检索结果-内蒙古大学图书馆

隆纳霉素引起三阴性乳腺癌细胞周期阻滞基因表达谱及关键通路的生物信息学分析

第二军医大学学报 2021年第6期42卷 585-595页

作者：薛佳兴孔杰卢小玲孙筱于豪冰梁珍珍徐尧邓博文焦炳华海军军医大学(第二军医大学)基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的利用生物信息学方法分析隆纳霉素对人三阴性乳腺癌细胞系细胞周期阻滞的作用机制。方法利用隆纳霉素处理人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞48、72 h,计算IC50,采用流式细胞术分析细胞周期变化。选取0.8μmol/L隆纳霉素处理48 h的M... 详细信息

目的利用生物信息学方法分析隆纳霉素对人三阴性乳腺癌细胞系细胞周期阻滞的作用机制。方法利用隆纳霉素处理人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞48、72 h,计算IC50,采用流式细胞术分析细胞周期变化。选取0.8μmol/L隆纳霉素处理48 h的MDA-MB-468细胞和未加药处理的对照细胞进行转录组测序,测序数据经质量控制过滤后,使用DESeq21.16.1软件进行差异表达基因分析,并进行基因本体和京都基因与基因组百科全书功能分析及基因集富集分析,用STRING工具进行蛋白质相互作用网络分析及用AutoDock 1.5.6软件进行分子对接预测。结果隆纳霉素干预MDA-MB-468细胞48、72 h的IC50分别为2.733和0.866μmol/L,且流式细胞术分析显示隆纳霉素干预48 h有明显G2/M阻滞作用。隆纳霉素干预后共筛选出1764个差异表达基因,主要定位于NF-κB介导的TNF-α通路和P53通路,G蛋白γ亚基7(GNG7)、G蛋白γ亚基11(GNG11)、C-X-C基序趋化因子配体8(CXCL8)、腺苷酸环化酶2(ADCY2)等基因可能是隆纳霉素作用基因网络中的关键节点。隆纳霉素与DNA分子、拓扑异构酶、基因表达调节蛋白[20S蛋白酶体β亚单位5(PSMB5)和含有SET结构域7的组蛋白赖氨酸甲基转移酶(SETD7)]有较好的结合及相互作用。结论隆纳霉素具有与蝴蝶霉素类似的功能,其通过与DNA-拓扑异构酶Ⅰ复合物中的DNA分子结合发挥抗肿瘤活性;还可通过与基因表达调节蛋白PSMB5和SETD7结合影响GNG7、GNG11、CXCL8、ADCY2等基因的表达水平,从而上调NF-κB介导的TNF-α通路和P53通路,最终导致乳腺癌细胞发生G2/M阻滞,发挥抗肿瘤作用。

关键词：隆纳霉素蝴蝶霉素类似物三阴性乳腺癌细胞周期阻滞

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腺相关病毒介导的高迁移率族蛋白1抗体基因转导治疗小鼠脓毒症的效果

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第二军医大学学报 2021年第3期42卷 249-254页

作者：孙立柱张晟马泽通林兆奋胡适海军军医大学(第二军医大学)长征医院急救科上海200433 上海交通大学医学院附属瑞金医院重症医学科上海200025 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院生物物理教研室上海200433

目的探讨腺相关病毒(AAV)介导的高迁移率族蛋白1(HMGB1)抗体基因转导对脓毒症的治疗效果。方法60只雌性C57小鼠随机平均分为2批,每批再分为AAV-HMGB1抗体组、AAV-对照-IgG组、生理盐水组,每组10只。AAV-HMGB1抗体组小鼠左侧股直肌肌内注... 详细信息

