检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：姜志标南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景食管癌是人类最常见的癌症之一,为全球第六位,死亡率很高。据WHO的最新统计80%食管癌发生在发展中国家,中国是食管癌发生病例最多的国家,也是世界上食管癌高死亡率的国家之一。中国每年死于食管癌的患者约有15万。食管癌组织学... 详细信息

研究背景食管癌是人类最常见的癌症之一,为全球第六位,死亡率很高。据WHO的最新统计80%食管癌发生在发展中国家,中国是食管癌发生病例最多的国家,也是世界上食管癌高死亡率的国家之一。中国每年死于食管癌的患者约有15万。食管癌组织学分型主要有2个：食管鳞状细胞癌(鳞癌)和食管腺癌。食管腺癌常见于欧美国家,而我国食管癌的发病以食管鳞癌为主,约占90%。食管癌有高度转移和袭性特点,其早期发现较为不易,被确诊时多为中晚期,所以食管癌术后死亡率高,5年存活率只有15%-25%。解决食管癌中晚期生存率低的一个重要途径就是能够早期发现,早期诊断,早期治疗。目前临床上食管癌的主要诊断方法分为以下5种：1.纤维内窥镜检查。2.食管内镜超声检查。3.食管脱落细胞学检查。4.X射线钡餐造影。5.胸部CT扫描。这些方法均不能有效地早期发现食管癌的发生。早期诊断是患者存活的关键,食管癌标记性miRNA基因或信号的检测,对于假阳性及不必要的检查与治疗都有重要的意义。因而,若能进一步阐明食管癌发生发展的分子机制,提高食管癌的早期诊断,则有望提高食管癌的治愈率,降低死亡率。微小RNA (miRNA)调控是当前生命科学的重要前沿。在高等生物中,miRNA在细胞代谢、分化、信号传导、凋亡以及免疫应答等几乎全部的重要生命活动中起到关键性作用。而且已有研究表明,miRNA在癌症的发生、发展、转移、侵袭及血管生成等各方面起着非常重要的调控作用。因此将两方面的研究结合在一起,研究与食管癌的发生有关的miRNA及其功能,将有助于对食管癌发生机制的理解,也会促进食管癌诊断技术的发展,从而加速这一技术在临床诊断和生物医学领域的应用。MicroRNA (miRNA)是一类含有18-25个核苷酸的非编码的小分子RNA。它通过与其靶mRNA分子非编码区3’-UTR或其它部位互补结合,特异性抑制或增强基因表达,从而参与调控细胞的生长、发育和分化等许多复杂的生命过程。miRNAs在生物学和病理过程包括细胞分化和增殖中起重要作用,影响细胞凋亡和代谢。miRNA可以作为促癌基因或抑癌基因。有研究发现越来越多的miRNA与肿瘤发生、发展、增殖、凋亡及转移有密切关联,至少不下于数百中,其中很多miRNA被发现和食管癌的发生发展有关,但是这些miRNA与基因表达的调控方式及调节机制尚且不太清楚。miR-155是一个典型的多功能的miRNA。越来越多的实验结果证明miR-155在细胞代谢、分化、信号传导、凋亡以及免疫应答等多种生物学过程中起到重要性作用。miR-155是位于人类的21号染色体的非编码RNA,它的表达水平受BIC转录水平及miRNA加工等的调控。其中不含开放读码框的BIC,表达上调能够促进细胞的异常增殖。还有研究表明,miR-155结合MX 11等基因,通过增强myc的基因活性,从而可以促进细胞的增殖。有研究发现miR-155和BIC的表达水平在血液肿瘤的发生发展中为上调状态,如弥漫大B淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤。大量实验结果表明了miR-155在众多的肿瘤疾病中表达水平上调,而且其在肿瘤发生、发展过程中起到了重要性的作用,并且它的作用主要是起到促癌的作用。据报道,miR-155-5p在乳腺癌、大肠癌、肺癌、子宫内膜癌、胰腺癌、宫颈癌等恶性肿瘤组织中表达上调,并与肿瘤的发生、发展及预后的关系密切相连。近期刘辉等发现miR-155-5p在食管鳞癌组织中高表达,但尚不明确其在食管鳞癌发生发展中的作用及具体分子机制。本研究采用qPCR检测miR-155-5p在食管鳞癌组织中的表达情况,并利用miR-155-5p类似物和抑制剂上调和下调食管鳞癌细胞Ecal09中miR-155-5p的表达,研究其在食管鳞细胞增殖、凋亡和迁移中的作用。研究方法1、标本收集收集2014年12月到2015年6月在上海奉贤区中心医院和上海仁济医院胸外科手术切除的20例食管鳞癌组织及其邻近食管正常组织距病变部位5 cm以上标本。患者年龄为43-74岁,平均年龄为58岁。所有患者术前均未进行任何化疗、放疗,且术前检查均未发现淋巴结转移及远处转移。患者行食管癌根治术后,从手术切除的食管癌组织中留取肿瘤标本(避免取肿瘤坏死区),同时在距肿瘤边缘5 cm处留取正常食管组织作为癌旁组织,所有标本均在液氮罐中冻存。20例食管鳞癌标本最终病理诊断均为食管鳞癌(ESCC)。2、细胞培养人食管鳞癌Eca109细胞购自中科院细胞库,用含10%小牛血清及1%双抗的RPMI1640培养基,在37℃,5%C02培养箱中培养。待细胞融合度达到70-80%,用0.25%胰酶37℃消化10分钟,进行细胞传代或分组实验。3、实时荧光定量qPCR检测组织miR-155-5p的表达水平提取细胞总RNA,检测RNA质量和浓度。采用特异性U6内参反转录引物及miR-1

