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家禽科学 2024年第1期46卷 39-43页

作者：牛彪刘宇金艮泸县农业农村局市场泸县646100 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 定西市安定区畜牧兽医局白碌畜牧兽医站甘肃定西743026

植物精油是一种从植物中提取的天然活性物质,具有抑菌、镇痛、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种功能,有成为抗生素替代物的潜力。当前,植物精油已广泛应用在家禽生产中来提高家禽生产性能和肠道健康。通过对天然植物精油作用机理及其在家禽... 详细信息

植物精油是一种从植物中提取的天然活性物质,具有抑菌、镇痛、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种功能,有成为抗生素替代物的潜力。当前,植物精油已广泛应用在家禽生产中来提高家禽生产性能和肠道健康。通过对天然植物精油作用机理及其在家禽生产中的应用进行综述,以期为植物精油的开发和应用提供参考。

关键词：植物精油作用机理家禽

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发酵黄芪和生药黄芪中皂苷及黄酮类化合物含量检测

发酵黄芪和生药黄芪中皂苷及黄酮类化合物含量检测

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：秦哲李建喜李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/甘肃省中兽药工程技术研究中心/甘肃省新兽药工程重点实验室/农业农村部兽用药物创制重点实验室

膜荚黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.)经分离自鸡消化道的益生菌M9发酵,冻干制成发酵黄芪。临床研究表明,1%发酵黄芪连续60天添加于黄羽肉鸡日粮,具有促生长和提高饲料利用率的效果。化学成分分析研究表明,黄芪经发酵后多糖...

膜荚黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.)经分离自鸡消化道的益生菌M9发酵,冻干制成发酵黄芪。临床研究表明,1%发酵黄芪连续60天添加于黄羽肉鸡日粮,具有促生长和提高饲料利用率的效果。化学成分分析研究表明,黄芪经发酵后多糖含量及得率分别提高84.92%和59.34%。目的:本研究检测了发酵黄芪和生药黄芪中皂苷及黄酮类化合物含量,为建立发酵黄芪质量标准提供理论依据。材料与方法:称取含等量黄芪的发酵黄芪和生药黄芪粗粉,用20倍量80%乙醇于80℃回流提取2h,醇提液制成浸膏。采用香草醛-硫酸法于544nm处测定吸光度,绘制黄芪甲苷标准曲线,检测发酵黄芪和生药黄芪醇提浸膏中皂苷含量。参照2020版《中国药典》(一部)黄芪有效成分含量测定方法,应用高效液相色谱法分别检测发酵黄芪和生药黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。结果与讨论:实验结果表明,发酵黄芪和生药黄芪浸膏收率分别为40.26%和38.77%,黄芪皂苷提取率分别为5.58%和6.54%。取适量浸膏溶于50倍量纯水,上样于AB-8大孔树脂柱,用4倍柱体积80%乙醇洗脱,测定出生药黄芪皂苷和发酵黄芪皂苷的动态吸附量为32.6171 mg/g和26.2467 mg/g,80%乙醇对AB-8吸附的发酵黄芪皂苷的洗脱率可达81.23%。高效液相色谱法测定发酵黄芪、生药黄芪中黄芪甲苷含量分别为0.049%和0.087%,毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量分别为0.030%和0.040%。含有等量黄芪的发酵黄芪和生药黄芪中黄芪甲苷的含量分别为0.063%和0.087%,毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量分别为0.038%和0.040%。发酵前后毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量差异不显著,而发酵后黄芪甲苷的含量降低了27.6%。结论:综合高效液相色谱法检测黄芪甲苷含量结果与醇提浸膏中黄芪皂苷含量检测结果发现,黄芪经发酵后皂苷类成分含量有所降低,推测微生物在发酵过程中利用皂苷类成分进行生物转化或者部分皂苷类成分在高温或弱酸性发酵环境中发生降解,具体机制有待进一步探究。实验结果可为发酵黄芪产品的质量控制提供参考。

关键词：

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液相色谱-串联质谱法检测猪粪便中除虫脲的方法学研究

液相色谱-串联质谱法检测猪粪便中除虫脲的方法学研究

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中国毒理学会第十次全国毒理学大会

作者：邓润辉范丽萍刘希望秦哲白莉霞葛闻博李世宏董书伟杨亚军李剑勇榆林学院生命科学学院中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室

除虫脲(diflubenzuron,DFB)属于苯甲酰本脲类化合物,能够抑制蝇虫等昆虫幼虫的几丁质合成,而抑制其发育;DFB口服给药后,在肠道几乎不吸收;在国外已经通过混饲给药用于控制养殖场环境中蝇类种群的数量。目的为了考察除虫脲预混剂混饲给药... 详细信息