目的探讨腺相关病毒(AAV)介导的高迁移率族蛋白1(HMGB1)抗体基因转导对脓毒症的治疗效果。方法60只雌性C57小鼠随机平均分为2批,每批再分为AAV-HMGB1抗体组、AAV-对照-IgG组、生理盐水组,每组10只。AAV-HMGB1抗体组小鼠左侧股直肌肌内注射60μL AAV-HMGB1抗体病毒,AAV-对照-IgG组左侧股直肌肌内注射60μL AAV-对照-IgG病毒,生理盐水组左侧股直肌肌内注射60μL生理盐水,4周后对所有小鼠进行盲肠结扎穿孔手术制造脓毒症模型。第1批小鼠用于观察术后14 d生存率。第2批小鼠术后通过内眦静脉取血,检测血清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平,取心、肝、肺、肾、小肠组织制作病理切片。结果使用AAV-HMGB1抗体基因转导产生HMGB1抗体对小鼠有抗脓毒症保护效应,90%(9/10)的脓毒症小鼠存活到造模后第14天;而注射生理盐水和AAV-对照-IgG病毒的小鼠在造模后第14天存活者仅分别占60%(6/10)和50%(5/10)。相比生理盐水组和AAV-对照-IgG组,AAV-HMGB1抗体组小鼠血清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低(P均<0.05)。使用AAV-HMGB1抗体基因转导产生的HMGB1抗体对脓毒症小鼠的肺组织有明显保护作用,但对其他脏器的保护作用不明显。结论AAV介导的HMGB1抗体基因转导可通过高表达HMGB1抗体中和血清中的HMGB1,从而降低脓毒症小鼠的炎症因子水平,改善重要器官病理变化,并可能降低脓毒症小鼠死亡率,有望成为治疗脓毒症的新策略。

关键词：高迁移率族蛋白1 脓毒症炎症因子基因转导抗体治疗腺相关病毒

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噬菌体展示技术在全人源性抗体发现中的应用

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免疫学杂志 2023年第10期39卷 910-915页

作者：刘碧霞刘媛谢静郭郑斌王斌左钱飞张睿西南交通大学医学院成都610031 西部战区总医院检验科成都610083 陆军军医大学第二附属医院呼吸与危重症医学中心重庆400037 陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400038

噬菌体展示技术是目前应用最广泛的体外抗体筛选技术,它以噬菌体为载体,将外源抗体库基因插入到噬菌体衣壳蛋白基因中,在噬菌体表面表达衣壳蛋白的同时也展示了抗体分子。抗体药物因靶向优势在肿瘤免疫和病原生物感染中都发挥着重要作用... 详细信息

噬菌体展示技术是目前应用最广泛的体外抗体筛选技术,它以噬菌体为载体,将外源抗体库基因插入到噬菌体衣壳蛋白基因中,在噬菌体表面表达衣壳蛋白的同时也展示了抗体分子。抗体药物因靶向优势在肿瘤免疫和病原生物感染中都发挥着重要作用,是其成为医药研发领域热点的重要推动力。因此,本文对噬菌体展示技术的研发背景、基本原理、抗体库构建类型及抗体展示片段类型进行综述,并对基于噬菌体展示的全人源性抗体的最新进展和应用前景进行了展望。

关键词：噬菌体抗体展示技术全人源性抗体抗体库抗体筛选

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12周索磷布韦联合可洛派韦治疗慢性丙型肝炎的效果和安全性分析

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临床肝胆病杂志 2023年第3期39卷 539-545页

作者：张伟翟嵩杜虹景富春王丽梅张野亢必勃王九萍党双锁连建奇姜泓空军军医大学第一附属医院感染性疾病科西安710032 西安交通大学第二附属医院感染科西安710004 陕西省宝鸡市人民医院感染科陕西宝鸡721006 空军军医大学第二附属医院感染科西安710038 空军军医大学基础医学院微生物学与病原生物学教研室西安710032

目的分析索磷布韦联合盐酸可洛派韦12周方案治疗中国西北地区慢性丙型肝炎的效果和安全性。方法本研究纳入2021年7月1日—2021年12月31日空军军医大学第一附属医院、空军军医大学第二附属医院、西安交通大学第二附属医院、陕西省宝鸡... 详细信息

