检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2009年第1期25卷 147-151页

作者：黄晋江吴宏宇张继恩黄青山上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

溶葡萄球菌酶能够特异性杀灭金黄色葡萄球菌且不易产生耐药性,有望成为治疗葡萄球菌属细菌引发感染的特效药物。为获得高纯度的重组溶葡萄球菌酶以达到药用标准,本研究构建了一种以重组溶葡萄球菌酶单克隆抗体为配体的亲和层析纯化方法... 详细信息

溶葡萄球菌酶能够特异性杀灭金黄色葡萄球菌且不易产生耐药性,有望成为治疗葡萄球菌属细菌引发感染的特效药物。为获得高纯度的重组溶葡萄球菌酶以达到药用标准,本研究构建了一种以重组溶葡萄球菌酶单克隆抗体为配体的亲和层析纯化方法。纯化后的重组溶葡萄球菌酶纯度大于95%,得率大于90%,即使重复使用30多次,纯化效率不变。且经比色法鉴定纯化后的重组溶葡萄球菌酶仍具有良好的活性。该方法步骤简单,纯化效果好,为生产高纯度重组溶葡萄球菌酶奠定了基础。

关键词：溶葡萄球菌酶单克隆抗体亲和层析

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抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组溶葡萄球菌酶研究

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生物工程学报 2007年第1期23卷 117-121页

作者：黄青山张继恩吴宏宇莫云杰复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206

用重组溶葡萄球菌酶免疫家兔获得抗血清，经亲和层析纯化后用HRP标记，以双向免疫扩散法确定抗血清效价。以Western blot鉴定抗体的特异性，建立双抗夹心法标准曲线，鉴定其最小检出限、精确度、回收率。实验显示多克隆抗体能与溶葡萄... 详细信息

用重组溶葡萄球菌酶免疫家兔获得抗血清，经亲和层析纯化后用HRP标记，以双向免疫扩散法确定抗血清效价。以Western blot鉴定抗体的特异性，建立双抗夹心法标准曲线，鉴定其最小检出限、精确度、回收率。实验显示多克隆抗体能与溶葡萄球菌酶特异性结合，双抗夹心ELISA法检测抗原的最小检出限为0．98ng／mL，标准曲线在0．98～500ng／mL范围内线性良好。3份同批样本分别重复6次测定，平均批内变异系数为6．4％；3份不同批样本分别重复6次测定，平均批间变异系数为6．5％。血清中加入已知量的标准抗原，测得平均回收率为98．6％。此法检测重组溶葡萄球菌酶的可测范围广，灵敏度和精密度高，变异系数较小。结果证实建立的检测血清中重组溶葡萄球菌酶含量的双抗夹心酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent asaay，ELISA）灵敏、准确、可靠。

关键词：溶葡萄球菌酶多克隆抗体酶联免疫吸附测定法

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APOBEC3家族蛋白的进化分析和3D结构比对分析

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复旦学报（自然科学版） 2008年第5期47卷 612-619,F0003页

作者：顾卫国吴宏宇劳亭嘉黄青山复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206

为探寻HIV-1的种间传播路线与范畴进而发现有效的控制物,选取灵长类天然抗病毒因子APOBEC3家族的22种蛋白(以A3G为主)与17例灵长类线粒体(mtDNA)全基因组序列做进化分析研究.结果一致显示除黑猩猩(Pan troglodytes troglodytes,以下简称... 详细信息

为探寻HIV-1的种间传播路线与范畴进而发现有效的控制物,选取灵长类天然抗病毒因子APOBEC3家族的22种蛋白(以A3G为主)与17例灵长类线粒体(mtDNA)全基因组序列做进化分析研究.结果一致显示除黑猩猩(Pan troglodytes troglodytes,以下简称Pan),大猩猩(Gorilla)以外,猩猩(Pongo)中的某些种也可能是HIV/SIV的贮主或宿主,值得从实践中有目的追溯.不同种属A3G蛋白活性位点与Zn2+结合位点的3D结构比较结果显示人与其他灵长类物种极为相似,预示着A3G蛋白在结构和功能上是非常保守的.人的APOBEC3蛋白有A^H 7种,对它们的活性位点和Zn2+结合位点进行3D比较,hA3B与hA3G的重合度最好,hA3B不会被HIV-1的Vif作用与降解,提示进一步探讨hA3B的结构与功能对于控制HIV-1的感染与传播很重要.

