检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：李春鹤中国医科大学

学位级别：硕士

胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）是人类中枢神经系统最常见、最致命的原发性恶性肿瘤,目前的治疗主要依靠手术切除、化疗和放疗。不良的预后反应促使人们去发现更多具有潜在治疗GBM作用的天然产物。大麻酰胺是一种木脂素酰胺,对不同... 详细信息

胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）是人类中枢神经系统最常见、最致命的原发性恶性肿瘤,目前的治疗主要依靠手术切除、化疗和放疗。不良的预后反应促使人们去发现更多具有潜在治疗GBM作用的天然产物。大麻酰胺是一种木脂素酰胺,对不同的癌细胞有不同的作用,但对GBM细胞的作用仍不清楚。在本研究中,采用溶剂萃取和各种色谱方法从青风藤(Sinomenium acutum（Thunb.）*** Wils.)的干燥茎中分离得到大麻酰胺G和大麻酰胺D,用1H-NMR和13C-NMR进行表征结构,用人类胶质母细胞瘤细胞U87和U251细胞研究二者的生物活性。通过CCK-8细胞活力检测分析发现二者均以浓度依赖性方式显著抑制细胞活力并确定了二者EC50。通过Transwell迁移测定法确定经二者处理后细胞迁移被显著阻断,通过DAPI染色,观察到用大麻酰胺处理后细胞核形态发生凋亡变化。通过流式细胞仪检测大麻酰胺D处理前后细胞周期及细胞凋亡变化,同时,为进一步研究大麻酰胺D对GBM细胞周期的影响,通过免疫印迹和real-time PCR分别检测到大麻酰胺D处理后细胞周期蛋白（cyclin）量和细胞周期蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）基因转录量发生明显变化。为了探索其作用机制,通过免疫印迹检测了二者处理后细胞蛋白中MAPKs的磷酸化,发现MAPKs的激活与对GBM细胞的抑制作用有关。总之,大麻酰胺G和D为首次从青风藤中分离得到,发现大麻酰胺G可部分激活MAPKs诱导GBM细胞凋亡,大麻酰胺D对人胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移的抑制也与MAPKs通路有关。目前,对于微生物代谢产物的研究已经越来越广泛,而微生物来源的代谢产物已成为新型活性天然产物的重要来源。本实验室接续前期对雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）内生真菌的研究,对药用植物雷公藤不同部位的内生真菌进行分离纯化,并进行化学筛选,经筛选发现雷公藤内生真菌CS-O-1代谢产物十分丰富并可能具有免疫抑制活性代谢产物,故对其进行发酵分离,以期得到新型活性先导化合物。本研究对真菌CS-O-1种属进行鉴定,将该菌株鉴定为Talaromyces amestolkiae,编号为CS-O-1。将Talaromyces amestolkiae CS-O-1发酵25 L,发酵物经过滤分离菌丝体和滤液。对菌丝体进行提取及部分分离,通过TLC、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS反相柱色谱及HPLC等多种手段分离得到14个化合物,并通过质谱及核磁共振的手段鉴定了7个化合物,包含1个新化合物,命名为chrodrimanin T（1）,和6个已知化合物,分别为烟酰胺（2）、penipyridone D（3）、penipyridone A（4）、3-benzylidene-8,8a-dihydroxy-2-methyl-hexahydro-pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione（5）及aspergillumarin A（6）、邻苯二甲酸丁基异丁酯（7）。

关键词：大麻酰胺G 大麻酰胺D 青风藤胶质母细胞瘤雷公藤内生菌代谢产物

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基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨黄芩抗胃癌的作用机制

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山西医科大学学报 2023年第9期54卷 1165-1175页

作者：崔杨王瑾陈雨琪张庆洋周玉婷陕西中医药大学医学技术学院生物技术教研室咸阳712046 陕西中医药大学附属医院检验科

目的基于网络药理学、分子对接和细胞实验探讨黄芩治疗胃癌的活性成分及潜在作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得黄芩的主要活性成分及其作用靶点;在GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、治疗... 详细信息