目的分析索磷布韦联合盐酸可洛派韦12周方案治疗中国西北地区慢性丙型肝炎的效果和安全性。方法本研究纳入2021年7月1日—2021年12月31日空军军医大学第一附属医院、空军军医大学第二附属医院、西安交通大学第二附属医院、陕西省宝鸡市中心医院4家医院的慢性丙型肝炎(CHC)接受索磷布韦(400 mg)联合盐酸可洛派韦(60 mg)治疗12周的101例患者,其中肝硬化13例,无肝硬化88例。无论是否有肝硬化、任何基因分型均未加用利巴韦林等其他抗病毒药物。提取患者基线、治疗12周及停药后12周的HCV RNA定量、肝生化指标等临床资料。主要评估治疗结束后12周持续病毒学应答(SVR12)和治疗12周时的安全性。其次评估治疗12周对肝生化指标的影响。不满足正态分布的计量资料采用M(P_(25)~P_(75))表示,两组间比较采用Mann-Whitney U检验。结果共101 例患者纳入分析,其中男性55例(54.5%),中位年龄53岁,12.8%有肝硬化,1.0%合并肝癌,3.0%为经治患者,3.0%合并有2型糖尿病。基因型分布:1型8%,2型60%,3型19%,6型6%,未检测基因型7%。101例患者经12周治疗HCV RNA均低于检测下限,SVR12达100%,与基线相比治疗12周血清ALT水平明显降低(P<0.05)。有阿托伐他汀钙、阿司匹林、二甲双胍、硝苯地平、双环醇、复方甘草酸苷等合并用药的患者为22.7%。任何不良事件发生率为16.8%,疲乏(12.9%)最常见。结论 12周索磷布韦联合盐酸可洛派韦治疗西北地区 CHC患者可获得较高的SVR12,抗病毒治疗安全性良好,治疗12周时患者血清ALT异常明显改善。

关键词：丙型肝炎慢性盐酸可洛派韦索磷布韦治疗结果

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菘蓝转录因子IiMYB的基因克隆及表达特征

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分子植物育种 2023年第8期21卷 2562-2569页

作者：马雪祺李姝诺张国宁李元玉陈万生肖莹孙连娜上海中医药大学中药炮制教研室中药研究所中药资源与生物技术中心上海201203 第二军医大学附属长征医院医疗保障中心上海200003

MYB转录因子在植物生长发育、次生代谢产物生物合成以及抗逆应激等多个方面发挥重要作用。为了研究菘蓝中特异MYB转录因子的表达特征,本研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆菘蓝中目标MYB转录因子编码基因IiMYB的全长c DNA并获得其... 详细信息

MYB转录因子在植物生长发育、次生代谢产物生物合成以及抗逆应激等多个方面发挥重要作用。为了研究菘蓝中特异MYB转录因子的表达特征,本研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆菘蓝中目标MYB转录因子编码基因IiMYB的全长c DNA并获得其基因组DNA序列,通过RT-qPCR检测IiMYB在四倍体菘蓝和二倍体菘蓝各器官以及不同胁迫条件下的表达情况。IiMYB的c DNA序列全长926 bp(GenBank登录号:DQ468346),含600 bp的开放阅读框(ORF),编码199个氨基酸,其对应的基因组DNA序列含有3个外显子和2个内含子。生物信息学分析表明IiMYB与拟南芥的AtMYBL2同源性最高,遗传距离最近,并仅含有一个myb域(R3)。IiMYB在两种倍性菘蓝的根茎叶中均有表达,其中叶中最高,且在四倍体中的表达水平均高于二倍体。胁迫因素高盐(NaCl)、茉莉酸甲酯(MeJA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)和水杨酸(SA)处理均能上调IiMYB的表达水平,而低温(4℃)处理对IiMYB的表达水平无显著影响。本研究首次从菘蓝植物中克隆得到MYB转录因子并进行了表达分析,为进一步阐明与MYB转录因子相关的四倍体菘蓝优良性状形成的分子机制提供一定基础,也为通过分子育种培育优质菘蓝品系提供了条件。

关键词：菘蓝(Isatis indigotica) MYB转录因子分子克隆生物信息学表达分析

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菘蓝中咖啡酸氧甲基转移酶IiCOMT的克隆与表达分析

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中草药 2022年第1期53卷 214-221页

作者：张国宁李元玉马雪祺李姝诺陈万生肖莹上海中医药大学中药研究所中药资源与生物技术中心上海201203 第二军医大学附属长征医院药学部上海200003 上海中医药大学中药炮制教研室上海201203