关键词： HIV-1 SIV APOBEC3家族蛋白 mtDNA贮主进化分析

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25株SIV/HIV的进化分析及意义

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复旦学报（自然科学版） 2006年第3期45卷 303-308,315页

作者：袁伟吴宏宇黄青山复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206

选取了16株SIV和9株HIV毒株,以人T细胞白血病病毒HTLV-1为outgroup,使用CLUSTAL X、PHYLIP及MEGA三种软件对它们的基因组序列及三个主要蛋白(Env,Gag,Pol)序列分别进行了比对分析,用Neighbor-Joining(N-J)方法和Maximum Likelihood(ML)方法分别构建出进化树.结果显示HIV起源于SIV,其中HIV-1的起源与SIVcpz的几种亚型高度相关,HIV-2的起源与SIVsm及SIVmm高度相关.

关键词： SIV HIV 进化分析 Neighbor-Joining方法 Maximum Likelihood方法

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重组溶葡萄球菌酶在烧伤患者的人体药代动力学

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中国新药杂志 2012年第16期21卷 1864-1866+1877页

作者：杨菲菲熊玉卿夏春华莫云杰张继恩李国栋陆婉英黄青山复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室南昌大学医学院临床药理研究所上海高科联合生物技术研发有限公司

目的:研究重组溶葡萄球菌酶(recombinant lysostaphin,rLysn)在深Ⅱ°烧伤患者创面给药后的药代动力学。方法:23例符合入组标准的深Ⅱ°烧伤患者创面外敷rLysn,单次给药(0.8×104～3.2×***-2)和多次给药(2.4×104... 详细信息

目的:研究重组溶葡萄球菌酶(recombinant lysostaphin,rLysn)在深Ⅱ°烧伤患者创面给药后的药代动力学。方法:23例符合入组标准的深Ⅱ°烧伤患者创面外敷rLysn,单次给药(0.8×104～3.2×***-2)和多次给药(2.4×104和3.2×***-2)后,定时采血,以双抗夹心酶联免疫吸附法检测血药浓度。结果:所有受试者创面外敷给予rLysn后血浆中rLysn的浓度均低于本分析方法的定量下限2.8 ***-1。结论:深Ⅱ°烧伤患者创面单次(0.8×104～3.2×***-2)和多次(2.4×104和3.2×***-2)给予rLysn,药物入血浓度低于检测限。

关键词：重组溶葡萄球菌酶药代动力学双抗夹心酶联免疫吸附试验

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抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体的制备与鉴定

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生物技术通报 2009年第S1期25卷 352-355页

作者：吴宏宇黄晋江张继恩黄青山上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206 上海交通大学生命科学技术学院上海200240 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

为了制备抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体,合成了溶葡萄球菌酶(lysostaphin)分子的3-13位的11个氨基酸的多肽(THEHSAQWLN),并利用戊二醛双功能试剂将人工合成多肽成功地与KLH进行偶联,免疫新西兰兔制备抗lysostaphin合成多肽的抗体,并经... 详细信息

为了制备抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体,合成了溶葡萄球菌酶(lysostaphin)分子的3-13位的11个氨基酸的多肽(THEHSAQWLN),并利用戊二醛双功能试剂将人工合成多肽成功地与KLH进行偶联,免疫新西兰兔制备抗lysostaphin合成多肽的抗体,并经亲和层析进行了纯化。对此抗体进行鉴定的结果表明,抗溶葡萄球菌酶合成多肽抗体可与重组溶葡萄球菌酶分子发生特异性反应,并可用于蛋白免疫印迹。该抗体的制备为使用亲和层析纯化溶葡萄球菌酶提供了有用的配基。

关键词：溶葡萄球菌酶抗原性多肽多克隆抗体酶联免疫吸附测定法蛋白免疫印迹

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重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的性质研究

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生物技术通报 2011年第5期27卷 162-166页

作者：陆敏许黎明吴宏宇张继恩李国栋黄青山复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206 昆山博青生物科技有限公司昆山215300

溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶,已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染,但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据。现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研... 详细信息

溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶,已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染,但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据。现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究。检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑、杀菌活性。结果显示,重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状;并且重组溶葡萄球菌酶在39℃牛奶中可以稳定存放至少20 h以上,酶活性保持稳定;同时重组溶葡萄球菌酶在牛奶中对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌仍然保持了良好的抑杀菌效果。该研究为今后溶葡萄球菌酶用于奶牛乳腺炎的治疗提供参考依据。

