检索结果-内蒙古大学图书馆

医学动物防制 2019年第7期35卷 624-628页

作者：劳飞翔莫实德邓培雪黄洁洁梁林盼黎玲莉廖玮梁冰玉叶力广西医科大学公共卫生学院广西艾滋病防治研究重点实验室南宁530021 防城港市疾病预防控制中心广西医科大学生命科学研究院

目的了解近期防城港市HIV-1流行毒株env基因C2V3区亚型及分布特征,为防城港市防治艾滋病工作提供科学依据。方法于2017年10月～2018年4月在防城港市人民医院收集199例定点随访的接受抗病毒治疗的HIV感染者或艾滋病病人(human immunodefi... 详细信息

目的了解近期防城港市HIV-1流行毒株env基因C2V3区亚型及分布特征,为防城港市防治艾滋病工作提供科学依据。方法于2017年10月～2018年4月在防城港市人民医院收集199例定点随访的接受抗病毒治疗的HIV感染者或艾滋病病人(human immunodeficiency virus/acquired immunodeficiency syndrome,HIV/AIDS)的流行病学调查信息和10 ml外周血。从外周血白细胞中提取前病毒DNA,用巢式聚合酶链反应对获得的HIV-1前病毒DNA env C2V3区基因片段进行扩增,并进行DNA测序,获得的DNA序列信息使用Sequencher 5.1、MEGA 5.0软件进行清理和分析。结果本研究共收集199例HIV/AIDS,其人口学特征主要以年龄18～49岁为主,占53.70%;职业以农民和待业为主,分别占42.59%、45.37%;学历以初中及以下为主,占89.81%;民族以汉族为主,占75.93%;传播途径以异性传播为主,占93.52%。成功扩增HIV-1env C2V3区基因108例,其中CRF01_AE(Circulating Recombinant Forms,CRF)亚型103例,CRF BC亚型3例,B、CRF59_01B亚型各1例。发现8种gp120 V3环顶端四肽,其中以GPGQ为主,占50.00%;其次为GPGR和GPGK,分别占22.22%、12.96%。预测辅助受体为CXCR4(chemo-kine receptor 4) 59例,占54.63%;其次是CCR5辅助受体(chemo-kine receptor 5)30例,占27.78%;CXCR4/CCR5辅助受体19例,占17.59%。结论防城港市主要流行HIV-1 CRF01_AE亚型,其流行毒株亚型存在多态性。防城港市HIV-1型CRF01_AE毒株膜区V3环氨基酸顶端四肽存在较高的多态性,使用CXCR4辅助受体的HIV-1毒株比例高于用CCR5辅助受体的毒株。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 CRF01_AE亚型 V3环预测辅助受体

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2014～2015年广西钦州市新报告HIV/AIDS病例HIV1型分子传播网络特征

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广西医学 2019年第7期41卷 865-869页

作者：杨全略陈荣凤梁冰玉林兆森劳飞翔梁浩叶力广西医科大学公共卫生学院广西医科大学生命科学研究院广西艾滋病防治研究重点实验室南宁市530021 广西钦州市疾病预防控制中心钦州市535000

目的分析2014～2015年广西钦州市新报告HIV/AIDS病例HIV1型(HIV-1)分子传播网络特征。方法 2014～2015年在广西钦州市招募新报告且未治疗的355例HIV/AIDS患者为研究对象,进行流行病学调查。提取所有研究对象外周血中HIV-1 RNA进行扩增... 详细信息

目的分析2014～2015年广西钦州市新报告HIV/AIDS病例HIV1型(HIV-1)分子传播网络特征。方法 2014～2015年在广西钦州市招募新报告且未治疗的355例HIV/AIDS患者为研究对象,进行流行病学调查。提取所有研究对象外周血中HIV-1 RNA进行扩增和测序,分析HIV-1流行重组亚型。基于最适基因距离构建分子传播网络,并分析入网率及其影响因素。结果共获得264条pol区序列,主要亚型为CRF08_BC(52.27%),其次为CRF01_AE(39.77%),再次为CRF07_BC(6.06%)。CRF01_AE亚型的主要传播途径为异性性传播(84.76%),CRF07_BC和CRF08_BC亚型的主要传播途径为异性性传播和注射吸毒传播。在1.65%最适基因距离阈值下,构建HIV-1分子传播网络,总共有154条序列入网,总入网率为58.33%; CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC彼此独立成簇。性别、年龄、民族、职业、传播途径、CD4^+细胞计数和亚型均非HIV-1进入分子传播网络的影响因素(均P>0.05)。分子传播网络中不同HIV-1基因亚型的关联程度的分布差异有统计学意义(P<0.05),其中CRF08_BC的关联程度均高于其他亚型。结论广西钦州市新报告未治疗HIV/AIDS人群的HIV-1流行亚型以CRF08_BC为主。应构建分子传播网络对该地区CRF08_BC亚型进行长期监测,以采取针对性的措施阻断其传播。