关键词：食管鳞癌 miR-155-5p Eca109 增殖凋亡迁移

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

2014-2015年宁夏手足口病流行病及病原学研究

2014-2015年宁夏手足口病流行病及病原学研究

引用

作者：林虹宁夏医科大学

学位级别：硕士

背景手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种由多种人类肠道病毒引起的传染病,传染性强,易造成流行和暴发。中国是该病高发国家。自1981年上海发现全国首例患者后,全国许多省(市)开始相继出现流行甚至是大规模的暴发流行。... 详细信息

背景手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种由多种人类肠道病毒引起的传染病,传染性强,易造成流行和暴发。中国是该病高发国家。自1981年上海发现全国首例患者后,全国许多省(市)开始相继出现流行甚至是大规模的暴发流行。我国卫生部于2008年5月2日将手足口病正式列入《中华人民共和国传染病防治法》规定的丙类传染病范围进行管理。2010-2015年我国发病数连续六年位居法定报告传染病首位,死亡数位居前五位。2014-2015年宁夏报告例数分别位于宁夏法定报告传染病的第三位和第一位,防疫形式仍然十分严峻。目的1.分析阐述宁夏2014-2015年HFMD的流行特点,及时掌握该病的流行规律,为制定科学有效的防控措施提供理论依据。2.分析HFMD病原谱构成,结合流行病学资料,对部分优势病原体进行基因进化分析,掌握其分子变迁规律,为疾病的防控提供理论支持。3.分析HFMD重症病例的危险因素,从而在发病早期进行及时的预防和干预减少重症的发生率。方法***的流行病学研究:采用描述流行病学方法对宁夏2014-2015年的HFMD监测资料进行统计分析,描述其分布特征。***的病原学特征研究:对2014-2015年宁夏5个市的疾控中心送检的非Enterovirus 71型(EV71)和非Coxsackievirus A16型(Cox A16)的其它肠道病毒(EV-U)阳性标本,经过病毒分离、核酸提取、RT-PCR及序列测定等步骤,获取毒株的基因序列并分析其基因进化特征。3.重症危险因素分析:对收集的重症的个案表信息,采用多因素Logistic回归分析方法对重症因素进行回归分析。结果1.2014-2015年宁夏报告HFMD 15157例,占全部法定传染病19.66%,占丙类传染病38.93%,发病率分别为88.17/10万、141.93/10万。共报告重症病例51例,病例中重症发生率为0.71%。2.2014-2015年81.58%HFMD患者为5岁及以下儿童,1岁组和3岁组发病率最高,6岁后发病率随年龄增大而减小,不同年龄组别的发病构成差异具有统计学意义(χ22014-2015年=121.47,P<0.001),男女发病率的比例平均为1.47:1(χ22014-2015年=3.51,P>0.05),散居儿童发病率高于托幼儿童、学生及其他职业人群。3.宁夏HFMD发病有明显季节特点,呈现一主一次的双峰分布,发病高峰期为5-7月,两年间高峰期发病率(数)分别为45.93/10万(3005例)和98.39/10万(6509例),占HFMD发病总数的52.1%和69.33%。次高峰期为9-10月,两个月合计发病率(数)分别20.73/10万(1356例)和14.95/10万(989例)。***流行范围涉及广泛,各市均有发病,以银川市发病率最高,2014-2015年发病率分别为130.13/10万和222.70/10万,占当年发病总数的47.75%和50.77%。两年中宁夏5市的HFMD发病率不同(χ22014-2015年=239.072,P<0.001),其中以石嘴山市和固原市变化较大,2014年发病顺次为银川市>吴忠市>石嘴山市>中卫市>固原市,2015年为银川市>吴忠市>固原市>中卫市>石嘴山市。5.2014-2015年,实验室共诊断HFMD病例2427例,其中Cox A16占47.75%、EV71占22.88%、EV-U占29.38%。两年间不同月份的病原体构成不同(χ22014=56.16,P<0.001;χ22015=68.532,P<0.001),不同地区的病原体构成不同(χ22014=104.22,P<0.001;χ22015=100.51,P<0.001)。2014-2015年本实验室共对640份EV-U阳性标本进行病毒分离,共分离得到188株分离株,平均分离率29.38%。6.经过对188株分离株型别的鉴定,发现2014年EV-U以Cox A10为主要型别,占65.96%,其次为Cox A4(10.64%)、Cox A8(6.38%)、EV11(4.26%)、Cox A14(2.13%)和Cox B5(2.13%);2015年EV-U以Cox A6为主要型别,占39.72%(56/141),其次为Cox A10(4.96%)、Cox A2(1.42%)和Cox A4(0.71%)。7.2014-2015年EV-U中主要的两种型别Cox A6、Cox A10的遗传进化分析结果显示:2015年56株Cox A6宁夏地方株与Cox A6原型株及国外分离株的遗传距离远,亲缘关系远,与国内地区Cox A6处于一个大的分支,且与福建、江苏、上海等地的分离株的遗传距离近,亲缘关系近,说明我区Cox

关键词：手足口病病原学其它肠道病毒重症

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系的基因与表型分析

一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系的基因与表型分析

引用

作者：刘珊河北医科大学

学位级别：硕士

目的:遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症是由于凝血因子Ⅶ（FⅦ）基因（F7基因）先天性缺陷导致FⅦ功能减低,干扰外源性凝血途径的起始阶段,导致临床出血症状,该病为常染色体隐性遗传性疾病,由FⅦ基因（F7）突变导致。遗传性凝血FⅦ缺乏症以出血... 详细信息

