检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医杂志 2012年第10期48卷 6-9页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序... 详细信息

为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与其他种梨形虫的相应序列进行分析。系统发生树结果显示,泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的关系,他们处于同一分支,其亲缘关系较巴贝斯虫更远。序列对齐分析表明,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。而马巴贝斯虫和泰勒虫18SrRNA V4高变区核苷酸序列的相似程度较高,与巴贝斯虫在该序列上的差异较大。以上结果表明,泰勒虫种和巴贝斯虫种18SrRNA V4高变区核苷酸序列间的这种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据的本质因素之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫属。

关键词：泰勒虫巴贝斯虫分类学 18S rRNA

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绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位基因(pdha)的克隆、表达及其免疫学活性测定

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农业生物技术学报 2012年第3期20卷 275-282页

作者：许健储岳峰高鹏程赵萍贺英剡根强逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心石河子大学动物科技学院

丙酮酸脱氢酶α-亚单位（PDHA）在病原体丙酮酸脱氢酶的催化过程中发挥着重要作用。为表达绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae）PDHA蛋白并测定其免疫学活性,应用PCR方法扩增出绵羊肺炎支原体pdha基因并对其序列进行分析,将pdha... 详细信息

丙酮酸脱氢酶α-亚单位（PDHA）在病原体丙酮酸脱氢酶的催化过程中发挥着重要作用。为表达绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae）PDHA蛋白并测定其免疫学活性,应用PCR方法扩增出绵羊肺炎支原体pdha基因并对其序列进行分析,将pdha基因中色氨酸密码子TGA优化为TGG后进行全基因合成,插入到pET32-a（+）载体上,构建了pET32-a（+）-pdha重组质粒,将重组质粒转化到大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中诱导表达PDHA蛋白,并通过免疫印迹及小鼠（Mus musculus）免疫试验对其免疫学活性进行测定。结果pdha基因全长1125bp,编码375aa,（G+C）%为34.76%,第304;06位、379;81位、586;88位、592;94位、625;27位、811;13位、889;91位及964;66位TGA在支原体中编码色氨酸而不是作为终止密码子;基因序列比对及进化树分析显示,绵羊肺炎支原体pdha基因与10种支原体的pdha基因序列同源性为32.6%;5.3%,氨基酸序列同源性为39.3%;0.6%,基因序列和氨基酸序列均与猪肺炎支原体（***）有同源性,分别为85.3%和90.6%;绵羊肺炎支原体pdha基因在33℃、IPTG0.25mmol/L诱导6h的表达条件下,表达量最高;重组的PDHA蛋白可与绵羊肺炎支原体高免血清具有免疫印迹条带,在免疫小鼠后血清抗体效价与对照组相比,均显著升高（P<0.05）。本实验首次成功克隆表达了绵羊肺炎支原体pdha基因,并证明其重组PDHA蛋白具有较好的免疫学活性。为绵羊支原体肺炎基因工程疫苗及诊断研究提供候选靶标。

关键词：绵羊肺炎支原体 pdha基因克隆 PDHA蛋白表达免疫学活性

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牛支原体生长曲线的测定和培养基筛选

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湖北农业科学 2012年第3期51卷 549-551页

作者：邵倩储岳峰何生虎逯忠新宁夏大学农学院银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物(疫病重点开放实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平... 详细信息

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平台期,平均最高生长滴度7.0×109ccu/mL;在牛心汤培养基中生长40 h即可达到平台期,平均最高生长滴度4.0×109ccu/mL;在改良KM2培养基中生长50 h达到平台期,其平均最高生长滴度为7.0×108ccu/mL。结果表明,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长快、滴度高,为下一步牛支原体灭活疫苗的研究提供了参考依据。

关键词：牛支原体(Mycoplasma bovis) 培养基筛选生长曲线

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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段的表达、纯化及抗原性分析

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中国兽医学报 2012年第2期32卷 231-237页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插... 详细信息