目的克隆菘蓝Isatis indigotica中咖啡酸氧甲基转移酶(I. indigotica fortune caffeic acid O-methyltransferase,IiCOMT)编码基因,并进行生物信息学及表达分析。方法采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆菘蓝IiCOMT的全长cDNA,进而通过PCR获得其基因组DNA序列。通过qRT-PCR检测IiCOMT在四倍体菘蓝和二倍体菘蓝各器官以及不同胁迫条件下的表达情况。结果 IiCOMT全长cDNA为1376 bp(GenBank登录号DQ115905),包含1个1092 bp的开放阅读框(open readingframe,ORF),编码363个氨基酸残基,其对应的DNA序列含有3个内含子,4个外显子。IiCOMT基因在2种倍性菘蓝的根茎叶均有表达,且四倍体菘蓝中的表达均高于二倍体。胁迫因素盐处理(NaCl)、冷处理(4℃)、水杨酸(salicylicacid,SA)、茉莉酸甲脂(methyl jasmonate,MeJA)、赤霉素(gibberellic acid,GA3)和脱落酸(abscisic acid,ABA)均能诱导IiCOMT表达水平上调。结论 IiCOMT的克隆及表达分析,为进一步阐明与咖啡酸氧甲基转移酶相关的四倍体菘蓝优良性状形成的分子机制奠定了基础。

关键词：菘蓝咖啡酸氧甲基转移酶基因克隆生物信息学表达分析

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结核分枝杆菌抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6和Rv2031c-Rv2626c重组腺病毒的构建及鉴定

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中国人兽共患病学报 2022年第3期38卷 191-195页

作者：王丽梅姜泓康健靳芊芊陕西省西安市空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 传染病诊疗中心空军医科大学附属第二医院西安710038

目的构建表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6(AE)和Rv2031c-Rv2626c(R2)的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗的研究奠定基础。方法体外合成人延长因子1α(EF1α)启动子DNA序列,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,... 详细信息

目的构建表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6(AE)和Rv2031c-Rv2626c(R2)的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗的研究奠定基础。方法体外合成人延长因子1α(EF1α)启动子DNA序列,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建含有CMV、EF1α双启动子的腺病毒穿梭载体。PCR扩增课题组前期构建的AE、R2融合蛋白基因,并依次亚克隆至上述腺病毒穿梭载体的CMV和EF1启动子下游,阳性重组穿梭质粒命名为pAd-AE-R2。将pAd-AE-R2与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装获得重组腺病毒,命名为Ad-AE-R2。RT-PCR法和间接免疫荧光法(IFA)对重组腺病毒表达的AE、R2融合蛋白的基因和蛋白表达水平进行鉴定。结果Ad-AE-R2瞬时转染的HEK293细胞中可转录表达AE、R2融合蛋白基因。IFA法采用Ag85B、ESAT-6、Rv2626c和Rv2031c 4种抗原的单克隆抗体可分别检测到Ad-AE-R2感染的巨噬细胞中具有特异性的绿色荧光,表明Ad-AE-R2能够在宿主细胞内表达AE、R2融合蛋白。结论成功构建并包装获得表达结核分枝杆菌多阶段抗原融合蛋白AE、R2的重组腺病毒,为其用于结核病新型疫苗研究奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌多阶段抗原 Ag85B ESAT-6 Rv2031c Rv2626c 重组腺病毒

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CD8^(+)CD103^(+)Trm细胞在胃癌中的分布、表型及其功能下降的机制研究

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第三军医大学学报 2021年第12期43卷 1146-1152页

作者：沈洋彭六生邱远邹全明马代远川北医学院附属医院肿瘤科四川南充637000 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院普外科重庆400037

目的探讨CD8^(+)CD103^(+)常驻记忆型T(Trm)细胞在胃癌患者组织中的分布情况,并研究其表型特征,分析胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能下降的机制。方法采用免疫组织化学染色检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并... 详细信息