目的:遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症是由于凝血因子Ⅶ（FⅦ）基因（F7基因）先天性缺陷导致FⅦ功能减低,干扰外源性凝血途径的起始阶段,导致临床出血症状,该病为常染色体隐性遗传性疾病,由FⅦ基因（F7）突变导致。遗传性凝血FⅦ缺乏症以出血症状、凝血酶原时间延长而部分凝血活酶时间正常以及因子FⅦ活性降低为特点。纯合子者FⅦ活性较低,出血较重,新生儿期即可发病。该病发病率极低,在1/50万左右,男女均可发病。Alexander等在1951年首次报道,约18%患儿的双亲为近亲结婚。编码FⅦ蛋白的F7基因位于13号染色体长臂（13q34）紧靠凝血因子X基因上游2.8kb的位置,长度为12850bp,mRNA长3141 bp,cDNA长2462 bp,由9个外显子和8个内含子组成。FⅦ是依赖维生素K的单链糖蛋白,是由406个氨基酸残基组成的,在肝脏中合成,肾脏也可以储存和合成,FⅦ能被血循环中的纤维蛋白原及其降解产物刺激合成,分子量为45078,N端为γ-羧基谷氨酸残基,C末端为谷氨酸残基,系丝氨酸蛋白酶结构域,整个分子分4个结构域,从C末端起分别为一个催化区、两个表皮生长因子（EGF）区和γ-羧基谷氨酸残基。临床上根据FⅦ抗原和活性水平将遗传性FⅦ缺陷分为三类:交叉反应物质阳性（cross reacting material CRM+）、交叉反应物质阴性（CRM-）与交叉反应物质降低（CRMR）。该病的临床表现呈多样化,有的终生未出现出血表现,有的出现严重出血,甚至颅内出血,其基因突变类型与FⅦ活性、抗原水平与临床出血表现无明显相关性。目前,纳入人类基因突变数据库（2014年2月）的FⅦ相关突变有283种,突变类型有6种,包括错义、启动子、剪切位点、无义、小的插入和缺失突变,其中错义突变占70%,缺失突变占10%,剪切位点突变占9%,启动子突变占6%,其余为一些小的插入突变和无义突变。F7基因数据库的完善和新的遗传家系的发现,对该病遗传性的诊断、基因治疗及预后判断等具有重要意义。本研究对1例遗传性FⅦ缺陷症患者及其家系成员F7基因进行检测,观察基因突变与临床表型的关系,探讨其功能异常的分子机制。方法:1家系及临床资料先证者为20岁女性,为行扁桃体炎手术,于门诊查凝血常规时发现pt延长,体格检查:皮肤粘膜未见出血点及瘀斑,心肺腹无异常。平素体健,无明显出血倾向,无抗凝药物等应用史。实验室检查:血常规、肝功能、乙肝五项均正常。家系成员为患者父母,均无皮肤、牙龈出血或轻度外伤出血不止等出血倾向,父母非近亲婚配,无血缘关系。2标本采集:对患者及征得患者及其家属同意后,采集患者及其父母的外周静脉血标本,以0.109mol/l构橼酸钠按1:9抗凝,3000r/min离心后,分离血细胞和血浆,留取血浆,标本分成2份,-80℃保存,一份用于凝血指标检测;另一份用于基因组dna提取和pcr扩增。3血浆凝血指标检测:凝血酶原时间（pt）检测、活化部分凝血活酶时间（aptt）检测、纤维蛋白原（fg）以及凝血因子Ⅱ活性fⅡ、fⅤ、fⅦ、fⅩ活性检测。4引物设计:pcr及测序引物共12对,根据fⅦ基因序列（genbankj02933）,应用primer5软件分别设计了12对引物以覆盖f7基因的所有9个外显子及侧翼、5'及3'非翻泽区序列。其中第8外显子采取分段扩增的方法,引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。扩增产物用1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。5pcr扩增:50ul的pcr反应体系包括:1uldna模板、上下游pcr引物各0.5ul、5ul25mmol/lmgcl2、1ul脱氧核糖核苷酸（dntps）,1.5ultaqdna聚合酶、0.5ultap酶以及35.5ul水。pcr反应在verity96well进行,由美国abi生产。反应条件:变性30s。根据引物的不同分别55℃60℃退火35s;72℃延伸40-50s,72℃修复延伸5-8min,共35个循环。1%琼脂糖电泳,150v、100ma电泳20min。6pcr产物的纯化和测序分析pcr产物割胶后送生工生物工程（上海）股份有限公司纯化后测序,采用双脱氧链终止法在3730xl（abi生产）测序仪上进行测序,用chromas软件将测序结果与美国国立生物信息中心基因库所公布的j02933序列作为标准进行比对,找寻基因突变,对发现基因突变的序列进行反向测序证实。7分子模型的构建与分析:将此信号肽序列通过网上数据库http://***/services/signalp/进行进一步功能预测,以此来推断其对该基因功能的影响。结果:1凝血指标的检测:与正常人相比,先证者的aptt正常,pt明显延长,fⅦ活性（fⅦ:c）显著下降,为1.1%,fⅤ:c、fⅡ:c及fⅩ:c基本在正常范围内,pt纠正试验显

关键词：遗传性凝血因子Ⅶ缺陷凝血因子Ⅶ基因基因突变信号肽

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

宫颈癌患者Treg细胞及其Foxp3基因启动子区甲基化水平的研究

宫颈癌患者Treg细胞及其Foxp3基因启动子区甲基化水平的研究

引用

作者：徐华中国医科大学

学位级别：博士

近年来，人们发现Treg细胞对于调节自身免疫反应、维持自身免疫耐受起到至关重要的作用，其负性免疫调节机制及与众多疾病特别是恶性肿瘤间关联已经被大量研究所证实。目前肿瘤免疫学领域普遍认为，Treg细胞抑制了抗肿瘤免疫功能，促进... 详细信息