关键词：艾滋病人类免疫缺陷病毒感染人类免疫缺陷病毒1型未治疗人群新报告病例分子传播网络广西钦州

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种植前遗传学诊断/筛查周期的临床资料分析

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安徽医科大学学报 2018年第3期53卷 405-410页

作者：向卉芬徐祖滢张影郝燕陈大蔚章志国周平曹云霞安徽医科大学第一附属医院妇产科生殖医学中心合肥230022 安徽医科大学生殖健康与遗传重点实验室合肥230022 安徽省生命资源保存与人工器官工程技术研究中心合肥230022

目的通过回顾性分析种植前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)治疗周期的资料,旨在总结PGD/PGS治疗过程中的特点及规律,为临床提供参考。方法收集行PGD/PGS助孕的283对夫妇的309个治疗周期信息,分析病因构成、治疗过程、妊娠结局及新生儿情况。结... 详细信息

目的通过回顾性分析种植前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)治疗周期的资料,旨在总结PGD/PGS治疗过程中的特点及规律,为临床提供参考。方法收集行PGD/PGS助孕的283对夫妇的309个治疗周期信息,分析病因构成、治疗过程、妊娠结局及新生儿情况。结果 283对夫妇中,因染色体异常行PGD治疗的比例最高,共223例,占78.8%;比较应用荧光原位杂交(FISH)、微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)和二代测序技术(NGS)这3种方法的临床资料,结果显示array-CGH组的胚胎活检成功率高于另外两组,差异有统计学意义(P<0.05);FISH组的正常胚胎率高于array-CGH和NGS组,但胚胎种植率低于这两组,差异均有统计学意义(P<0.05);FISH组临床妊娠率低于NGS组,差异有统计学意义(P<0.05);不同病因行PGD/PGS临床妊娠率比较,差异均无统计学意义;通过PGD/PGS技术出生子代无出生缺陷,且FISH与array-CGH诊断方法比较,新生儿情况均差异无统计学意义。结论 PGD/PGS技术是治疗遗传病高危患者生育问题的有效措施;FISH、array-CGH和NGS这3种诊断法均是有效的胚胎诊断方法,但array-CGH法和NGS法的诊断效率较FISH高。

关键词：种植前遗传学诊断种植前遗传学筛查 FISH array-CGH NGS 回顾性分析

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临床研究伦理的审思与前瞻——兼述北部湾临床研究伦理审查能力国际高峰论坛

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文化学刊 2019年第9期 17-19页

作者：邱龙虎李媛媛广东医科大学社会科学部广东医科大学附属医院伦理办公室

医疗新技术和新药品研发带来了诸多伦理前沿和热点问题,相关监管审查制度细则需要推敲。北部湾临床研究伦理审查能力国际高峰论坛聚集了国内外专家,围绕人类胚胎基因编辑、干细胞治疗、生物样本库建设、多中心临床试验伦理协作、区域伦... 详细信息

医疗新技术和新药品研发带来了诸多伦理前沿和热点问题,相关监管审查制度细则需要推敲。北部湾临床研究伦理审查能力国际高峰论坛聚集了国内外专家,围绕人类胚胎基因编辑、干细胞治疗、生物样本库建设、多中心临床试验伦理协作、区域伦理审查委员会、伦理审查评价指标建构、受试者保护体系认证、药品临床试验伦理审查、风险与获益评估模型、伦理审查国内外指南与监管等问题进行了深入探讨,取得了众多共识,也阐明了进一步研究的空间。

