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生物工程学报 2004年第1期20卷 43-48页

作者：沈毅珺潘卫徐容潘欣王罗春王征曹峰谭靖伟吴劲松吴芳刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 上海复旦张江生物医药股份有限公司上海201203

构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因... 详细信息

构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因操作将这三个单点随机突变体库拼接并克隆于pMD_18T载体建立三点组合突变体文库 ,DNA测序鉴定突变位点的随机性和多样性 ,原核表达该变异体库 ,体外测定生物学活性。成功获得rhLT三点随机点突变组合文库 ,其转化克隆数达到 1 5× 10 5,是多样性理论值的 4 5倍。 5 0个样品的序列分析显示各个位点的核苷酸和氨基酸序列的突变都呈随机性分布。对原核表达的 30个样品进行生物学活性测定 ,结果 70 % (2 1个 )的样品无活性、2 3 3% (7个 )的样品活性低于rhLT、6 7% (2个 )的样品活性高于rhLT。成功构建了rhLT随机点突变组合文库 ,该库不仅在一级结构上具有良好的随机性和多样性 ,而且具有生物学活性的多样性 ,为应用噬菌体展示等高通量筛选策略对淋巴毒素进行体外分子进化和结构与功能的深入研究打下了基础。

关键词：淋巴毒素随机突变分子进化点突变组合文库

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微生物胶原酶

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微生物学杂志 2004年第2期24卷 34-37页

作者：李文俊郭晓奎姜叙诚上海第二医科大学病理学教研室上海200025 上海第二医科大学微生物教研室上海200025

某些微生物可以分泌微生物胶原酶。微生物胶原酶具有和脊椎动物胶原酶相似的生物学作用 ,可以降解细胞外基质的主要成分—胶原 ,其活性依赖于Ca2 + 等二价金属阳离子。但微生物胶原酶又具有许多不同于脊椎动物胶原酶的生物学特性。它不... 详细信息

某些微生物可以分泌微生物胶原酶。微生物胶原酶具有和脊椎动物胶原酶相似的生物学作用 ,可以降解细胞外基质的主要成分—胶原 ,其活性依赖于Ca2 + 等二价金属阳离子。但微生物胶原酶又具有许多不同于脊椎动物胶原酶的生物学特性。它不仅可以降解天然不溶性胶原纤维 ,也可以降解变性的可溶性胶原蛋白、人工合成的胶原酶底物以及其它细胞外基质糖蛋白。越来越多的研究表明 ,微生物胶原酶在一些微生物致病过程中起重要作用 ,是某些微生物的重要毒力因子。而且微生物胶原酶也被越来越广泛地应用于生命科学基础研究和临床某些疾病治疗 ,具有极为广阔的应用前景。

关键词：微生物胶原酶胶原疾病治疗毒力因子蛋白质生物学作用

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问号钩端螺旋体胶原酶结构和功能分析

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世界感染杂志 2004年第1期4卷 9-13页

作者：李文俊余慧峰杨宏亮姜叙诚郭晓奎上海第二医科大学病理学教研室，上海200025 上海市传染病医院，上海200083 上海第二医科大学微生物学教研室，上海200025

目的：研究问号钩端螺旋体(简称问号钩体)致病机理，预测问号钩体胶原酶结构和功能，为进一步实验验证提供线索。方法：利用各种公共核酸及蛋白数据库资源，运用多种生物学软件对钩体胶原酶基因及其编码产物的结构和功能深入分析。结果... 详细信息

目的：研究问号钩端螺旋体(简称问号钩体)致病机理，预测问号钩体胶原酶结构和功能，为进一步实验验证提供线索。方法：利用各种公共核酸及蛋白数据库资源，运用多种生物学软件对钩体胶原酶基因及其编码产物的结构和功能深入分析。结果：对问号钩体胶原酶进行了结构域归类；对其基因、蛋白的一般特性，蛋白一级结构，二级结构和超二级结构等作了对比性分析；对其序列中的部分片段：进行三维结构模拟；并绘制了其分子进化树，分析其垂直进化关系。结论：问号钩体胶原酶和其它多：种致病性微生物胶原酶具有不同层次、程度不等的相似性。它属于锌蛋白酶超家族和M9-蛋白酶家族。它可能在钩体浸润宿主并造成宿主多脏器出血等方面起重要作用。

关键词：问号钩端螺旋体胶原酶生物信息学核酸序列

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幽门螺杆菌VacA毒性亚单位在大肠杆菌中的分别表达

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同济大学学报（医学版） 2004年第1期25卷 7-10页