近年来，人们发现Treg细胞对于调节自身免疫反应、维持自身免疫耐受起到至关重要的作用，其负性免疫调节机制及与众多疾病特别是恶性肿瘤间关联已经被大量研究所证实。目前肿瘤免疫学领域普遍认为，Treg细胞抑制了抗肿瘤免疫功能，促进了恶性肿瘤的发生发展。Treg是一个异质性群体，大体可以分为两个亚群，包括自然产生的Treg细胞(nTreg)和抗原诱导产生的Treg细胞(iTreg)，2种亚群在细胞起源、抗原特异性及调节免疫抑制等方面不尽相同，目前认为是iTreg细胞抑制了抗肿瘤免疫，而非nTreg细胞。由于nTreg和iTreg细胞没有特异性的表型差异，因此目前尚无科学方法对二者进行区分。一般认为，在没有受到抗原刺激的情况下，Treg细胞大多属于nTreg，如果机体受到抗原刺激时，体内nTreg和iTreg则共存。因此，如果可以在肿瘤患者体内特异性甄别iTreg细胞与nTreg细胞，靶向去除iTreg细胞或针对性抑制其功能，将为肿瘤免疫治疗带来希望。　　Treg细胞免疫抑制功能的发挥依赖于Foxp3分子的表达，Foxp3是转录因子forkhead/winged-helix（叉头样/翼状螺旋）家族的成员，其编码基因位于X染色体，Foxp3分子是赋予Treg细胞免疫抑制功能的主要分子。研究发现，nTreg细胞Foxp3呈持续而稳定的表达，其免疫抑制功能因此能够稳定发挥，而体外诱导产生的iTreg，其Foxp3表达却极不稳定，可能需要体外培养环境中多种细胞因子，诸如TGF-β、IL-10、IL-2等的持续刺激来维持其稳定表达。相对于单纯的体外研究环境，实际体内免疫环境要复杂的多，究竟哪种因素或由几种因素协同作用诱导iTreg分化，并进一步调控Foxp3的表达却不得而知。表观遗传学研究发现，人类Foxp3基因具有高度保守的非编码区(conserved noncoding sequence，CNS)，包括启动子区及内含增强子区，该区域富含CpG岛，nTreg细胞CpG位点几乎全部为去甲基化状态，而体外诱导产生的iTreg细胞该区域甲基化程度增高。　　目的：　　众所周知，宫颈癌的发生、发展经历了一个漫长过程，同时也是肿瘤免疫失衡的动态演变过程。Treg细胞在这一进程中处于负性免疫调控的中心。我们推测，肿瘤患者体内的Treg细胞，特别是iTreg细胞的负性免疫调控可能起到关键作用。本课题组通过采集临床资料，动态研究宫颈癌患者Treg细胞Foxp3的表达变化及其启动子区CpG位点甲基化水平，深入了解肿瘤患者体内Treg细胞的生物学特点，为今后的免疫靶向治疗提供理论依据。　　材料及方法:　　一、研究对象　　本实验获得解放军202医院临床伦理委员会批准，所有参加者均被告研究目的，并签署知情同意书。简单随机抽样分组，随机选取2013年1月至2014年6月间本院妇科病房收治的早期宫颈癌患者（FIGO分期为Ⅰa2～Ⅱa1期）25例，临床分期Ⅰa2期5例，Ⅰb1期7例，1b2期8例，Ⅱa1期5例;组织学类型鳞癌20例，腺癌4例，腺鳞癌1例。HSIL（high-grade squamous intereapithelial lesion，又称为宫颈鳞状上皮内高度病变）患者[1]20例，其中宫颈癌患者均采用广泛性子宫切除及盆腔淋巴结清扫术，术前未行放化疗，如术后需辅助治疗，均于术后一个月进行;HSIL患者采用LEEP局部切除术;同期内收集我院行体检的健康志愿者(TCT及HPV检测均阴性)10例作为正常健康对照。上述患者和正常对照者平均年龄分别为43.8+4.4岁、44.1±5.0岁39.5±2.7岁，组间无显著性差异(P＜0.05)，所有研究对象无严重感染、结缔组织病、自身免疫病、代谢病（糖尿病除外）和其他严重的慢性疾患（如晚期肝硬化、未经治疗的甲状腺功能亢进或减退等），近3个月未行免疫治疗。　　二、主要试剂与仪器　　主要试剂:eBioscience公司Treg细胞流式检测试剂盒（鼠抗人CD4-FITC、CD25-APC，Foxp3-PE单克隆抗体）及同型IgG荧光对照;美天旎公司人Treg磁珠分离试剂盒;ZYMO RESEARCH公司DNA甲基化试剂盒;上海生工PCR引物;人TGF-β、IL-10 ELISA试剂盒等。　　主要仪器:BD公司FACS CantoⅡ型流式细胞仪，PCR仪，RT-PCR仪，自动测序仪，全自动酶标仪，电泳仪（槽），低速离心机，紫外凝胶成像系统等。　　三、标本采集与检测方法　　1、所有受试对象（除外健康自愿者）于术前及术后不同时期抽取清晨空腹肘静脉血8 ml，分别注入EDTA管6ml及非抗凝管2ml，立即置入冰盒送解放军202医院优生优育实验室检测。　　2、Ficoll密度梯度分离人外周血单个核细胞(PBMC)　　向2只无菌25ml离心管中

关键词：宫颈癌患者调节性T细胞 Foxp3基因启动子区甲基化水平

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗乙型肝炎病毒天然产物及其衍生物研究进展

抗乙型肝炎病毒天然产物及其衍生物研究进展

引用

全国第二届海洋与陆地多糖多肽及天然创新药物研发学术会议

作者：刘绪强吴雅清刘接卿崔秀灵许瑞安华侨大学生物医学学院厦门市海洋与基因工程药物重点实验室分子药物教育部工程研究中心

乙型肝炎是一种全球性传染性疾病,严重危害着人类的健康。目前临床上治疗乙肝的药物主要有干扰素和核苷类似物,其对乙肝具有一定的治疗效果,但其副作用和耐药性也日益凸显。因此,研发新的安全有效的抗乙肝药物已成为当务之急。天然产物... 详细信息