目的基于网络药理学、分子对接和细胞实验探讨黄芩治疗胃癌的活性成分及潜在作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得黄芩的主要活性成分及其作用靶点;在GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、治疗靶点数据库(TTD)、Drugbank数据库中获取胃癌疾病相关靶点;利用String平台及Cytoscape软件构建黄芩-胃癌交集靶点的蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI),并获得核心靶点;借助Metascape平台对黄芩-胃癌交集靶点进行基因本体(GO)富集分析以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析;利用AutoDock Vina软件进行分子对接验证,并用PyMOL软件对结果进行可视化处理。用不同浓度的黄芩提取物(0,20,40,80,120,160,200μg/ml)分别处理胃癌细胞AGS和MGC-80324 h或48 h后,通过CCK-8检测细胞活力并计算黄芩提取物对胃癌细胞的IC 50。AGS细胞分为对照组(0μg/ml)和黄芩组(100μg/ml)进行划痕实验,于0,24,48 h记录细胞迁移。用黄芩提取物(0,50,100μg/ml)处理AGS细胞24 h,通过蛋白免疫印迹实验检测相关蛋白表达。结果网络药理学结果表明,黄芩治疗胃癌的主要活性成分为汉黄芩素、黄芩素、金合欢素、苏荠苎黄酮、千层纸素A,核心作用靶点为AKT1、TP53、VEGFA、JUN、IL6。黄芩治疗胃癌涉及的主要生物过程(BP)有细胞死亡的正调控、凋亡信号通路、化学应激反应等,涉及的KEGG通路主要包括PI3K-Akt、P53、VEGF信号通路。CCK-8实验结果显示,与0μg/ml相比,不同浓度黄芩能够抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的生长增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性。细胞划痕实验表明,与对照组相比,黄芩组AGS细胞的迁移率下降(P<0.01)。蛋白免疫印迹实验结果显示,与0μg/ml组相比,100μg/ml黄芩组Akt蛋白的相对磷酸化水平降低(P<0.05);50,100μg/ml黄芩组中p53蛋白的表达水平升高(P<0.05)。结论黄芩抗胃癌具有多成分、多靶点、多通路的特点,为黄芩在临床中的应用提供了理论依据。

关键词：黄芩胃癌网络药理学分子对接 Akt P53

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基于网络药理学和动物实验探讨复方红花补蒺颗粒治疗白癜风的作用机制

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山西医科大学学报 2023年第6期54卷 814-822页

作者：李晓龙信如娟黄皓朱全刚蚌埠医学院药学院中医药基础教研室蚌埠233040 上海市皮肤病医院药剂科

目的运用网络药理学和体内实验探究复方红花补蒺颗粒(FHB)治疗白癜风的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库和本草组鉴(HERB)数据库获取红花补蒺方的化学成分和作用靶点。通过在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、DrugB... 详细信息

目的运用网络药理学和体内实验探究复方红花补蒺颗粒(FHB)治疗白癜风的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库和本草组鉴(HERB)数据库获取红花补蒺方的化学成分和作用靶点。通过在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、DrugBank数据库、DisGeNET数据库,GeneCards数据库和治疗目标数据库(TTD)筛选白癜风(vitiligo)的相关靶点。借助Matascape数据库进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。利用Cytoscape及STRING数据库构建红花补蒺方“活性成分-靶点-疾病”网络、蛋白相互作用网络,根据拓扑学参数筛选红花补蒺方治疗白癜风的核心成分及作用靶点。最后,将小鼠分为空白组、白癜风模型组、红花补蒺方低剂量组(HQ+0.8 g/kg FHB组)、红花补蒺方中剂量组(HQ+2.4 g/kg FHB组)、红花补蒺方高剂量组(HQ+7.2 g/kg FHB组)。利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胆碱酯酶(CHE)、白介素-6(IL-6)和酪氨酸酶(TYR)的表达,苏木精-伊红染色(HE)实验检测病变皮肤中表皮增生程度,毛囊和黑色素颗粒的数量变化。结果网络药理学结果表明复方红花补蒺颗粒中的核心成分为木犀草素(luteolin)、汉黄芩素(wogonin)和槲皮素(quercetin),其核心治疗靶点为RELA、STAT3和AKT1。此外,复方红花补蒺颗粒可能通过JAK-STAT和NF-κB等信号通路共同治疗白癜风。HE染色结果显示,与模型组相比,HQ+0.8 g/kg FHB组、HQ+2.4 g/kg FHB组和HQ+7.2 g/kg FHB组小鼠病变皮肤表皮均增生减轻,毛囊和黑色素颗粒均增加。ELISA结果显示,与模型组相比,HQ+0.8 g/kg FHB组、HQ+2.4 g/kg FHB组和HQ+7.2 g/kg FHB组小鼠血清中TNF-α、IL-6和CHE含量均显著降低(P<0.05),TYR含量均显著升高(P<0.01)。结论复方红花补蒺颗粒通过多成分、多靶点、多通路结合来发挥抗炎、促黑的作用。

关键词：网络药理学复方红花补蒺颗粒炎症白癜风小鼠

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ATF4在内质网应激调控成骨分化中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第1期36卷 29-35页

