,并测定其对体外抑制炎症细胞系释放炎症介质 IL- 1β和 IL- 6的影响。结果 :感染重组腺病毒的细胞具有 aptamer c DNA的表达 ,重组腺病毒能抑制感染细胞炎症介质的释放 ,具有预期的生物学活性。结论 :产生具有生物学活性的重组腺病毒 Ad-aptamer,为下一步基因治疗因 NF-

关键词：核转录因子κB RNA适体重组腺病毒载体构建基因治疗

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人胃癌相关蛋白VRG107基因的扩增及组织表达初步研究

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第二军医大学学报 2003年第12期24卷 1373-1374页

作者：吴浩焦炳华娄永华史薇郭兴中第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室

以正常人肝脏cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增出编码胃癌相关蛋白VRG107基因片段,应用半定量RT-PCR和Northern印迹分析研究它在人体组织中表达的分布。结果表明VRG107基因编码区为297 bp,与文献报道完全相同。该基因在肝、胃、结肠、肾... 详细信息

以正常人肝脏cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增出编码胃癌相关蛋白VRG107基因片段,应用半定量RT-PCR和Northern印迹分析研究它在人体组织中表达的分布。结果表明VRG107基因编码区为297 bp,与文献报道完全相同。该基因在肝、胃、结肠、肾、乳腺等多种组织(包括肿瘤组织)中均有不同程度的表达。在肝癌组织中表达量明显少于癌旁组织(P<0.01),而在结肠癌组织中表达也少于癌旁组织。提示VRG107基因是一个组织分布广泛的基因,在部分肿瘤组织中表达量明显减少。

关键词：人胃癌 VRG107基因基因扩增基因表达癌组织

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阳离子脂质体介导NF-κB“decoy”ODNs转染巨噬细胞条件的优化

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 856-858,F004页

作者：王建李金宝任绪义邓小明第二军医大学长海医院麻醉科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ... 详细信息

目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ;荧光显微镜观察细胞内荧光分布 ;测定细胞上清乳酸脱氢酶 (L DH)观察细胞损伤情况。结果 :lipofectin介导转染显著提高 J774 .1细胞对 NF- κB“decoy”ODNs的摄取 ;在 2 4孔培养板中 ,NF- κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时 ,转染效率最佳而细胞毒性相对较低 ;lipofectin介导转染 6 h后 ,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核和部分细胞质中 ,而直接转染时荧光物质多分布于细胞质。结论 :lipofectin可增加 NF-κB“decoy”ODNs的细胞摄入并改变其细胞内分布 ;NF-κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时可获得最佳转染效率。

关键词：阳离子脂质体 NF-κB“decoy”ODNS 基因转染巨噬细胞

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红花种质的随机扩增多态性DNA分子鉴定

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1116-1119页

作者：郭美丽姜伟张志珍张戈毛积芳殷明苏中武第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室第二军医大学药学院药理学教研室

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西... 详细信息

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西、河北、安徽、浙江等9省采集的红花22个品种的遗传多样性进行分析。结果:根据RAPD特征图谱,通过在DNA分子水平上的聚类分析,将红花22个品种分为7个类型。RAPD聚类分析表明了品种间的亲缘关系:北方,特别是新疆地区的品种亲缘关系较近,PCR结果极为相似,而南方品种间遗传差异性较大。结论:红花种内存在一定的遗传变异,本研究结果为红花品种鉴定及亲缘关系的探讨提供一定依据。

关键词：红花种质随机扩增多态性 DNA 分子鉴定

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人线粒体亮氨酰tRNA合成酶的表达、纯化及其动力学研究(英文)

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1081-1085页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融... 详细信息

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力。作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成。结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细菌总蛋白量的1％～2％,1 L培养液的菌体内可收获约2 mg的纯化酶蛋白。通过体外转录生成的酶底物tRNALeu(UUR)可达转录模板的100倍。经酶促反应,人mtLeuRS可氨酰化人线粒体内tRNALeu(UUR)。反应的亲和常数(Km)为16.67μmol/L,催化常数(Kcat)为0.17s-1。结论:本实验成功克隆并表达了人mtLeuRS,并成功用于催化tRNALeu(UUR)的氨酰化。