乙型肝炎是一种全球性传染性疾病,严重危害着人类的健康。目前临床上治疗乙肝的药物主要有干扰素和核苷类似物,其对乙肝具有一定的治疗效果,但其副作用和耐药性也日益凸显。因此,研发新的安全有效的抗乙肝药物已成为当务之急。天然产物作为治疗乙肝的药物,高效低毒,从天然产物中分离抗乙肝的活性成分已成为目前新型抗乙肝药物研发的热点之一。本文按照有效成分化学结构的不同,综述了最近几年抗乙肝天然产物的研究情况,旨在为研究天然产物抗乙肝作用机制及靶点奠定基础,为开发抗乙肝药物提供参考。

关键词：乙肝天然产物活性成分作用机制

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重视前沿生物技术在视网膜退行性疾病中的整合应用

引用

中华眼科医学杂志（电子版） 2015年第5期5卷 1-8页

作者：张敬学卢清君首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科学与视觉科学重点实验室 100730

视网膜退行性疾病,如视网膜色素变性(RP)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、以及青光眼等疾病的主要病理基础是视网膜各级神经元的结构和功能性异常,最终造成患者视力的不可逆性损害,是严重的致盲性眼病,目前缺乏有效的治疗方法。随着近年来... 详细信息

视网膜退行性疾病,如视网膜色素变性(RP)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、以及青光眼等疾病的主要病理基础是视网膜各级神经元的结构和功能性异常,最终造成患者视力的不可逆性损害,是严重的致盲性眼病,目前缺乏有效的治疗方法。随着近年来科学技术的飞速发展,基因治疗、干细胞治疗、自适应光学技术以及人工视觉给上述疾病的治疗提供了可能。人类基因组计划的完成及相关测序技术的广泛应用,为人类对疾病的本质认识带来了新的革命,也为疾病的分子分型、生物诊断及基因水平的治疗都带来了新的动力。人们对眼病的了解也越来越全面,治疗方案在基因替代治疗基础上,进一步整合了细胞因子治疗以及光遗传学治疗等。基因治疗技术在眼科取得了巨大的进展,但不能阻止某些有功能的细胞进一步凋亡,这就需要我们联合一类可以挽救细胞凋亡的基因共同移植,要么需要采用细胞替代治疗,将有功能的细胞代替损伤的细胞,从而恢复其功能。由于干细胞无限的增生能力和多向的分化潜能,成为了细胞替代治疗的新希望。通过视网膜干细胞移植,使其整合入视网膜各层并且分化为目标细胞,以重建视网膜功能,给不可逆性盲眼患者带来了曙光。神经干细胞的自我更新、多分化潜能,使得其非常适合与细胞移植;而机体内广泛存在的神经干细胞加上体外培养扩增技术为我们提供了充足的细胞源。但干细胞的眼部移植后细胞存在移行能力、存活效率以及向目的细胞的分化能力等难点,而基因治疗技术和纳米生物学材料的发展为解决这一难题提供了新的思路,更进一步的推动了这一技术的发展。近年来,自适应光学技术在眼科领域的应用逐步扩大,有望实现各种眼病的早期诊断和治疗,把疾病消灭在萌芽状态。人工视觉解决临床上某些严重致盲眼病无有效治疗方法的问题,是医学生物工程学、材料科学、电子工程学及视觉科学等多学科联合研发的产物。相信在相关领域研究者的不断努力及合作下,一定能够研制出可为患者提供视觉功能的人工视觉假体。

关键词：前沿生物技术视网膜退行性疾病整合医学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

非小细胞肺癌铂类药物治疗后骨髓抑制发生风险的全基因组关联研究

非小细胞肺癌铂类药物治疗后骨髓抑制发生风险的全基因组关联研究

引用

2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会

作者：曹松玉王世明马红霞唐少文束永前许林尹荣朱猛沈伟陈佳萍戴俊程靳光付胡志斌卢大儒沈洪兵南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系复旦大学生命科学学院基因工程和现代人类学教育部重点实验室南京医科大学第一附属医院南京医科大学附属肿瘤医院南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系江苏省肿瘤个体化医疗协同创新中心

目的：非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)患者在铂类药物化疗过程中,易产生骨髓抑制等不良反应,严重影响化疗效果.因此,确定骨髓抑制毒副反应的高危易感人群、寻找相关易感标志物对于NSCLC患者的个体化治疗、改善疾病预... 详细信息

目的：非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)患者在铂类药物化疗过程中,易产生骨髓抑制等不良反应,严重影响化疗效果.因此,确定骨髓抑制毒副反应的高危易感人群、寻找相关易感标志物对于NSCLC患者的个体化治疗、改善疾病预后具有重要意义.方法：采用两阶段研究设计.首先,我们采用Affymetrix GeneChip Human Mapping 6.0芯片,在333例NSCLC病例中对906,703个SNPs开展了全基因组初筛,寻找与铂类药物诱导骨髓抑制相关的遗传突变.其后,我们采用Sequenom MassARRAY分型平台在另外独立的876例NSCLC病例中进行第二轮验证.所有研究对象均为经病理组织学或细胞学确诊的新发NSCLC患者,无既往肿瘤病史.结果：初筛阶段发现24个SNP (P＜1×10-4),我们在另外的876例NSCLC病例中进行第二轮验证,最后发现有两个SNPs在GWAS初筛和验证阶段都与骨髓抑制显著相关,分别是染色体2q24.3区域的rs13014982(初筛：OR=0.55,P=7.29×10-5;验证：OR=0.77,P=0.006)和染色体17p12区域的rs9909179(初筛：OR=0.51,P=4.60×10-5;验证：OR=0.82,P=0.040).将两阶段样本合并后分析,发现上述两个位点与骨髓抑制的关联依旧显著(rs13014982：OR=0.71,P=1.36×10-5;rs9909179： OR=0.76,P=0.001).结论：本研究发现染色体2q24.3区域的rs13014982和染色体17p12区域的rs9909179可能是铂类药物导致骨髓抑制的独立易感性标志物.该研究结果对于NSCLC患者铂类药物治疗毒副反应的预防和控制以及改善NSCLC预后具有重要意义.