作者：黄媚陈熙邹军上海体育学院运动科学学院上海200438 温州医科大学体育科学学院浙江温州325035

为避免内质网中未折叠蛋白质的过度累积,真核细胞能激活一系列信号通路来维持内质网稳态,这个过程称为内质网应激。在骨生长发育中,适宜的内质网应激有助于成骨细胞、破骨细胞和软骨细胞的生长,可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化... 详细信息

为避免内质网中未折叠蛋白质的过度累积,真核细胞能激活一系列信号通路来维持内质网稳态,这个过程称为内质网应激。在骨生长发育中,适宜的内质网应激有助于成骨细胞、破骨细胞和软骨细胞的生长,可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。而过度的内质网应激会抑制成骨分化,严重的甚至导致骨质疏松、成骨不全等相关骨病的发生。内质网应激时可激活未折叠蛋白质反应,其主要是通过PERK/eIF2α/ATF4信号通路,上调转录激活因子4(ATF4)的表达。ATF4位于许多成骨分化调节因子的下游,是促进成骨分化的关键因子,在内质网应激对成骨分化的调节中发挥重要作用。在成骨分化过程中,适宜的内质网应激能通过激活PERK信号通路,诱导ATF4表达增加,进而上调骨钙素、骨涎蛋白等成骨所必需基因的表达,促进成骨分化。过度的内质网应激会激活ATF4/CHOP促凋亡途径,并导致Bax、胱天蛋白酶等凋亡信号分子的大量产生,进而导致细胞凋亡,抑制成骨分化。由于ATF4在ERS和成骨分化中的重要作用,ATF4在骨质疏松、成骨不全等骨相关疾病的治疗中具有重要意义。本文通过综述ATF4在内质网应激调控成骨分化中的作用机制,为相关骨性疾病治疗提供理论依据。

关键词：内质网应激转录激活因子4(ATF4) 成骨分化凋亡

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载阿司匹林的含锶α—半水硫酸钙/纳米羟基磷灰石复合材料生物学性能及成骨相关实验研究

载阿司匹林的含锶α—半水硫酸钙/纳米羟基磷灰石复合材料生物学...

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作者：江艺南方医科大学

学位级别：博士

研究背景:骨缺损,尤其是临床上临界性骨缺损的治疗,仍然是临床上的非常棘手的个问题,目前临床上治疗临界性骨缺损的重要手段之一就是使用骨移植替代技术植入骨移植替代材料,从而对骨缺损进行修复,虽然新技术、新材料都层出不穷,但仍没... 详细信息