除虫脲(diflubenzuron,DFB)属于苯甲酰本脲类化合物,能够抑制蝇虫等昆虫幼虫的几丁质合成,而抑制其发育;DFB口服给药后,在肠道几乎不吸收;在国外已经通过混饲给药用于控制养殖场环境中蝇类种群的数量。目的为了考察除虫脲预混剂混饲给药后,粪便中的浓度,建立了猪粪便中除虫脲药物浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。材料和方法以DFB-13C6为内标,2 g猪粪便样品,以2 ml水分散,加入10 ml 0.1%冰乙酸-乙腈溶液,以及1 g无水乙酸钠和2 g氯化钠,涡旋混匀2 min,30℃恒温水浴超声提取30 min后4500 g离心10 min,取2 mL上层清液,加入到装有0.05 g PSA、0.1 g C18、0.15 g无水硫酸镁的15 mL离心管中净化,涡旋1min,以4500 g离心2 min。上清液过0.22μm有机微孔滤膜后,进行LC-MS/MS测定。梯度洗脱,电喷雾离子源,正离子模式,多离子反应监测模式检测。结果方法灵敏度高,检测限为10 ng/g,定量限为20 ng/g;基质效应对样品的检测影响较小;标准溶液在1 ng/mL～500 ng/mL的浓度范围内,线性关系良好(R2≥0.99);在定量限20 ng/g及低(100 ng/g)、中(1000 ng/g)、高浓度(5000 ng/g)的添加水平下,平均准确度在95%～105%之间,批内、批间变异系数均小于10%,符合方法学要求。结论在考察的条件下,标准溶液、空白加标样品及处理后的样品,稳定性良好;但应避免样品的反复冻融。因此,该方法可用于猪粪便中除虫脲浓度的检测,进而用于开展口服除虫脲预混剂的二期临床试验研究。

关键词：猪除虫脲液相色谱-串联质谱法内标法

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羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中焦亚硫酸钠含量测定

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中兽医医药杂志 2022年第1期41卷 77-80页

作者：张东辉白玉彬董朕陈晨陈玲玲李冰张继瑜周绪正中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农村农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

为建立羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抗氧化剂焦亚硫酸钠含量测定方法,利用二氧化硫在醋酸盐缓冲液存在的酸性条件下可使酸性品红溶液褪色的原理,采用比色法在547 nm波长处测定吸光度,以标准曲线计算抗氧化剂的含量。结果显示,无水亚硫... 详细信息

为建立羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抗氧化剂焦亚硫酸钠含量测定方法,利用二氧化硫在醋酸盐缓冲液存在的酸性条件下可使酸性品红溶液褪色的原理,采用比色法在547 nm波长处测定吸光度,以标准曲线计算抗氧化剂的含量。结果显示,无水亚硫酸钠质量浓度在20~120μg/mL,吸光度的倒数与其质量浓度呈良好的线性关系y=0.0097x+1.3857(R^(2)=0.9971),平均回收率为98.32%,RSD为0.9573%。结果表明,该方法可用于羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抗氧化剂焦亚硫酸钠含量的测定。

关键词：羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液含量测定焦亚硫酸钠比色法

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注射用头孢噻呋钠对靶动物牛的安全性试验

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中国兽医科学 2021年第5期51卷 646-655页

作者：陈晨董朕邱燕华孙继超程富胜周绪正张继瑜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

头孢噻呋钠是一种专门用于动物的第三代头孢菌素类抗生素,目前国内暂无对头孢噻呋钠在靶动物牛的安全性相关研究。为了评价该制剂对靶动物牛的安全性和剂量相关的毒性反应,确定合理的安全范围。本试验遴选32头健康牛,随机分为4组,每组8... 详细信息