关键词：临床医学研究伦理技术伦理受试者保护体系

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帕金森疾病动物模型的研究进展

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中国比较医学杂志 2018年第5期28卷 21-27页

作者：张志成袁圆王璇宋庆凯代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方... 详细信息

帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方案及药物的研究中,具有十分重要的作用。啮齿类动物、树鼩和灵长类动物等采用不同造模方法所建立的PD动物模型都拥有自己的优势和局限性,所表现出的临床特征和病理机制与人类有所不同。因此,在科学研究中选择所需使用的模型时必须仔细考虑。本文就主要神经毒素及转基因PD动物模型的相关研究进展进行综述。

关键词：帕金森疾病 6-羟基多巴胺 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶神经毒素转基因动物模型

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HOXD--AS1在体内通过ERK/Ras信号通路促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

HOXD--AS1在体内通过ERK/Ras信号通路促进宫颈癌细胞增殖、迁移和...

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作者：胡玉崇南方医科大学

学位级别：博士

目的：　　宫颈癌发病率居女性癌症人数的第二位，仅次于乳腺癌，具有较高的发病率和死亡率。寻找新的治疗靶点和预后标志物是提高宫颈癌患者生存率的迫切需要。许多长非编码RNAs(lncRNAs)是各种生物过程中的关键调节器，它们的异常表... 详细信息

目的：　　宫颈癌发病率居女性癌症人数的第二位，仅次于乳腺癌，具有较高的发病率和死亡率。寻找新的治疗靶点和预后标志物是提高宫颈癌患者生存率的迫切需要。许多长非编码RNAs(lncRNAs)是各种生物过程中的关键调节器，它们的异常表达与宫颈癌进展的密切相关。　　近年来，随着小非编码RNA研究的深入以及人类基因组学的不断发展、完善，大量长片段的非编码RNA通过深度测序及高通量芯片技术被人们所发现，他们在生命活动中的重要意义也逐渐得到揭示。长链非编码RNA(LncRNAs)，是一类可以像mRNA一样具有多聚腺苷酸化、转录本长度从200nt一直到100kb的细胞内源性RNA分子，不具备编码蛋白的能力，却参与了例如染色体沉默、基因组印迹、染色质修饰、转录激活、转录后调控、蛋白功能调控等多种十分重要的生命活动调控过程。研究发现，LncRNAs在多种类型肿瘤细胞（包括现宫颈癌、肝癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤等）的增殖、克隆、调亡、侵袭、转移及耐药等方面均发挥着重要的作用。更全面、更深刻地阐明LncRNAs在人类疾病尤其是肿瘤中的功能和机制，将会对肿瘤的早期诊断、预后判断、以及临床个性化治疗上提供更大的帮助。　　HOXD是同源异型盒(Hox)基因家族的成员，在胚胎和器官的发育过程中起着至关重要的作用。HOXD簇反义RNA1(HOXD-AS1)是一种新的LncRNA，以反义方式从人染色体2q31.2上的HOXD基因簇中转录。越来越多的证据表明，HOXD-AS1的异位表达参与多种类型的人类肿瘤的发生和进展，包括肝细胞癌、膀胱癌、前列腺癌、神经母细胞瘤和胃癌等。但HOXD-AS1与宫颈癌的关系目前还不明确。　　通过检索非编码RNA基因的综合数据平台NONCODE科学数据库(http：//)，发现HOXD-AS1是一种与宫颈组织相关的异常表达的LncRNAs。鉴于此，把HOXD-AS1作为研究对象，通过检测宫织及细胞中的HOXD-AS1表达水平判断HOXD-AS1与宫颈癌的关系，并且通过后续的体外实验探讨HOXD-AS1在宫颈癌中的具体作用及其作用机制。　　方法：　　1.组织标本的收集　　从2013-2015年之间海军总医院及内蒙古自治区人民医院医院采集的宫颈癌手术标本共122个患者，样本切除后置于冻存管中，标注样本信息后置于液氮中保存，整个保存及转运过程中按照无酶的原则进行操作。这些病例术前未实施过化疗、放疗及向治疗等。详细的病理特征和临床数据通过回顾性分析完整存档病史获得，包括年龄，组织类型，分化程度，临床分期，是否淋巴脉管间隙浸润，有无淋巴结转移等，病历信息完整。通过随访确定患者是否能复发。标本的获取和操作符合临床实验的伦理规范及操作规程。　　2.细胞系及培养方法　　五种宫颈癌细胞系(HeLa,CaSki,ME-100，C33A and SiHa)和正常人宫颈细胞系HOSE均从美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC，Manassas，VA，USA)获得，由本实验室培养及传代保存。细胞在含有10％胎牛血清和100UI/mL青霉素和100ug/mL链球菌酶的RPMI-1640培养基中培养。接种50mL的细胞培养瓶在37℃下用5％CO2在培养箱中培养。　　3.实时荧光定量PCR　　将组织样本和细胞样本采用Trizol法提取RNA。采用RT-PCR试剂盒（Takara公司），按说明书要求将RNA反转录为cDNA。从TaKaRa获得了hoxdas1和U6引物序列，U6作为内参，按20ul体系配制成混合液后，置于ABI7500仪器运行，检测宫颈组织及五种宫颈癌细胞和正常人宫颈细胞系的hoxd-as1表达。取3次独立实验所得数据均数为结果。　　***及minics脂质体法转染宫颈癌细胞　　针对HOXD-AS1的siRNA（hoxd-assiRNA1和HOXD-AS1siRNA2）和HOXD-AS1minics和阴性对照组（对照组）都从吉玛制药有限公司获得（上海，中国）。细胞粘附在六孔板后，使用脂质体(Lipofectamine2000)分别对HeLa和CaSki细胞进行转染。按照预先设定分组，RT-PCR检测HOXD-AS1表达情况，进行后续实验。　　5.细胞增殖能力检测　　将细胞接种于96孔板上，对细胞进行特定的干预，转染后6hrs、12hrs、24hrs、48hrs和72hrs，用CCK-8（Cell Counting Kit-8）试剂盒检测细胞增殖能力。在酶联免疫仪上选择450nm波长测定各组样品吸光值，绘制生长曲线。　　6.平板克隆实验　　取对数生长期细胞，接种于6孔板，接种14天后观察，当肉眼可见细胞克隆时终止实验，用0.1％结晶紫染色，计算克隆形成率。　　7.细胞划痕实验　　细胞转