研究背景:骨缺损,尤其是临床上临界性骨缺损的治疗,仍然是临床上的非常棘手的个问题,目前临床上治疗临界性骨缺损的重要手段之一就是使用骨移植替代技术植入骨移植替代材料,从而对骨缺损进行修复,虽然新技术、新材料都层出不穷,但仍没有大家公认的最好的治疗临界性骨缺损的骨移植替代材料,故研发新型的骨移植替代材料一直在路上。本实验室最初研究并获得含锶a-半水硫酸钙(Sr-α-CSH),含锶硫酸钙其在保持硫酸钙良好生物性能(生物相容性、骨传导性)的同时,由于锶离子的加入,材料具有一定的骨诱导性,但随着锶离子的浓度的升高,其降解速率上升是存在的一大缺陷,后期针对这一缺陷,本实验尝试将纳米羟基磷灰石(n-HA)与Sr-α-CSH进行复合,经过一系列的实验验证,最后得到一种生物性能更好的复合材料---即Sr-α-CSH/n-HA复合材料。该Sr-α-CSH/n-HA复合材料生物相容性良好且兼具骨诱导性和骨传导性,并且该复合材料的降解性能较Sr-α-CSH有明显提升,但该Sr-α-CSH/nHA复合材料随着含锶浓度的增高,材料抗压强度明显下降,骨支撑效果相对减弱,且该材料骨缺损的修复能力相比Sr-α-CSH虽然有明显的提升,但仍不能满足临床要求,为了解决这一系列问题,我们尝试载入一种合适的药物来增强其成骨能力,同时减少含锶浓度过高带来的弊端,以期获得一种性能更好的骨移植替代材料。阿司匹林,是一种用于治疗人类疾病100多年的合成化合物,是一种非常流行的解热、抗炎、镇痛药物。最近,不少研究人员发现阿司匹林对骨骼健康有一定的作用,阿司匹林可以促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,抑制骨髓间充质干细胞的成脂分化,并且可以激活成骨细胞活性,抑制破骨细胞的活性,从而导致骨形成的增加。此外,研究表明,阿司匹林对骨髓微环境也有一定的改善作用,故而本研究尝试通过相关工作,将阿司匹林载入我们前期研究所得的含锶α-半水硫酸钙(Sr-α-CSH)与纳米羟基磷灰石(nHA)复合材料,形成一种载阿司匹林的Sr-α-CSH/nHA复合材料,以期获得一种性能更好的临界性骨缺损的骨修复材料。研究方法:1.载阿司匹林的Sr-α-CSH/nHA复合材料的制备及相关属性检测水热法及共沉淀制备含锶浓度为5%的α-半水硫酸钙(Sr-α-CSH),用蒸馏水配制不同浓度的阿司匹林溶液,然后5%的含锶α-半水硫酸钙与纳米羟基磷灰石按固定质量混合均匀后以固定的液固比用不同浓度的阿司匹林溶液调匀(阿司匹林浓度为50vg/ml、200vg/ml、800vg/ml以及3200vg/ml)、使用磨具制作得到相应的复合材料样品,样品呈圆柱状。随后进行物理特性和表征的检测:X线衍射分析(XRD)、傅里叶红外光谱分析(FT-IR)、抗压强度测试(CST)、电镜(SEM)。2.载阿司匹林的含锶α-半水硫酸钙(Sr-α-CSH)与纳米羟基磷灰石(nHA)复合材料对SD大鼠BMSCs增殖、分化及迁移能力的影响按照国际统一标准制备载不同浓度的阿司匹林的Sr-α-CSH/n-HA复合材料浸提液,第二代的BMSCs用浸提液进行干预,浸提液对BMSCs的增殖能力的影响使用CCK-8法进行检测,浸提液对BMSCs迁移能力的影响用划痕实验来评定。浸提液处理后的BMSCs的成骨相关基因(ALP、BSP、RUNX2)的表达使用实时定量PCR(qRT-PCR)来检车,浸提液对BMSCs成骨矿化的影响使用茜素红染色进行分析。3.载不同浓度阿司匹林的Sr-α-CSH/n-HA的复合材料修复临界性骨缺损。我们采用的骨缺损模型为SD大鼠胫骨中段临界性骨缺损模型,分别使用单纯的Sr-α-CSH/n-HA复合材料及含3种不同浓度阿司匹林的Sr-α-CSH/n-HA复合材料填充骨缺损。通过影像学(X线、Micro CT)以及组织形态学染色(HE染色、goldncr三色染色、免疫组织化学染色(OCN、OST、RUNX2)、破骨细胞抗洒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)等方法评估载不同浓度阿司匹林的Sr-α-CSH/n-HA复合材料对大鼠临界性骨缺损的修复的效果。结果:***和FT-IR分析结果显示载不同浓度阿司匹林的Sr-α-CSH/n-HA复合材料与单纯Sr-α-CSH/n-HA复合材料相比,其主要成分的晶体特性未见显著变化。SEM观察结果显示:载阿司匹林的Sr-α-CSH/n-HA复合材料仍然呈多孔状、材料表面较为粗糙,晶体紧密结合。CST结果显示载各浓度阿司匹林的Sr-α-CSH/n-HA 复合材料与单纯 Sr-α-CSH/n-HA 复合材料相比,其抗压强度未有显著差异,且各实验组抗压强度均高于正常松质骨。***-8和划痕实验结果显示载适宜浓度的阿司匹林(50vg/ml、200vg/ml、800vg/ml)的骨材料相比于单纯Sr-α-CSH/n-HA

关键词：阿司匹林锶硫酸钙纳米羟基磷灰石骨传导性骨诱导性骨移植替代物

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m6A甲基化调控骨肉瘤的研究进展

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中国细胞生物学学报 2020年第11期42卷 2045-2051页

作者：黄媚陈熙邹军上海体育学院运动科学学院上海200438 温州医科大学体育科学学院温州325035

骨肉瘤是常见的骨恶性肿瘤,其高复发、高转移率及化疗耐药等问题增加了骨肉瘤的治疗难度。m6A甲基化是哺乳动物中最常见的RNA修饰,在不改变碱基序列的情况下调控基因转录后的表达。它主要通过甲基化转移酶、甲基化阅读蛋白、去甲基化酶... 详细信息

骨肉瘤是常见的骨恶性肿瘤,其高复发、高转移率及化疗耐药等问题增加了骨肉瘤的治疗难度。m6A甲基化是哺乳动物中最常见的RNA修饰,在不改变碱基序列的情况下调控基因转录后的表达。它主要通过甲基化转移酶、甲基化阅读蛋白、去甲基化酶这三类蛋白参与许多生物学过程和疾病的发生。目前已证实,多种基因的m6A甲基化与骨肉瘤的发生、发展密切相关。该文就m6A甲基化与骨肉瘤关系的研究进行综述,旨在为骨肉瘤的治疗提供新方向。