作者：杨贵珍刘钟滨袁建平胡宝瑜时晓东郭晓奎同济大学医学院微生物教研室上海200092 上海第二医科大学病原生物学教研室上海200025

目的用基因工程方法获取幽门螺杆菌vacA基因毒性相关片段p37和p58,以深入研究vacA的致病机制。方法用PCR技术,扩增幽门螺杆茵vacA基因的两个片段p37、p58,并克隆入原核表达载体pQE-31,构建重组质粒pQE31—p37和pQE31-p58,转化大肠埃希茵... 详细信息

目的用基因工程方法获取幽门螺杆菌vacA基因毒性相关片段p37和p58,以深入研究vacA的致病机制。方法用PCR技术,扩增幽门螺杆茵vacA基因的两个片段p37、p58,并克隆入原核表达载体pQE-31,构建重组质粒pQE31—p37和pQE31-p58,转化大肠埃希茵M15,IPTG诱导蛋白质表达,用Ni-NTA柱纯化融合蛋白。结果SDS-PAGE分析显示,经IPTG诱导的***如M15表达出相对分子量分别为37KDa和58kda的P37和P58融合蛋白质,SDS-PAGE分析表明,表达的蛋白质经含Ni-NIA的层析柱纯化后为单一蛋白质。结论成功构建了原核表达栽体pQE31-p37和pQE31-p58,获得了高纯度的单一蛋白质,为进一步探讨VacA的生物学活性及VacA抗体的制备鉴定了基础。

关键词：幽门螺杆菌 VacA 亚单位表达

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肺炎克雷伯菌染色体核型及药敏表型特征分析

肺炎克雷伯菌染色体核型及药敏表型特征分析

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第二届世界华人临床生化和检验医学大会暨第六届全国检验医学学术会议

作者：叶杨芹杨海慧沈薇马佳毓张文莉付英梅赵月辉上海第二医科大学附属仁济医院检验科临床微生物室哈尔滨医科大学微生物教研室

肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae)属肠杆菌科,克雷伯菌属,含3个亚种,肺炎亚种(klebsiella pneumoniae ***-moniae)、臭鼻亚种(klebsiella pneumoniae ***)、鼻硬结亚种(klebsiella pneumoniae ***).该种细菌是医院和社区感染的重要... 详细信息

肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae)属肠杆菌科,克雷伯菌属,含3个亚种,肺炎亚种(klebsiella pneumoniae ***-moniae)、臭鼻亚种(klebsiella pneumoniae ***)、鼻硬结亚种(klebsiella pneumoniae ***)<'[1]>.该种细菌是医院和社区感染的重要病原菌.近年来,由于抗生素的广泛应用,耐药株日趋增多,而且呈多重耐药,为临床防治工作带来巨大困难.为此,世界各国包括我国均已开展相关领域流行病学监测<'[2]>,其中通过染色体多态性研究进行型别分析成为重点<'[3、4]>,为求通过该研究确定细菌流行模式,更好的服务于临床.本实验利用脉冲凝胶电泳技术从基因水平分析肺炎克雷伯菌三个亚种染色体多态性,筛选亚种间差异性片段,同时结合耐药表型特征,进行分析比较

关键词：肺炎克雷伯菌染色体核型药敏表型多重耐药流行病学监测

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骨髓细胞来源的树突状细胞体外刺激T淋巴细胞增殖的研究

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中国血液流变学杂志 2004年第1期14卷 50-51页

作者：吴文璎刘建华黄瑞张雁云苏州大学附属第一医院上海第二医科大学苏州大学医学院微生物教研室

分离骨髓单核细胞 ,在一定的培养条件下将其诱导成树突状细胞 ,通过混合淋巴细胞反应检测这些树突状细胞的体外刺激T淋巴细胞增殖的能力。

关键词：骨髓细胞树突状细胞体外刺激 T淋巴细胞细胞增殖

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散发性乳腺癌患者BRCA1基因突变分析

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肿瘤防治杂志 2004年第11期11卷 1133-1136页

作者：李涛袁建平吴凯宇胡宝瑜蒋树娟杨佳张希衡郭晓奎上海第二医科大学微生物教研室上海200025 上海市黄浦区中心医院病理科上海200002

目的 :探讨BRCA1基因突变在散发性乳腺癌发生和发展中的作用及在乳腺癌临床诊断和治疗中的应用前景。方法 :应用PCR SSCP和直接测序法检测 3 0例散发性乳腺癌和 15例正常乳腺组织中BR CA1基因外显子 2、11和 2 0的突变情况。结果 :15例... 详细信息