关键词：宫颈癌发病机制 HOXD簇反义RNA1 细胞增值侵袭能力

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灵长类特异表达的基因TMEM14B标记外侧放射状胶质细胞并且促进大脑皮层的扩张和折叠

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科学新闻 2018年第4期 57页

作者：刘静 Wensu Liu 杨璐吴倩 Haofeng Zhang Ai Fang Long Li Xiaohui Xu Le Sun 张军汤富酬王晓群中国科学院生物物理研究所北京大学首都医科大学附属北京安贞医院北京大学生命科学学院BIOPIC中心中国科学院生物物理研究所脑与认知国家重点实验室

文章简介课题组通过流式细胞分选技术从人类胚胎皮层中纯化出了不同类型的神经前体细胞,并且利用深度单细胞转录组测序的方法找出了灵长类特异表达的基因TMEM14B,它特异地存在于人脑的oRG细胞中。

关键词：特异表达灵长类 TMEM14B 大脑皮层

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哈尔滨市男男同性恋HIV-1感染者gag基因分型特征分析

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中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2017年第1期11卷 27-31页

作者：岳超金刚李海宁宋波林元龙张铮金春英李宇欧高玉梅王福祥刘树林李庆海哈尔滨医科大学基因组中心哈尔滨市150081 哈尔滨医科大学附属第四医院感染科哈尔滨市150001 哈尔滨市传染病医院重症医学科哈尔滨市150030

目的分析哈尔滨市确诊的男男同性恋(MSM)HIV-1感染病例gag基因序列,确定新发感染毒株基因型。方法收集2014年7月至12月确诊且未经过抗病毒治疗的感染者抗凝血,分离外周血单个核细胞,从中提取基因组DNA,采用巢式PCR法扩增gag基因。采用ME... 详细信息