关键词： m6A甲基化骨肉瘤调控

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植物microRNA跨界调控作用

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中国生物化学与分子生物学报 2023年第12期39卷 1685-1695页

作者：陶涵金陈冉高崎上海中医药大学中药学院上海201203 上海上药杏灵科技药业股份有限公司上海201703

MicroRNAs(miRNAs)是一类19~24个核苷酸的非编码内源性小分子RNA,功能研究表明,miRNAs参与所有细胞过程的调节,包括生长发育、分化凋亡、炎症、免疫应答、代谢及信号转导等生物学过程。最近研究发现,植物miRNAs作为一类功能广泛的分子... 详细信息

MicroRNAs(miRNAs)是一类19~24个核苷酸的非编码内源性小分子RNA,功能研究表明,miRNAs参与所有细胞过程的调节,包括生长发育、分化凋亡、炎症、免疫应答、代谢及信号转导等生物学过程。最近研究发现,植物miRNAs作为一类功能广泛的分子调控因子,不仅调控植物自身基因的表达,外源植物miRNAs还通过饮食进入到哺乳动物细胞中,调节某些与人类疾病治疗相关的基因或生物学过程。一些植物miRNAs由于其3′端存在2′-O-甲基化修饰、独特茎环结构、高GC含量以及微囊泡、RNA结合蛋白或外泌体样纳米颗粒等载体对其的保护作用,从而在食物加工与极端胃肠道环境中能保持高度稳定。植物miRNAs主要通过饮食获取,借助跨膜miRNA转运蛋白质、受体介导的内吞作用、肠上皮细胞间隙扩散、肠道微生物群脂质依赖性摄取等不同的转运机制,其被消化系统吸收后进入体循环并递送至器官组织,再调节受体细胞功能。本文综述了植物来源miRNAs的跨界调控研究现状,详细总结了植物miRNAs抵抗降解的可能方法、跨越胃肠道屏障的转运机制以及被摄入后在哺乳动物体内的调控作用,例如抗炎、抗病毒和抗肿瘤等相关发现,揭示植物miRNAs在基于RNA的分子治疗以及开发新的治疗药物等方面具有很高的应用潜力。

关键词： miRNAs 植物跨界调控稳定性

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利用肝癌外泌体发现lnc85标志物及传递Cu-Cy纳米光敏剂的研究

利用肝癌外泌体发现lnc85标志物及传递Cu-Cy纳米光敏剂的研究

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作者：黄雪静广西医科大学

学位级别：博士

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范围内的恶性肿瘤之一。在中国具有相对较高的发病率和病死率,2015年HCC新发病例和死亡病例数分别为466,100和422,100例。临床上,由于缺乏特异性的生物标志物和明显的临床症状,大多数HCC... 详细信息