关键词：铂类药物骨髓抑制非小细胞肺癌全基因组关联研究

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

leT-7a miRNA在血管平滑肌细胞增殖及移植血管内膜增生中的作用及其机制研究

leT-7a miRNA在血管平滑肌细胞增殖及移植血管内膜增生中的作用及...

引用

作者：曹辉中国医科大学

学位级别：博士

前言　　慢性动脉闭塞是老龄化病人一种常见的疾病，它往往导致间歇性跛行，静息痛和组织损伤。外周静脉移植术是解决动脉闭塞的优选方法，研究表明利用自体静脉改善通畅情况优于人工材料。虽然静脉移植术的起初疗效非常好，但是种种迹... 详细信息

前言　　慢性动脉闭塞是老龄化病人一种常见的疾病，它往往导致间歇性跛行，静息痛和组织损伤。外周静脉移植术是解决动脉闭塞的优选方法，研究表明利用自体静脉改善通畅情况优于人工材料。虽然静脉移植术的起初疗效非常好，但是种种迹象表明由于内膜增生其移植血管的管腔会逐渐狭窄甚至闭塞。最近的研究表明，手术治疗的第一年内静脉移植的通畅率达85％-90％，然而十年内移植静脉再狭窄的发生率达50％。血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖是在内膜增生主要原因，这是早期移植静脉阻塞发病机制的关键。　　miRNA是一种长度为18～25个核苷酸单链的内源性非编码性小RNA。它存在于多种生物的基因组中，包括从病毒到植物以及多细胞动物。miRNA最初是在线虫中发现的，现在的研究表明miRNA在大多数生物体基因表达中发挥关键作用。miRNA的功能是作为转录后调节剂，通过结合到靶mRNA调控基因的表达，参与多种生物学过程，进化过程相对保守。到目前为止，已经发现的人类基因组miRNAs超过1500个，根据研究估计60％以上的基因可以通过miRNA来调控。因此，这些小内源性沉默子作为关键调节剂出现在不同的生物学过程中，如细胞增殖，发育，血管新生，胆固醇代谢，肿瘤发生或细胞凋亡等。除了miRNAs基因表达调节剂的内源性生理作用外，细胞也可被动和/或主动释放miRNA，这种分子的旁分泌作用可以调节其他细胞的基因表达。因此，像癌症、代谢、脑疾病或动脉粥样硬化等疾病，都与miRNA的功能障碍有关。最近研究发现miRNA在血管疾病中也起着重要的作用，它通过调节脉管系统中参与细胞活动的关键的靶基因来发挥作用。let-7miRNA是最早发现的miRNA之一，在脊椎动物和无脊椎动物中高度表达。虽然let-7在血管系统也表达，但是其在VSMCs的增殖和移植血管中作用仍不清楚。在本研究中，通过微阵列基因芯片分析确定静脉移植模型的microRNA表达谱。并且通过实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）方法进一步验证个别失调的miRNA。我们发现，let-7a在静脉移植模型中表达是下调。因此，我们推测，let-7a参与静脉移植术后内膜增生。在本研究中，我们发现let-7a在静脉移植模型中的潜在作用，以及let-7a抑制VMSC增殖的作用机制。　　实验材料与方法　　1、主要试剂　　雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠购买于中国医科大学实验动物中心;CCK-8（Dojindo公司，日本）、pluronicF-127和二甲基亚砜购买于sigma公司;DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶买于HyClone公司;下面是各种蛋白的抗体及其购买公司:α-SMA(Proteintech，Chicago，IL，USA)，PCNA（Proteintech公司，美国），K-Ras（Proteintech公司，美国）和c-Myc（Bioworld公司，美国），流式细胞增殖检测试剂盒购买BD公司。SP法免疫组织化学试剂盒、DAB显色液（福州迈新公司）;原位杂交试剂盒（博士德，中国）;Real-timePCR试剂盒（TaKaRa公司，日本）。let-7a慢病毒表达载体及其阴性对照购自上海吉玛制药技术有限司（病毒滴度1×108）。　　2、动物模型　　10％水合氯醛腹腔麻醉3ml/kg，显微镜下(SXP-1B)行无菌显微外科手术:取小鼠右侧颈总静脉长约4.5mm，肝素盐水冲洗后用11-0血管缝合线端-端吻合于肾下腹主动脉，术后分笼标记，由动物实验中心统一饲养。　　3、基因筛查　　提取组织中的总RNA，运用miRNA基因芯片筛查移植血管模型中差异性表达的miRNA，并通过real-timePCR进一步验证。　　4、体内转染　　以F-127为介质，将let-7amimics及阴性对照转染进入移植血管大鼠体内。实验分为四组:未处理组（untreated组）、凝胶组（Gel组）、阴性对照组(negativecontrols，NC组)、处理组(let-7amimics组)　　5、real-timePCR检测let-7a的表达　　Trizol法提取各实验组细胞总RNA，异丙醇浓缩RNA，分光光度计测定总RNA的纯度。取2μL总RNA，用OneStepPrimeScript(@)miRNAcDNASynthesisKit逆转录试剂盒按操作说明进行反转录反应。按照SYBRPremixExTaq荧光定量PCR试剂盒说明书进行PCR反应。　　6、组织学分析　　于术后28天取组织，福尔马林固定后包埋，进行HE染色和弹力纤维EVG染色，使用光学显微镜观察内膜增生的情况，并且测量内膜和中膜的比例。　　7、免疫组化和原位杂交　　石蜡切片行免疫组织化学检测α-SMA、PCNA、c-Myc与K-Ras的表达。原位杂交检测let-7a的表达。　　