目的分析哈尔滨市确诊的男男同性恋(MSM)HIV-1感染病例gag基因序列,确定新发感染毒株基因型。方法收集2014年7月至12月确诊且未经过抗病毒治疗的感染者抗凝血,分离外周血单个核细胞,从中提取基因组DNA,采用巢式PCR法扩增gag基因。采用MEGA 5.05软件构建gag基因系统发育树,分析基因型特点。结果共收集49例MSM感染者样本,且均获得gag基因序列。系统发育树显示,49例gag基因主要分布于3个亚型内,其中CRF01_AE亚型39例,占79.6%;B亚型5例,占10.2%;CRF07_BC亚型4例,占8.2%。另外,发现CRF01B重组型1例,占2.0%。在CRF01_AE毒株中,92.3%(36/39)与我国MSM人群参考株成簇,7.7%(3/39)与泰国及我国西南地区异性传播参考株成簇。结论本研究时间段哈尔滨市确诊MSM感染病例以CRF01_AE基因型为主。MSM人群可能成为本地区复杂基因型的重要来源,实时监测该人群新发感染病例的分子流行病学特征,对制定有效地预防和干预措施非常重要。

关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒男男同性恋 gag基因基因型

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microRNA-504通过靶基因FOXP1抑制胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡

microRNA-504通过靶基因FOXP1抑制胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡

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作者：崔润中国医科大学

学位级别：博士

胶质瘤是成人最常见的颅内原发性恶性肿瘤，尽管目前采用手术治疗、放疗及放疗等综合治疗手段，患者的预后仍然不佳。根据世界卫生组织(WHO，worldhealth organization)的分级，多形性胶质母细胞瘤(GBM，glioblastoma)是恶性程度最高的... 详细信息

胶质瘤是成人最常见的颅内原发性恶性肿瘤，尽管目前采用手术治疗、放疗及放疗等综合治疗手段，患者的预后仍然不佳。根据世界卫生组织(WHO，worldhealth organization)的分级，多形性胶质母细胞瘤(GBM，glioblastoma)是恶性程度最高的胶质瘤，导致GBM预后不良的主要原因在于其高度的复发性。尽管近年来采用替莫唑胺和标准放疗的联合治疗，原发性GBM患者的平均生存期仅为14.6个月，5年生存率仅为9.8％。基于个体患者的GBM基因表型的改变或许可以成为实现个体化治疗的突破口。　　MicroRNA(miRNA)是一类短小的非编码RNA分子，参与到一系列重要的生物过程当中，比如细胞的增殖、凋亡、代谢及分化等。近年的研究证实miRNA在不同人类肿瘤的生成、血管生成、侵袭和凋亡中都扮演重要的角色。已经有相当多的研究显示在恶性胶质瘤中一些特定miRNA的表达是失调的。在本课题组最近的研究中发现miR-504在高级别胶质母细胞瘤中的表达明显低于非肿瘤脑组织，但是miR-504在胶质瘤中的具体作用及机制仍不清楚。　　在本实验中，我们克隆了成熟的microRNA-504的序列，并对其在胶质瘤细胞中的生物学作用进行了功能和所涉机制的初步研究。