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范围内的恶性肿瘤之一。在中国具有相对较高的发病率和病死率,2015年HCC新发病例和死亡病例数分别为466,100和422,100例。临床上,由于缺乏特异性的生物标志物和明显的临床症状,大多数HCC患者在被确诊时已处于肝癌晚期,超过80%的患者出现预后不良。另外由于肝癌的复发和转移,目前应用于临床的治疗方法都存在一定的局限性,且治疗效果难以尽如人意。因此,研究与HCC发病和发展有关的分子机制从而发现新的治疗靶点,同时研发新的有效的治疗手段迫在眉睫。外泌体是由多种类型细胞分泌,粒径在30～150 nm之间的囊泡样小体。它包含有供体母细胞的多种蛋白质和核酸物质(包括DNA和RNA),通过作为细胞间通讯的介质参与多种生物学过程,如细胞增殖、迁移和凋亡活动等。其内含物与机体的病理及生理状态密切相关。有研究表明,外泌体在疾病,尤其是在癌症的起源和发展中起着重要作用,是癌症恶性进展的重要参与者。因此分析循环外泌体中的内含物、揭示HCC发生发展的分子机制,有助于发现新的治疗靶点、开发疾病的生物标志物。近年来,循环外泌体中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)越来越受到关注。lncRNA为一种不具备蛋白编码功能的RNA,可以参与细胞迁移,增殖和凋亡过程的调控,在人类疾病中发挥着关键性的作用,尤其是在癌症形成和发展的过程中。近10年来,随着研究的不断深入,许多学者揭示了lncRNA在HCC的发生、发展和转移中的作用,使其被广泛关注并逐渐发展成为一个高度活跃的研究热点。但仅有少数lncRNA的分子功能得到充分的挖掘,绝大部分的lncRNA的功能未得到鉴定和注释。此外,由于外泌体与其供体细胞间的特异性亲和性,及其天然的生物相容性,是治疗性药物递送的理想载体。目前,已有研究者成功运用外泌体作为癌症化疗药物的载体进行肿瘤的靶向治疗。除运载传统化学药物外,外泌体还可作为一些新型药物的载体。铜胺纳米材料(Copper-cysteamine,Cu-Cy NPs)是一种新型的光敏剂,它在紫外光、X射线及微波的激发下可以产生红光,是实现光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)的主要因素之一。PDT由于低毒、低创、易操作及良好的重现性,成为传统手术和化疗理想的替代方式。PDT主要通过由光激活的光敏剂与组织细胞中存在的氧分子发生反应,产生细胞毒性的活性氧继而引发目标细胞的凋亡而达到治疗目的。目前Cu-Cy NPs的PDT应用仍然处于研究的早期阶段,其生物毒性、光动力反应性以及生物递送途径还未得到充分的评估。本研究包括两部分内容:第一部分,利用肝癌外泌体发现lnc85标志物及相关作用机制研究;第二部分,Cu-Cy新型纳米光敏剂的抗肝癌及外泌体传递效应的研究。在第一部分,主要对HCC循环外泌体中lncRNA的表达特征进行描述,探索其参与HCC发生、发展的分子机制,并评估其作为HCC血清生物标志物的潜在价值;第二部分,通过体内试验和体外试验探讨Cu-Cy NPs在HCC的光动力学治疗中应用的可能性,并探索外泌体作为Cu-Cy NPs运送载体的可能。第一部分:利用肝癌外泌体发现lnc85标志物及相关作用机制研究目的:探索循环外泌体中的lncRNA的表达特征,探索lncRNA参与HCC发生发展的分子机制,并评估其作为HCC血清生物标志物的潜在价值。方法:1.外泌体抽提试剂盒提取4例肝细胞癌患者和6例健康对照者血浆中的外泌体,并通过RNA全转录本测序检测两组血浆外泌体中差异表达的lncRNA和mRNA。2.与包含有34种细胞基因转录本信息的开放数据库进行对比,综合描述HCC患者血浆外泌体中lncRNA和mRNA的相对表达特征。3.超高速离心法提取HepG2和Huh7细胞培养上清中的外泌体并采用Nanosight、TEM和Western blot进行验证.。4.选取血浆外泌体中差异表达量显著升高的lncRNA进行细胞和细胞外泌体的qRT-PCR验证,确定候选差异表达lncRNA。5.针对候选lncRNA设计siRNA,通过siRNA转染HL-7702,HepG2和Huh7细胞,采用CCK-8试剂盒、Transwell试验和流式细胞术检测候选lncRNA对细胞增殖、迁移、以及凋亡的影响,选择对肝癌细胞行为学影响明显的RP11-85G21.1(lnc85)做进一步研究。6.通过Ensembl、LNCipedia version和lncLocator数据库查询lnc85的基因组定位、具体序列信息、序列长度、亚细胞定位等基本信息;并通过靶基因预测网站RegRNA预测lnc85的靶向microRNA。***-PCR检测lnc85抑制前后HL-7702,He

关键词：肝细胞癌血浆外泌体长链非编码RNA RP11-85G21.1 miR-324-5p 肝细胞癌光动力学治疗铜胺纳米材料光敏剂

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GCH1基因新突变对多巴反应性肌张力障碍的致病作用及机制研究

GCH1基因新突变对多巴反应性肌张力障碍的致病作用及机制研究

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作者：刘华圳广州医科大学

学位级别：硕士

目的：　　在前期临床工作中，本实验室发现一个携带GCH1基因***117Arg新发错义突变的家系，其中先证患儿及其母亲均为该新发突变的杂合子，患儿表现为抬头无力、运动发育迟缓等多巴反应性肌张力障碍（DRD）的典型症状，而患儿母亲无相... 详细信息