关键词：线粒体亮氨酰tRNA合成酶基因表达动力学纯化酶促动力学参数

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CD11b-BFP融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 188-191页

作者：严鸣毛积芳钟纪根何建朱秋峰娄淑杰徐仁宝第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院急救科长征医院麻醉科基础医学部神经生物学教研室

目的 :构建并表达巨噬细胞分化抗原 1(Mac- 1)的 α链 CD11b与蓝色荧光蛋白 (BFP)的融合蛋白 CD11b- BFP,为进一步直视研究 Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将 CD11b的全长 c DNA进行酶切并获得 2个片段 ,... 详细信息

目的 :构建并表达巨噬细胞分化抗原 1(Mac- 1)的 α链 CD11b与蓝色荧光蛋白 (BFP)的融合蛋白 CD11b- BFP,为进一步直视研究 Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将 CD11b的全长 c DNA进行酶切并获得 2个片段 ,将其中含有终止密码的片段作为模板 ,通过设计引物进行 PCR,获得不含有终止密码的该片段 ,然后与另一片段进行连接 ,形成不含有终止密码的 Mac- 1全长 c DNA,将其插入到表达载体 p EBFP- N1中 ,构建完成 CD11b- BFP融合基因 ,最后将其转染至 U937细胞株中 ,通过荧光显微镜观察与流式细胞术检测 Mac- 1的表达及其黏附活性来进行鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,p CD11b- BFP构建完全正确 ,转染 U937细胞株后 ,可见 CD11b- BFP融合蛋白发出的蓝色荧光。结论 :构建完成 CD11b-BFP融合基因并在

关键词：巨噬细胞分化抗原1 蓝色荧光蛋白融合蛋白

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人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因A3243G点突变对其亮氨酰化活性的影响

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遗传 2003年第4期25卷 383-387页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永韩伟国焦炳华中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

化学法合成人线粒体野生型与A3243G点突变型tRNA^(Leu(UUR))基因,体外转录生成相应的tRNA^(Leu(UUR)),表达并纯化人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS),用mtLeuRS催化野生型与突变型tRNA^(Leu(UUR))与亮氨酸结合,分别检测两种类型tRNA^(Leu(UUR))的氨酰化动力学常数。结果表明,野生型tRNA^(Leu(UUR))的K_m/K_(cat)仅为突变型tRNA^(Leu(UUR))的63.9％,A3243G点突变使tRNA^(Leu(UUR))接受亮氨酸的能力明显下降,提示此为A3243G点突变致病机制之一。

关键词：人线粒体tRNA^Leu(UUR) 基因点突变氨酰化

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大鼠脑外伤时嘌呤受体P2X4受体的表达

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解剖学杂志 2003年第3期26卷 203-208页

作者：向正华吕军蒋平焦炳华 Burnstock G 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 英国伦敦大学学院自主神经科学研究所

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后... 详细信息

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后期主要以具有突起的细胞为主。结论:脑外伤早期,损伤区P2X4受体免疫反应阳性细胞主要为小胶质细胞,中后期可能星形胶质细胞为多;由此推测P2X4参与脑外伤时大脑生理或病理生理功能的调节。

关键词：大鼠脑外伤嘌呤受体 P2X4 免疫组织化学细胞免疫反应 RT-PCR

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人生长激素基因组DNA在家蚕BmN细胞中的瞬时表达

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 765-768页

作者：张昕泂胡惠民董良陆长德第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海200031

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印... 详细信息

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印迹分析鉴定表达产物 ;将全长基因序列、缺失第 1内含子基因序列和 c DNA序列的表达载体 ,分别转染细胞后检测各片段表达产物之间的差异。结果 :测序结果表明人生长激素基因组 DNA在细胞内正确转录、剪接。蛋白质电泳分析和免疫学检测证明转染细胞能够有效合成并分泌蛋白质。 EL ISA检测发现 3种基因片段中 ,全长的基因序列在表达效果上要高于后两者 (P<0 .0 5 ) ,其中缺失第 1内含子的序列表达效率较 c DNA序列明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :在家蚕细胞中能够正确表达带有自身内含子和信号肽的人源蛋白基因 ;

关键词：人生长激素基因组 DNA 家蚕 BmN细胞瞬时表达基因表达

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