关键词：慢性动脉闭塞血管平滑肌细胞增殖机制静脉移植术内膜增生 let-7miRNA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

中国MSM人群CRF59-01B的鉴定及其特点的研究

中国MSM人群CRF59-01B的鉴定及其特点的研究

引用

作者：张维清中国医科大学

学位级别：硕士

目的：　　艾滋病是目前对人类社会威胁最大的传染性疾病之一。尽管联合抗病毒药物已经普遍应用于艾滋病的治疗，但由于HIV-1存在高水平的遗传变异性，同时在人体免疫应答和抗病毒药物的作用下，病毒易出现高突变、高重组现象，从而使HI... 详细信息

目的：　　艾滋病是目前对人类社会威胁最大的传染性疾病之一。尽管联合抗病毒药物已经普遍应用于艾滋病的治疗，但由于HIV-1存在高水平的遗传变异性，同时在人体免疫应答和抗病毒药物的作用下，病毒易出现高突变、高重组现象，从而使HIV在全球范围内经历了复杂的起源和流行过程。目前，HIV-1可以分为4个组，即M组(Main)、O组(Outlier)和N组(Non-M-Non-O)以及P组的，其中M组已经进化为十一种亚型和亚亚型，61种流行重组型(Circulating RecombinantForms，CRFs)以及难以计数的独特重组型（Unique Recombinant Forms，URFs），并且已有许多URFs转变为CRFs。现阶段，我国MSM(Men Who have Sex With Men，MSM)人群中流行的HIV-1毒株主要是CRF01_AE Cluster1和Cluster2、CRF07_BC Cluster3、B/B'亚型及CRF55_01B等多种亚型共流行的局面，这种现象为不同亚型或流行重组型之间发生重组提供了机会。同时，MSM人群HIV疫情正处在快速上升阶段，并且该人群是我国传播的重要桥梁人群，已经成为我国艾滋病防治的重点对象。了解和掌握我国MSM人群HIV-1毒株亚型的流行状况及其进化特点，是艾滋病防治及研究的基础，并能为认识HIV流行规律、设计艾滋病疫苗、研发诊断试剂及药物研发提供科学的依据。　　本研究于2008年至2013年在全国十一个省份收集920例MSM人群HIV-1感染者血浆样本，扩增1.1 kb pol(pro-RT)区基因片段，通过pol(HXB2:2253-3318)基因片段进化树分析，对疑似流行重组型的样本，采用5'半分子和3'半分子两段法单基因扩增并直接测序的方法(Single Genome Amplifieation andSequeneing，SGA/S)获得血浆病毒HIV几乎近全长基因(Near Full Length Genome，NFLG)序列，确认该人群中存在一新型的重组株:CRF59_01B。从病毒全基因组水平分析CRF59_01B的重组模式;采用时间进化分析(BEAST v.1.6.0)，分析其不同片段的起源时间;结合流行病学数据，推算其流行规模，明确其在我国MSM人群总体流行状况，并分析其对未来我国MSM人群HIV流行可能的影响，从而为我国HIV-1感染的预防、诊断、监测和治疗提供重要的数据支持。　　材料和方法：　　一、研究对象　　2008年至2013年全国11个省份招募920例MSM人群HIV-1感染者，吉林8例;辽宁263例;北京163例;山东42例;江苏49例;上海26例;安徽136例;河南58例;湖南68例;广东40例;云南67例。HIV感染者的EDTA抗凝血浆样本均由上述各省疾病控制中心采集，同时收集HIV感染者的流行病学资料。血浆样本于-80℃.冻存。所有患者均签署知情同意书，并经过了中国医科大学附属第一医院伦理委员会批准。　　二、血浆样本RNA的提取　　使用140ul EDTA抗凝外周静脉血血浆，采用QIAamp RNAMini试剂盒，按照试剂盒说明书标准方法，快速提取HIV-1全基因组RNA60μl。将纯化后的RNA置-80℃保存备用或进行一下步试验。　　三、pol区扩增及NFLG逆转录　　1.1 kb pol区扩增体系基于TaKaRaTaqTMDR001 AM一步法说明;NFLG逆转录反应体系基于SuperScript(R)Ⅲ Reverse Transcriptase Kit（invitrogen）说明书，分5'半分子和3'半分子两段逆转录，分别获得5'半分子和3'半分子cDNA。　　四、SGA方法Nested-PCR扩增NFLG　　本实验采用Nudease Free Water倍比稀释cDNA(1∶3;1∶9;1∶27可适当优化)的方法，每个稀释度均做8个平行孔，进行套式PCR扩增，直至扩增阳性孔少于3个。根据Possion分布，当阳性率小于25％时，即可认为每个孔为单一模板扩增产物。PCR扩增体系基于Platinum(R)Taq DNA Polymerase High Fidelity Kit（Invitrogen）说明书，分两段套式扩增HIV-1 cDNA全长基因组序列。　　五、测序及序列分析　　选取每个样本的第二轮产物各50ul，由北京博迈德测序公司，使用Primerwalking测序。测得的序列用Vector NTI8.0软件包中的ContigExpress组件将每个样本NFLG的5'半分子和3'半分子序列拼接为一个完整的近似全长基因组。用Bioedit(vision3.3)对拼接序列进行编辑、校正、合并样本序列和参考毒株序列为一个队列。用M

关键词：艾滋病男男同性恋 CRF59_01B 单基因扩增测序独特重组型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

p53、MDM2单核苷酸多态性与乳腺癌患者发病风险及临床预后的相关性研究

p53、MDM2单核苷酸多态性与乳腺癌患者发病风险及临床预后的相关...