目的：　　在前期临床工作中，本实验室发现一个携带GCH1基因***117Arg新发错义突变的家系，其中先证患儿及其母亲均为该新发突变的杂合子，患儿表现为抬头无力、运动发育迟缓等多巴反应性肌张力障碍（DRD）的典型症状，而患儿母亲无相关症状。GCH1基因编码GTP环化水解酶（GTPcyclohydrolase1,GTPCH）,GTPCH是四氢生物喋呤（tetrahydrobiopterin,BH4）生成途径中的起始酶和限速酶，而BH4则是多巴胺合成途径中不可缺少的辅酶。因此GCH1基因突变所致GTPCH缺陷症可引起DRD等症状。为明确GCH1基因***117Arg新发错义突变是否为致病突变及其对多巴反应性肌张力障碍的致病作用及机制，本论文利用CRISPR/Cas9技术建立了一种模拟人类GCH1基因***117Arg错义新突变小鼠模型，对其表型及基因表达、相关代谢产物进行了分析，并进行了多巴补充治疗实验，探究该新突变是否致病并揭示GTPCH缺陷症的分子致病机制。　　方法：　　（1）我们利用CRISPR/Cas9技术建立模拟患者GCH1基因***117Arg错义新突变小鼠模型，并观察分析野生、杂合、纯合三种基因型幼鼠的出生比例、生存曲线及生长情况;（2）进行翻正反射试验、后肢悬吊试验、超声实验、前肢爪抓力实验等行为学试验评估突变小鼠运动、发声功能;（3）比较新突变小鼠肝脏、脑部Gch1基因mRNA、蛋白表达水平;利用HPLC技术对比GTPCH酶活、BH4水平、相关反应上游底物、下游产物水平，包括苯丙氨酸、酪氨酸、BH4、左旋多巴、多巴胺、5-羟色胺、5-羟色氨酸等含量;利用免疫组织化学技术比较分析三种基因型小鼠脑部TH蛋白表达水平是否有差异;（4）左旋多巴治疗实验，明确新突变小鼠模型对多巴治疗是否有反应性。　　结果：　　（1）本课题成功构建模拟人类GCH1基因***117Arg错义突变的小鼠***108Arg（c.323T＞G）点突变敲入模型，纯合突变（Gch1KI/KI）小鼠出生比例下降约50%，所有Gch1KI/KI均在出生后19日内均夭折。（2）Gch1KI/KI幼鼠表现出与患者类似的婴儿期发病运动、发声障碍，而在杂合子(Gch1KI/+)中未曾观察到这样明显的症状。（3）突变小鼠Gch1基因在mRNA、蛋白水平的表达均无明显差异，但纯合子中的GTPCH酶活性降低。在纯合子小鼠的肝脏、脑部中均观察到BH4缺乏和苯丙氨酸累积的现象。在大脑中的代谢紊乱较肝脏更严重。纯合子脑部中包括多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素等神经递质明显降低。（4）对纯合子进行苄丝肼-左旋多巴联合治疗，虽然不能根治其症状，但能延长纯合子的平均存活时间，说明该动物模型对多巴治疗具有反应性，符合DRD疾病特点。　　结论：　　本研究明确了GCH1基因新突变***117Arg为致病突变，其遗传方式为隐性遗传。本研究成功构建首个可存活的模拟人类隐性遗传GTPCH缺陷症临床表现的突变小鼠模型。Gch1KI/KI小鼠脑部有严重的BH4缺乏及苯丙氨酸累积，提示脑部更容易受GCH1基因突变所致BH4缺乏症影响。

关键词：多巴反应性肌张力障碍 GCH1基因 GTP环化水解酶1缺陷

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miR-181α-5p对广州管圆线虫排泄分泌蛋白所致小鼠小胶质细胞凋亡的调控机制研究

miR-181α-5p对广州管圆线虫排泄分泌蛋白所致小鼠小胶质细胞凋亡...

引用

作者：刘菊梅南方医科大学

学位级别：硕士

一、研究背景广州管圆线虫(Awgiostrowgylus cantowensis,AC)是1935年由陈心陶教授在广州家鼠体内首次发现并命名。该虫于1945年确定为人类病原体,其幼虫能打破血脑屏障进入脑内,造成严重的中枢神经系统感染性疾病,例如嗜酸性粒细胞性... 详细信息