头孢噻呋钠是一种专门用于动物的第三代头孢菌素类抗生素,目前国内暂无对头孢噻呋钠在靶动物牛的安全性相关研究。为了评价该制剂对靶动物牛的安全性和剂量相关的毒性反应,确定合理的安全范围。本试验遴选32头健康牛,随机分为4组,每组8头,设0倍剂量组(空白组)、1倍剂量组、3倍剂量组、5倍剂量组。牛颈部肌肉注射给药,连续9 d,每日1次。试验期间,每日观察牛临床表现及不良反应,记录并分析试验前后牛的体重变化,对试验前后采集所有实验牛的血液和尿液进行检测分析,对5倍剂量组和空白组部分牛实施安乐死进行组织病理学检查。结果显示,各剂量组牛的采食、饮水、呼吸频率、心率以及精神状态正常,均未观察到与头孢噻呋钠相关的临床变化,粪尿排泄均正常,未有异常表现。与空白组相比,注射用头孢噻呋钠各剂量组牛给药前后体重差异均不显著;血液学检查和血清生化学指标以及尿液指标差异均不显著;大体剖检未有显著的病理变化;与空白组相比,5倍剂量组牛的组织病理学检查也未发现显著的病理变化。每日1次,连续9 d使用5倍推荐剂量的注射用头孢噻呋钠,靶动物牛仍耐受,故注射用头孢噻呋钠在临床使用中具有良好的安全性。

关键词：注射用头孢噻呋钠靶动物牛安全性

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牛病毒性腹泻/黏膜病病毒荧光定量PCR检测方法的建立

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福建农业学报 2021年第9期36卷 1042-1047页

作者：张康郭志廷仇正英张景艳王磊张凯王贵波梁芬芬马倩李建喜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创新重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730050

【目的】设计一种能够快速检测出牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)的方法。【方法】依据GenBank公布的BVDV 5′UTR基因属于特异性保守区域的前提,构建具有特异性的探针和引物,以体外转录病毒RNA作为绝对定量标准品... 详细信息

【目的】设计一种能够快速检测出牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)的方法。【方法】依据GenBank公布的BVDV 5′UTR基因属于特异性保守区域的前提,构建具有特异性的探针和引物,以体外转录病毒RNA作为绝对定量标准品。对荧光定量RT-PCR方法的各反应条件进行优化,创建BVDV荧光定量PCR检测方法。【结果】5.026 7 copies·μL^(-1)是此检测方法的最低下限值,该方法拥有良好的重复性,变异系数在组内、组间均<1%。特异性较高,对其他病毒核酸的扩增均为阴性,如猪瘟病毒、口蹄疫病毒等。【结论】建立的BVDV荧光定量PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为牛病毒性腹泻的早期诊断提供了重要的技术支撑。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 5′UTR 实时荧光定量PCR RNA标准品

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黄酮类化合物抗菌增效作用及机制研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2025年第3期 21-27页

作者：伊蓝坤陈旭白玉彬王玮玮魏小娟张志锦俞筱妍朱阵张继瑜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药重点实验室兰州730050 河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038

细菌耐药性已经严重威胁畜牧养殖业的健康可持续发展,新型抗菌药物研发成为研究热点。而新型抗生素的研发周期长、成本高且难度大,因此,植物活性成分越发引起人们关注。黄酮类化合物作为植物中最大的一类次生代谢产物,在自然界中广泛存... 详细信息

细菌耐药性已经严重威胁畜牧养殖业的健康可持续发展,新型抗菌药物研发成为研究热点。而新型抗生素的研发周期长、成本高且难度大,因此,植物活性成分越发引起人们关注。黄酮类化合物作为植物中最大的一类次生代谢产物,在自然界中广泛存在,目前已被证实具有良好的抗菌活性,且作为抗菌增效剂使用能消减细菌耐药性,增强抗生素治疗效果,是控制细菌耐药性发展的一个新方向。本文结合近年来的相关文献总结了黄酮类化合物的多种药理作用,针对其抑菌作用和抑菌机制展开综述,同时探索黄酮类化合物与抗生素的协同作用,并总结协同作用机制,以期恢复或增强耐药菌对抗生素的敏感性,为将黄酮类化合物开发成为新型抗菌药物或抗菌增效剂提供理论参考。

关键词：黄酮类化合物抗菌机制抗生素协同抗菌协同机制

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牛源停乳链球菌荚膜多糖提取及纯化方法研究

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中国草食动物科学 2022年第5期42卷 37-43页

作者：申纪饶王正兵杨峰尚立宏李新圃罗金印丁学智李宏胜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 甘肃省动物疫病预防控制中心兰州730046

为建立最佳的牛源停乳链球菌荚膜多糖提取和纯化方法,用停乳链球菌地方菌株,开展了细菌生长过程中菌液浓度与荚膜多糖得率、发酵液pH值对荚膜多糖得率、不同浓度乙醇沉淀核酸及多糖的效果、温度和时间对荚膜多糖得率、冷酚抽提次数对荚... 详细信息