目的探讨CD8^(+)CD103^(+)常驻记忆型T(Trm)细胞在胃癌患者组织中的分布情况,并研究其表型特征,分析胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能下降的机制。方法采用免疫组织化学染色检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并分析其与胃癌患者临床分期的相关性;流式细胞术检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的比例与数目、表型和功能;体外TGF-β1刺激培养CD8^(+) T细胞,分析其对CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能的影响。结果与正常组织相比,胃癌患者肿瘤组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并未明显改变(P>0.05),但其频率显著下降(P<0.05);胃癌组织浸润的CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞主要属于效应记忆型细胞(CD45RA-CCR7-),并高表达CD69和PD-1;然而,其表达的颗粒酶B和穿孔素水平显著下降(P<0.05);体外TGF-β1可诱导CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞下调表达颗粒酶B和穿孔素(P<0.05)。此外,与早期胃癌患者相比,晚期胃癌患者肿瘤组织中浸润的CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞数目显著下降(P<0.05)。结论胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的浸润水平与疾病的进展成负相关,并呈现出抑制性的表型且抗肿瘤功能下降,从而有助于胃癌的免疫逃逸。

关键词：胃癌 CD8^(+)CD103^(+)Trm细胞 TGF-β1 疾病进展

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蝙蝠相关的冠状病毒

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第二军医大学学报 2020年第9期41卷 935-940页

作者：丁翠玲赵平戚中田海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433

2019年12月,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,继2003年严重急性呼吸综合征(SARS)暴发后又给人类敲响了一记警钟。研究者通过溯源分析,发现COVID-19病原体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的自然宿主可能是中华菊头蝠。21世纪以... 详细信息

2019年12月,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,继2003年严重急性呼吸综合征(SARS)暴发后又给人类敲响了一记警钟。研究者通过溯源分析,发现COVID-19病原体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的自然宿主可能是中华菊头蝠。21世纪以来,全球共出现4次冠状病毒[严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)、猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、SARS-CoV-2]的暴发,给人类健康、公共卫生、经济发展及社会稳定造成了巨大的威胁与损失。大量证据表明,这4种冠状病毒的自然宿主可能均为蝙蝠。本文对蝙蝠相关冠状病毒的种类、全球地理分布及引起暴发的蝙蝠相关冠状病毒作一综述。

关键词：冠状病毒蝙蝠严重急性呼吸综合征冠状病毒中东呼吸综合征冠状病毒猪急性腹泻综合征冠状病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2

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上海2株严重急性呼吸综合征冠状病毒2的分离与鉴定

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第二军医大学学报 2020年第4期41卷 365-370页

作者：彭浩然李成忠唐海琳薛建亚陈志辉梁雪松朱咏梅夏炳辉朱勇喆吴俊杰赵兰娟任浩江亮亮何燕华戚中田赵平海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 海军军医大学(第二军医大学)长海医院感染科上海200433 海军军医大学(第二军医大学)长海医院呼吸与危重症医学科上海200433

目的从新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者鼻/咽拭子样本中分离、培养严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)。方法将来自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子样本以TPCK胰酶处理,然后接种Vero E6细胞;待大部分细胞出现明显病变时,取细胞... 详细信息

目的从新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者鼻/咽拭子样本中分离、培养严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)。方法将来自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子样本以TPCK胰酶处理,然后接种Vero E6细胞;待大部分细胞出现明显病变时,取细胞培养上清用qRT-PCR法检测病毒核酸,并用反转录PCR扩增病毒受体结合区(RBD)基因片段;将病毒扩增培养后感染接种于96孔板中的Vero E6细胞,观察细胞病变效应,并用免疫荧光法检测病毒蛋白。结果2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本接种的Vero E6细胞出现明显细胞病变效应,细胞培养上清中检测出新复制产生的SARS-CoV-2核酸,扩增出的RBD序列与早期分离出的SARS-CoV-2相应序列完全一致;病毒感染的Vero E6细胞病变迅速,并能与SARS-CoV-2核衣壳蛋白(N蛋白)单克隆抗体、刺突蛋白(S蛋白)单克隆抗体及COVID-19患者恢复期血清发生反应。结论从2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本中成功分离出SARS-CoV-2,为后续开展SARS-CoV-2感染与致病机制研究、防治药物与疫苗的研发奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 新型冠状病毒肺炎鼻拭子咽拭子病毒分离

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