一、研究背景广州管圆线虫(Awgiostrowgylus cantowensis,AC)是1935年由陈心陶教授在广州家鼠体内首次发现并命名。该虫于1945年确定为人类病原体,其幼虫能打破血脑屏障进入脑内,造成严重的中枢神经系统感染性疾病,例如嗜酸性粒细胞性脑膜炎或脑膜脑炎(Eosinophilic meningitis,EM)。广州管圆线虫分布于热带和亚热带,主要流行于东南亚地区、太平洋岛屿、日本和美国。我国主要在台湾、香港、广东、浙江、福建、海南、天津、黑龙江、辽宁、上海、湖南、北京和云南等地流行。广州管圆线虫的终宿主为鼠类,中间宿主主要是软体动物,如褐云玛瑙螺或蛞蝓。广州管圆线虫1期幼虫可在中间宿主发育至感染期幼虫。人类和小鼠是其非适宜宿主,通过生食或半生食感染了广州管圆线虫的螺肉或有寄生虫污染的蔬菜感染。迄今为止,全世界已有3000多例病例报道,多数呈散在分布,但也有群体暴发流行的报道。近年来人们饮食习惯改变,加之淡水螺在我国南方地区的区域性扩散,广州管圆线虫病已成为我国部分地区最具潜在危险的食源性寄生虫病之一。广州管圆线虫病是一种幼虫移行症,能引起多个器官损伤。其幼虫在体内移行,通过肠壁、肝、肺、脑时可引起一系列机械性损伤,此外,其分泌物、代谢产物具有毒性作用。最严重的是3期幼虫可侵犯中枢神经系统,引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎或脑膜炎。此病以脑脊液中嗜酸性粒细胞显著升高为特征,病变可发生在大脑,脑膜,还可波及小脑,脑干和脊髓,脑神经和脊神经也可受累。研究表明,虫体进入中枢神经系统后,小胶质细胞被激活,并下调免疫系统反应,分泌抗炎症因子,从而调节其自身的凋亡。进一步研究小胶质细胞在嗜酸性粒细胞性脑膜炎或脑膜脑炎中的作用,将为广州管圆线虫病的临床治疗提供新的策略。MicroRNAs是一种非常丰富的保守的小型非编码RNA,它通过与信使RNA的抑制性结合或加速信使RNA的降解来调控基因的转录后表达。据报道,在感染性疾病中(包括寄生虫疾病),一些miRNAs在宿主免疫反应中通过调节凋亡发挥作用。在我们之前的研究中,总共有25个miRNA在对照组和广州管圆线虫感染组之间有差异表达,其中miR-181a-5p是唯一下调的。miR-181a-5p,是大多数脊椎动物中高度保守的miRNA,脑中含量丰富,在海马神经元的成熟过程中表达量增加。miR-181a-5p参与了细胞生物学的许多过程,如细胞命运决定和细胞侵袭。本研究中,我们检测了广州管圆线虫感染后小鼠脑组织和广州管圆线虫幼虫的排泄分泌蛋白(ESP)刺激小胶质细胞后miR-181a-5p及其预测靶基因bcl-2的表达水平,并通过上调或下调其表达来进行验证。同时进行流式细胞术,检测细胞凋亡情况。发现:广州管圆线虫感染和ESP刺激后,小鼠脑组织和小胶质细胞内miR-181a-5p的表达下调,其靶基因bcl-2的表达上调;ESP能促进小胶质细胞的凋亡,且与bcl-2/bax的比值呈负相关;转染miR-181a-5pantagomir能增加小胶质细胞bcl-2的表达,同时抑制由ESP引起的细胞凋亡。二、目的研究广州管圆线虫感染后是如何通过miR-181a-5p来调节其靶基因,从而调控细胞凋亡,进而影响感染性疾病的进程,为更好了解广州管圆线虫感染致的分子机制提供基础。三、方法1.实验动物及ESP的准备实验室感染广州管圆线虫的SD大鼠在实验室经双岐螺和大鼠之间两代循环成为稳定的实验室虫株。6-8周BALA/c小鼠每只灌胃30条三期(感染期)幼虫,其中一部分小鼠21天后从感染小鼠脑内获取幼虫,经培养获得广州管圆线虫排泄分泌蛋白。另一部分分别在感染0天、7天、14天、21天、24天后处死,获得脑组织并提取RNA和蛋白。***-181a-5p agomir/antagomir转染miR-181a-5pagomir/antagomir及其阴性对照转染小鼠小胶质细胞MG-N9,采用瞬时转染的方法。***刺激小胶质细胞通过培养获得幼虫的排泄分泌蛋白ESP,用含有50μg/ml ESP的培养基培养小胶质细胞,并同时进行转染处理,收集不同刺激时间后的细胞,提取细胞总RNA和蛋白。***-time PCR检测miR-181a-5 表达水平本实验采用SYBR Grenn染色法在Applied Biosystem 7500检测系统上对样品进行相对定量Real-time PCR,U6作为内参。***-time PCR检测bcl-2表达水平本实验采用GoScriptTMReverse Transcription System合成试剂盒进行逆转录,用 SYBRTM Select Master Mix 检测 bcl-2 的表达水平,glyceraldehyde-3-phosphate dehydroge

关键词：广州管圆线虫 miR-181a-5p bcl-2 细胞凋亡

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