为建立最佳的牛源停乳链球菌荚膜多糖提取和纯化方法,用停乳链球菌地方菌株,开展了细菌生长过程中菌液浓度与荚膜多糖得率、发酵液pH值对荚膜多糖得率、不同浓度乙醇沉淀核酸及多糖的效果、温度和时间对荚膜多糖得率、冷酚抽提次数对荚膜多糖得率和蛋白含量的影响等一系列实验,同时对制备的3批荚膜多糖进行了各项指标的检测。结果表明,牛源停乳链球菌在pH值为7.0的发酵培养液中培养8 h时荚膜多糖得率最高,最佳的去核酸乙醇浓度为25%,最佳沉淀多糖的乙醇浓度为80%,最佳温度和时间为4℃作用24 h。制备的3批荚膜多糖,其荚膜多糖回收率均在85%以上,蛋白质与核酸含量均低于1%,唾液酸含量在12.5%~14.3%间。说明建立的牛源停乳链球菌荚膜多糖提取纯化方法纯化荚膜多糖得率和纯度均比较高,符合疫苗生产要求。

关键词：奶牛乳房炎停乳链球菌荚膜多糖提取纯化

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金黄色葡萄球菌生物膜形成及调控机制研究进展

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中国兽医学报 2021年第10期41卷 2069-2075页

作者：李新圃罗金印武小虎李宏胜丁学智中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省中兽药工程技术研究中心甘肃兰州730050

金黄色葡萄球菌(金葡菌)具有极强的致病性和耐药性,这与它易于形成生物膜密切相关。金葡菌生物膜的形成,最初认为与多糖细胞间黏附素(PIA)有关,但进一步研究发现,即使没有PIA,金葡菌也可以利用细胞壁锚定蛋白(CWA)形成生物膜。根据研究... 详细信息

金黄色葡萄球菌(金葡菌)具有极强的致病性和耐药性,这与它易于形成生物膜密切相关。金葡菌生物膜的形成,最初认为与多糖细胞间黏附素(PIA)有关,但进一步研究发现,即使没有PIA,金葡菌也可以利用细胞壁锚定蛋白(CWA)形成生物膜。根据研究数据,可以将生物膜形成过程分为4个阶段:初始附着、细胞聚集、生物膜成熟、生物膜分散。金葡菌生物膜的形成主要受群体感应(QS)系统调控,该系统涉及各种调控因子,研究较多的有辅助基因调节子(Agr)、葡萄球菌附属调节子(Sar)、转录因子Sigma B(SigB)和信号传导系统(LuxS/AI-2)。这些调控因子不仅具有各自的调控系统,而且相互协同和制约,共同调节金葡菌生物膜的形成和毒素的释放,与金葡菌的耐药性和致病性密切相关。通过对QS系统及其调控因子的靶向干预,有望找到防控金葡菌感染的新途径。本综述归纳总结了金葡菌生物膜的形成及调控机制研究进展,以期为进一步深入研究提供参考。

关键词：金黄色葡萄球菌生物膜耐药性致病性

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五倍子颗粒质量标准研究

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中兽医医药杂志 2023年第6期42卷 16-20页

作者：吴雪琴茹梦珂贺泂杰王玲郑笑红张长安王胜义崔东安中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 广西大学动物科技学院广西南宁530005 五峰赤诚生物科技股份有限公司湖北宜昌443413

试验旨在建立五倍子颗粒质量控制标准。采用薄层色谱法(TLC)对五倍子药材进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)测定没食子酸含量,色谱柱为Waters Xselect?HSS T3柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲酸溶液(pH值3.2),梯度洗... 详细信息

试验旨在建立五倍子颗粒质量控制标准。采用薄层色谱法(TLC)对五倍子药材进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)测定没食子酸含量,色谱柱为Waters Xselect?HSS T3柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲酸溶液(pH值3.2),梯度洗脱,流速0.5 mL/min,检测波长273 nm,柱温30℃。同时,对五倍子颗粒粒度、水分、溶化性和装量进行检查。试验结果显示,没食子酸在16.05~256.80μg范围内与峰面积线性关系良好(R^(2)=0.999 9)。精密度试验、稳定性试验、重复性试验RSD均小于等于1.0%;平均加样回收率为95.83%,RSD为1.29%。五倍子颗粒粒度、水分、溶化性和装量等均符合2020年版《中华人民共和国兽药典》颗粒剂项下的规定。本研究建立的TLC和HPLC方法专属性强、重复性好、准确可靠,能够有效评价五倍子颗粒质量。

关键词：五倍子颗粒质量标准薄层鉴别没食子酸高效液相色谱

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