我们研究结果显示，在胶质母细胞瘤细胞系U87及U373中过表达miR-504抑制了胶质瘤细胞的增殖、细胞周期进展及活动能力，同时促进了胶质瘤细胞的凋亡。在分子机制研究中，我们发现miR-504过表达抑制了周期相关蛋白cyclin D1，cyclin E1和pRB的表达，同时促进了凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的活化。在胶质瘤细胞中，我们发现miR-504的过表达下调了FOXP1的表达水平，并且确证了miR-504的对胶质瘤的生物学行为的影响在一定程度上是通过抑制FOXP1实现的。综上所述，我们的研究结果提供了充分的证据，证明miR-504在胶质瘤发生发展过程中的重要功能。　　目的：　　研究miR-504对胶质瘤细胞恶性行为的影响，揭示miR-504在胶质瘤进展中的功能及其分子生物学机制。　　方法：　　1、细胞培养　　人脑胶质瘤细胞U87和U373细胞系培养在含10％胎牛血清的DMEM培养基中，两种细胞均培养在37℃、5％ CO2的孵箱中。　　2、LV-miR-504-GFP慢病毒感染细胞　　通过包含有成熟miR-504序列的并标记有绿色荧光蛋白的慢病毒载体（上海吉凯生物公司）分别感染细胞系U87及U373，并于荧光显微镜下观察绿色荧光强度用于评估感染效率，构建能稳定过表达miR-504的细胞株，并用包含有miR-NC的病毒载体感染细胞作为对照组。　　3、qRT-PCR　　用Trizol(TaKaRa公司)从病毒感染的胶质瘤细胞中提取总RNA，RNA逆转录试剂盒购自Promega公司。用SYBR Green法检测miR-504的表达情况（使用Applied Biosystems7900HT Fast Real—Time PCR系统）。内参选择RUN6B，用2-ΔΔCt法进行数据分析，2-ΔΔCt反映各样品相对NC组样品目的基因的相对表达水平。miR-504及RUN6的特异性引物由广州锐博公司合成。　　4、CCK-8法测细胞增殖活性　　将构建好的miR-504过表达细胞接种在96孔板（每孔2000个细胞），共铺5板。每孔加CCK-8避光孵育2小时，用酶标仪测定450nm波长下的吸光度值，连续检测5天。绘制细胞增殖曲线。　　5、EdU法检测细胞增殖　　将待检测细胞种植于24孔板中，以浓度为50μl/ml EdU（广州锐博生物技术公司）的培养液进行孵育2小时后，孵育完成后，用4％多聚甲醛固定30分钟，去除固定液，以每孔3％ BSA的洗涤液洗涤细胞2次，加入EdU反应混合液于室温下孵育30分钟;用Hoechst33342进行细胞核染色，PBS冲洗后于荧光显微镜检测EdU阳性细胞（细胞核为红色）占总细胞数（细胞核蓝色）的比率。　　6、流式细胞仪分析细胞周期　　检测前将细胞培养液换为无血清DMEM进行同步化处理，收集细胞后，于70％冰乙醇于4℃固定细胞2小时，用含有25 mg/ml PI(propidium iodide)和10mg/mlRNA酶抑制剂的PBS进行细胞染色，避光37℃孵育30分钟;用流式细胞仪进行DNA含量检测，记录488nm处红色荧光，并用Modifit软件进行分析。　　7、流式细胞仪分析细胞凋亡　　检测前将细胞培养液换为无血清DMEM诱导凋亡，收集细胞后，用AnnexinⅤ-PE/7-AAD凋亡检测试剂盒（凯基生物技术公司）检测细胞凋亡。　　8、裸鼠成瘤实验　　采用BALB/C-null裸小鼠12只（北京维通利华生物技术公司）。裸鼠饲养于中国医科大学动物实验中心在无菌室