关键词：重组溶葡萄球菌酶牛奶酶活性杀菌

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重组溶葡萄球菌酶对大鼠的毒性试验

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畜牧与兽医 2009年第4期41卷 24-27页

作者：张继恩史为民吴聪明沈建忠黄青山上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206 中国农业大学动物医学院北京100094 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

观察重组溶葡萄球菌酶经口给药对大鼠的急性毒性和长期毒性。急性毒性试验中,大鼠以每千克体重5 000 mg的剂量口服重组溶葡萄球菌,观察中毒症状并测定LD50。长期毒性试验中,大鼠以每天每千克体重口服72,360,1 800 mg重组溶葡萄球菌酶,... 详细信息

观察重组溶葡萄球菌酶经口给药对大鼠的急性毒性和长期毒性。急性毒性试验中,大鼠以每千克体重5 000 mg的剂量口服重组溶葡萄球菌,观察中毒症状并测定LD50。长期毒性试验中,大鼠以每天每千克体重口服72,360,1 800 mg重组溶葡萄球菌酶,连续给药180 d,观察给药后45 d、90 d、135 d和180 d时大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、组织病理变化。结果表明,重组溶葡萄球菌酶口服对大鼠的LD50大于5 000 mg/kg,长期毒性试验未见明显毒性反应。说明重组溶葡萄球菌酶在规定剂量下使用是安全可靠的。

关键词：毒性试验毒理学重组溶葡萄球菌酶

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BCTD:一个药物重定位研究用药物靶点数据库

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计算生物学 2015年第3期5卷 41-47页

作者：王克强吴宏宇李国栋黄青山复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海上海高科联合生物技术研发有限公司上海

新药研发具有周期长、成本高、风险大等特点,往往是漫长而艰难的。药物重定位,即发现原有药物的新适应症,可有效缩短周期、降低成本、规避风险,正在成为药物研发的重要策略。近些年药物重定位发展迅速,其中联合药物靶点相互作用信息和... 详细信息

新药研发具有周期长、成本高、风险大等特点,往往是漫长而艰难的。药物重定位,即发现原有药物的新适应症,可有效缩短周期、降低成本、规避风险,正在成为药物研发的重要策略。近些年药物重定位发展迅速,其中联合药物靶点相互作用信息和组学数据进行药物重定位是一种可行的方法。但是现有的众多药物靶点数据库中的部分药物靶点信息缺乏实验证明,而且大多存在或遗漏或冗余的现象,各库中信息亦采用不同命名规则,难以直接用作药物重定位研究。因此我们综合整理多个数据库内容和大量文献,排除缺乏实验证明的信息,并标准化所得信息,建立了一个全新的在线药物靶点数据库。该数据库现含有766个化合物、746个靶点和2862条药物/化合物和靶点相互作用的信息。该库的建立大大简化了研究人员查询与寻找药物靶点信息的流程,能够为药物重定位提供方向和线索。

关键词：靶点数据库药物重定位

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重组溶葡萄球菌酶成品中主药蛋白质含量的测定

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中国生化药物杂志 2006年第3期27卷 163-165页

作者：莫云杰李国栋陆海荣孙睿华黄青山上海高科联合生物技术研发有限公司上海201206 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

目的建立一种反相高效液相色谱法测定重组溶葡萄球菌酶成品中主药蛋白质的含量。方法Vydac C18柱（250mm×4．6mm，300A°，5μm），流动相A为0．1％三氟乙酸溶液，流动相B为三氟乙酸-乙腈（1：999）进行梯度洗脱，流速为1mL／... 详细信息

目的建立一种反相高效液相色谱法测定重组溶葡萄球菌酶成品中主药蛋白质的含量。方法Vydac C18柱（250mm×4．6mm，300A°，5μm），流动相A为0．1％三氟乙酸溶液，流动相B为三氟乙酸-乙腈（1：999）进行梯度洗脱，流速为1mL／min，进样量为20μL，检测波长为280nm。结果重组溶葡萄球菌酶在5～30μg范围内和峰面积之间具有很好的线性关系，相关系数为0．9998，多次测定的RSD〈10％，平均回收率为103．7％，RSD为1．46％。结论此方法可以用于重组溶葡萄球菌酶的含量测定。

关键词：重组溶葡萄球菌酶反相高效液相色谱法含量测定

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