目的 :探讨BRCA1基因突变在散发性乳腺癌发生和发展中的作用及在乳腺癌临床诊断和治疗中的应用前景。方法 :应用PCR SSCP和直接测序法检测 3 0例散发性乳腺癌和 15例正常乳腺组织中BR CA1基因外显子 2、11和 2 0的突变情况。结果 :15例正常乳腺组织在 3个外显子上都未显示电泳异常 ,3 0例乳腺癌中有 6例在外显子 2上显示电泳条带异常 ,其中 4例经测序证实有突变 ,1例在外显子 2上 ,3例在内含子拼接区。BRCA1基因突变率在初诊年龄、临床分期和肿瘤体积上差异无统计学意义 ,但与肿瘤转移密切相关。结论 :BRCA1基因突变与散发性乳腺癌的发生和发展密切相关 ,该基因突变筛查可作为一种预后指标。

关键词：乳腺肿瘤遗传学基因,BRCA1 突变多态现象,单链构象聚合酶链反应

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随机引物扩增DNA多态性技术在分析金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌多态性中的应用

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卫生研究 2003年第2期32卷 150-152页

作者：高大威马佳毓郭晓奎赵月辉燕山大学环境与化学工程系秦皇岛066004 哈尔滨医科大学微生物教研室上海第二医科大学微生物教研室

金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌是医院内感染的主要条件致病菌 ,常常引起院内感染及暴发流行。本实验以一条含 10bp的随机引物将 5 2株肺炎杆菌和 2 8株金黄色葡萄球菌的DNA进行随机引物扩增DNA多态性 (RAPD)扩增 ,进行多态性分析 ,得到不同... 详细信息

金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌是医院内感染的主要条件致病菌 ,常常引起院内感染及暴发流行。本实验以一条含 10bp的随机引物将 5 2株肺炎杆菌和 2 8株金黄色葡萄球菌的DNA进行随机引物扩增DNA多态性 (RAPD)扩增 ,进行多态性分析 ,得到不同的带谱 ,在肺炎杆菌中存在很强的多态性 ,出现了 41种带型 ,通过肺炎杆菌间相似系数计算 ,绘制出表达菌株亲缘关系的系统树 ,图中可见各菌间的相似系数 ,5 2株菌分成 7个型 ;金黄色葡萄球菌出现了三条特征带。本实验说明RAPD技术能够追溯传染源。

关键词：微生物多态性随机引物扩增DNA多态性技术肺炎杆菌金黄色葡萄球菌

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定量RT-PCR法对“苦参”在心肌炎模型中药效学研究

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上海第二医科大学学报 2003年第1期23卷 1-4页

作者：陈曙霞成威谢龙山钱富荣陈美芳刘晶星上海第二医科大学仁济医院心内科上海200001 上海第二医科大学微生物教研室

目的用定量RT-PCR法检测“苦参”中抗柯萨奇B病毒有效成份“抗柯注射液”,在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗“柯萨奇B病毒”的药效。方法取48只雄性18-22g 8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A-H共8组,每组6只。1.各治疗组(A-F组)... 详细信息

目的用定量RT-PCR法检测“苦参”中抗柯萨奇B病毒有效成份“抗柯注射液”,在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗“柯萨奇B病毒”的药效。方法取48只雄性18-22g 8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A-H共8组,每组6只。1.各治疗组(A-F组),每只小鼠从腹腔接种0.1ml l04TCID50 CVB3m病毒2h后,每天从尾静脉分别注射抗柯注射液,5、10、15、20、25、30mg/kg,2次/d,连续用药3d。2.病毒组(G组),注射病毒同上法,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d。3.空白对照组(H组),腹腔内注射无小牛血清的RPMI-1640培养液,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d。结果空白组CVB-RNA(-)对接种CVB3m感染后用不同剂量“抗柯注射液”治疗的各小组血液中CVB3m-RNA含量与病毒组相比明显下降,其抑制率(％)与所用抗柯注射液的剂量呈正比,即“抗柯”剂量增加,CVB3m-RNA含量下降的幅度亦增加,每天5-30mg,/kg中的各剂量都有明显抑制病毒增殖的作用。结论用定量RT-PCR法检测到“抗柯注射液”对Balb/c小鼠病毒性心肌炎病毒血症时效果明显,最小有效剂量为5mg·kg-1·d-1。

关键词：苦参抗柯注射液柯萨奇B病毒定量RT-PCR 病毒性心肌炎动物模型

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天花粉化学成分与药理活性

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国外医药（植物药分册） 2003年第1期18卷 1-4页

作者：李振红陆阳刘晶星上海第二医科大学微生物教研室上海200025

对天花粉的主要成分天花粉蛋白、植物凝血素和多糖等的化学结构、药理作用的研究进行了综述。

关键词：天花粉天花粉蛋白植物凝血素多糖药理学

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