关键词：胶质瘤发病机制 miR-504基因 FOXP1基因细胞增殖细胞凋亡

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AJAP1在癫痫患者和癫痫模型脑组织中的表达及可能参与癫痫的机制研究

AJAP1在癫痫患者和癫痫模型脑组织中的表达及可能参与癫痫的机制...

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作者：张明丽山东大学

学位级别：博士

目的:　　癫痫作为一种严重的神经系统功能紊乱的慢性疾病，给患者本人、家庭造成极大痛苦，并成为严重的社会负担，癫痫的研究一直是医学研究领域的一个热点。但到目前为止机制尚不清楚。　　癫痫的发生与脑内兴奋-抑制神经递质的失衡... 详细信息

目的:　　癫痫作为一种严重的神经系统功能紊乱的慢性疾病，给患者本人、家庭造成极大痛苦，并成为严重的社会负担，癫痫的研究一直是医学研究领域的一个热点。但到目前为止机制尚不清楚。　　癫痫的发生与脑内兴奋-抑制神经递质的失衡有关。γ-氨基丁酸(GABA)是脑组织内主要的抑制性神经递质，各种类型癫痫的发生几乎均与脑内GABA的改变有关，无论是脑内GABA表达量、GABA受体表达量以及二者亲和力改变均可影响癫痫的发生。如通过抑制GABA合成酶-谷氨酸脱羧酶减少GABA的合成或是阻断GABA与其受体结合，都能减少GABA对神经元的抑制，而诱发抽搐发生，相反，通过减少GABA降解增加GABA含量或通过变构调节增加GABA与其受体结合，均有抗惊厥的作用。　　海人酸(Kainic acid，KA)，即红藻氨酸，为谷氨酸结构类似物，与谷氨酸受体结合，能够产生很强的神经兴奋作用。它与神经元细胞突触后膜的海人酸受体结合，产生兴奋性突触后电流，能诱发动物癫痫发作。应用海人酸海马立体定位注射诱导的癫痫动物模型，可出现癫痫典型的自发性发作，病灶以海马、杏仁核和其它边缘结构为主，病理上出现与颞叶癫痫的海马硬化类似的病变。与人类颞叶癫痫一样，对目前临床应用上的大部分抗癫痫药物耐受。海人酸癫痫模型是研究颞叶癫痫的理想模型。　　最新研究表明粘合连接相关蛋白1(AJAP1)与GABA受体密切结合，因此设想其可能通过改变GABA量和/或其受体功能，从而改变GABA功能而影响癫痫的发生发展。本研究旨在发现癫痫发生的关键分子，为癫痫尤其是耐药的难治性癫痫的治疗提供一个新的分子靶标。　　本实验分为三个部分，第一部分:AJAP1在难治性颞叶癫痫患者及海人酸动物癫痫模型中的表达，目的:检测AJAP1在难治性颞叶癫痫患者及海人酸诱导的C57BL/6癫痫小鼠模型脑组织中的荧光定位及蛋白表达情况，并培养原代神经元细胞，应用免疫荧光进行AJAP1的亚细胞定位。第二部分:改变AJAP1的表达水平对海人酸动物癫痫模型行为学、在体场电位的影响，目的:为了证实AJAP1确实参与到了癫痫的发生发展中，构建了慢病毒(LV)载体，以转染AJAP1过表达基因和AJAP1-shRNA，通过海马立体定位注射慢病毒，干预AJAP1的表达，观察AJAP1的变化对海人酸诱导的癫痫模型行为学、场电位的影响。第三部分:AJAP1与GABABR1的定位关系以及其相互作用，探讨AJAP1在癫痫发生中作用的可能机制，目的:证实AJAP1通过影响GABABR1受体的量，初步探讨AJAP1对海人酸诱导癫痫动物保护作用的可能的潜在机制。　　方法:　　第一部分AJAP1在难治性颞叶癫痫患者及动物癫痫模型中的表达　　1.本实验获得重庆医科大学第一附属医院神经内科王学峰主任大力支持。王学峰主任课题组收集了300多例难治性颞叶癫痫患者，多种抗癫痫药物联合治疗仍有癫痫发作，经反复评估后，行手术治疗，留取脑组织建立癫痫脑组织标本库，同时收集了既往无神经系统疾病史，因脑外伤行脑叶切除减压患者的颞叶皮质脑标本，建立对照脑标本库。从上述脑标本库中，随机抽取癫痫组16例脑标本，脑外伤对照组16例脑标本。　　2.实验涉及的成年雄性C57BL/6小鼠（体重18-22g，6-8周龄）均来自予重庆医科大学动物实验中心，饲养于标准条件，同时严格遵守重庆医科大学实验动物伦理委员会相关规定。将25只小鼠分为两组:癫痫组n=16、对照组n=9。癫痫组应用海马区立体定位注射海人酸，建立癫痫模型，对照组应用同样方法注射同体积生理盐水。置于23±1℃，自然昼夜节律光照，随意获取食物和水的环境下，4周后，根据Racine痫性发作分级标准评分，0级:未见肢体抽搐发作，无显著异常行为;1级:湿狗般抖动，面部可见抽搐如节律性眨眼、动须及咀嚼;2级:肌肉痉挛，可表现为点头或甩尾;3级:仅一侧前肢阵挛;4级:双侧前肢阵挛，伴后肢站立;5级:全身阵挛，失去平衡，跌倒。将发作等级≥4分的设为癫痫组(n=11)。脑立体定位注射生理盐水组，设为对照组(n=9)。一部分小鼠（癫痫组n=8，对照组n=8），断头取脑，立即分离海马、皮层用于免疫印迹，另一部分小鼠（癫痫组n=3，对照组n=1）应用4％多聚甲醛心脏灌注后断头取脑，-80℃冰冻保存后切片，用于免疫荧光。　　1.通过上海吉凯公司构建AJAP1的过表达基因和AJAP1-shRNA的慢病毒载体，并以相应未加载基因的空慢病毒作为各自的对照组。　　2.成年雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:AJAP1过表达基因慢病毒组（AJAP1-UP）、空过表达慢病毒组(CON-UP)、AJAP1-shRNA慢病毒组(AJAP1-DOWN)、空抑制表达慢病毒组(CON-DOWN)。分组进行相应慢病毒的海马区立体定位注射。标准条件下饲养2周后，每组2只小鼠麻

关键词：癫痫粘合连接相关蛋白1 脑组织蛋白表达病理机制

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