引用

作者：关舒中国医科大学

学位级别：硕士

目的：　　WHO最新（2012年）指出，恶性肿瘤是导致人类死亡的一个主要原因，目前每年在全球夺去700多万人的生命，而且这一数字还将快速上升。据估计，随着世界人口日趋老龄化，预计全世界癌症死亡人数将继续上升，到2030年可能将超过1... 详细信息

目的：　　WHO最新（2012年）指出，恶性肿瘤是导致人类死亡的一个主要原因，目前每年在全球夺去700多万人的生命，而且这一数字还将快速上升。据估计，随着世界人口日趋老龄化，预计全世界癌症死亡人数将继续上升，到2030年可能将超过1310万，且全球20％的新发癌症病人在中国，24％的癌症死亡病人在中国。在肿瘤患者绝对人数快速增长的同时，我国癌谱也发生了较大变化:乳腺癌、大肠癌发病率迅速上升。预计到2015年，女性发病前3位的肿瘤为乳腺癌、肺癌和大肠癌。在欧美国家，乳腺癌占所有恶性肿瘤的10％左右，占女性恶性肿瘤发病率的28％左右，占女性恶性肿瘤死亡率的15％左右。我国乳腺癌发病率与欧美国家相比仍属于低发病率国家，但随着人民生活水平的不断提高，饮食结构的变化（蛋白质及脂肪饮食的增加），月经初潮的提前，女性生育及哺乳的减少或推迟，乳腺癌发病率每年以3％～4％的速度快速增长，在北京、上海等大城市已经达到70/10万左右。乳腺癌在城市中的发病率为女性恶性肿瘤的第二位，北京、上海等大城市中已经上升至第一位。由于我国大部分地区经济水平较低、女性的医学知识较为匮乏，自我健康意识较为薄弱，造成我国女性对乳腺癌筛查的认知度较低，大多数女性都是有明显症状以后才到医院就诊，这就造成我国的乳腺癌患者发现的期别较晚，其中Ⅰ期乳腺癌的比例≤20％，而美国Ⅰ期乳腺癌的比例高达80％。进而造成我国乳腺癌死亡率呈现快速增长的势头，已经占女性恶性肿瘤死亡率的首位。　　在人类长期进化过程中，由于环境的选择作用形成的基因点突变是个体遗传物质差异的重要表现之一，此即单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism，SNP)。SNP出现的频率大约是1％，其对基因的功能无明显破坏性的影响，其对基因的功能无明显破坏性的影响，携带某些SNP的个体在一般环境中不表现异常，但在某些特定的环境因素作用下，SNP可影响基因功能发挥，从而表现出对特定疾病的易感性。单核苷酸多态性(SNPs)与基因的缺失、插入或突变有关，能够影响到蛋白的表达水平及功能，甚至导致细胞癌变的发生。　　p53作为重要的肿瘤抑癌基因，参与细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞分化及凋亡等重要生物学行为。最近研究显示p53基因第4外显子第72位密码子多态性(p53 Arg72Pro;G→C改变导致精氨酸(Arg)被脯氨酸(Pro)取代）与多种肿瘤遗传易感性密切相关。鼠双微基因(Mouse double minute 2，MDM2)作为细胞内调节p53蛋白浓度及活性最为关键的负性调控因子，与p53构成负反馈环路，抑制其转录活性;同时MDM2借助其E3泛素连接酶活性，导致p53蛋白降解，从而减弱p53对细胞周期调控作用。最近研究发现DM2内含子区内的p53反应启动子区存在功能性单核苷酸多态性(SNPT309G)可显著增加MDM2与转录因子Spl亲和力，使MDM2蛋白表达水平增高，减弱p53信号通路的传导功能。由此可见，抑癌基因p53和其负性调控基因MDM2在乳腺癌发生发展中可能起着重要作用。　　最近研究证实癌基因MDM2或抑癌基因p53的功能获得或缺失都有可能导致乳腺细胞的异常生长，甚至癌变的发生。研究表明，p53 Arg72Pro和MDM2 T309G多态性与肿瘤易感性密切相关，但结果并不一致，且未发现其与乳腺癌临床病理参数及预后的相关性研究。因此，本研究采用病例—对照研究分析p53 Arg72Pro和MDM2 T309G多态性与中国东北地区乳腺癌发病风险、患者的临床病例参数、临床化疗疗效及患者生存期的相关性，并探索各基因位点间的互作关系，验证后可作为候选基因分子标志物用于筛选高危人群，对肿瘤实施有效和目标明确的个体化治疗及预后判断等均具有一定的意义。　　实验方法：　　1、本研究采用以医院为基础的病例-对照研究方法。病例中国医科大学附属第一医院乳腺外科2006年10月至2008年6月女性乳腺癌305例，年龄22～85岁，中位年龄50.1岁;对照组为同期在同一医院体检中心进行健康体检且体检结果正常、无肿瘤病史及遗传病史且年龄与病例组相匹配的345例健康人群。在随机血液样品标本的同时，收集每个研究对象的人口学资料集临床相关参数。　　2、采用酚氯仿法从抗凝血中提取基因组DNA，接下来通过聚合酶链反应-实时荧光定量的方法，检测p53 Arg72Pro及MDM2 T309G位点基因型。　　3、统计学分析:应用统计分析软件包SPSS16.0计算。采用x2检验确定基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡，比较基因型的组间分布频率，分析不同基因型与乳腺癌临床病理特征的相关性。采用非条件logistic回归分析计算比值比(odds ratios，OR)和95％可信区间(confidence inter

关键词：乳腺癌 p53抑癌基因单核苷酸多态性发病风险临床预后

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：