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插入的片段属于猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因ORF2部分;将该片段插入pet32a表达载体,经酶切、测序鉴定证实获得了带有目的基因的重组表达质粒。将重组质粒转化Rosetta菌,经0.3mmol/L IPTG诱导得到融合表达,得到相对分子质量为45 000的重组蛋白,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。并用SDS电泳切胶纯化和透析浓缩方法进行纯化,用纯化的蛋白免疫兔子,经每2周免疫1次,连续3次免疫后,对免疫组和对照组,分别在45,60,90d采血,每只兔子采集1份。用夹心ELISA法测定免疫血清抗体,结果表明免疫组在45d后均产生具有HEV抗原结合活性的抗体。本试验对猪swCH189株CP239基因的克隆和表达研究,为进一步研究结构蛋白基因ORF2的生物学功能奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 swCH189株克隆原核表达纯化抗原性分析

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牛支原体的分离鉴定及16S rRNA基因序列分析

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动物医学进展 2012年第12期33卷 35-37页

作者：伍晓红储岳峰张轩赵萍高鹏程贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 西藏昌都左贡县兽医站西藏左贡854400

为明确甘肃某牛场发生的疑似犊牛支原体肺炎的病原,利用支原体培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中分离到2个分离株,分别命名为GT-01和GT-02。通过菌落形态观察、生化试验、特异性PCR鉴定和16SrRNA测序比对对分离株进行鉴定。结果2个分... 详细信息

为明确甘肃某牛场发生的疑似犊牛支原体肺炎的病原,利用支原体培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中分离到2个分离株,分别命名为GT-01和GT-02。通过菌落形态观察、生化试验、特异性PCR鉴定和16SrRNA测序比对对分离株进行鉴定。结果2个分离株在固体培养基上生长的菌落呈典型的"油煎蛋状",不能水解葡萄糖、甘露醇、精氨酸,不消化酪蛋白,PCR能扩增出牛支原体特异的1 911bp目的片段,16SrRNA基因序列与牛支原体国际标准株PG45的同源性分别为99.4%和99.6%。结果表明,2个分离株属于牛支原体。

关键词：牛支原体分离鉴定 16 S rRNA

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绵羊肺炎支原体免疫蛋白质组学的初步研究

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中国兽医科学 2012年第2期42卷 150-153页

作者：许健储岳峰高鹏程赵萍贺英剡根强逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心甘肃兰州730046 石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

利用双向电泳及免疫印迹方法对绵羊肺炎支原体MoGH3-3分离株的抗原蛋白进行筛选,并采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱对其进行初步鉴定。结果,共筛选到MoGH3-3株3个主要抗原蛋白点,其中2个被鉴定为延伸因子(elongation factor Tu,... 详细信息

利用双向电泳及免疫印迹方法对绵羊肺炎支原体MoGH3-3分离株的抗原蛋白进行筛选,并采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱对其进行初步鉴定。结果,共筛选到MoGH3-3株3个主要抗原蛋白点,其中2个被鉴定为延伸因子(elongation factor Tu,EF-Tu),1个为丙酮酸脱氢酶E1-a亚单位(pyruvate dehydrogenase E1-alpha subunit,PDHA)。结果表明,EF-Tu及PDHA是绵羊肺炎支原体主要的抗原蛋白,这为下一步绵羊支原体肺炎基因工程疫苗的研制提供了靶标。

关键词：绵羊肺炎支原体免疫印迹蛋白质组学

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山羊支原体山羊肺炎亚种培养基的筛选及生长曲线测定

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动物医学进展 2012年第2期33卷 17-20页

作者：高珊逯忠新许立华宁夏大学农学院宁夏银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心甘肃兰州730046

为筛选出山羊支原体山羊肺炎亚种的适宜培养基,将山羊支原体山羊肺炎亚种分离株M1601分别接种Thiaucourt肉汤、MEM-KM2和TSA 3种不同的培养基,测定其在3种不同培养基中生长滴度、生长速度,并测定了M1601在最适培养基中在不同培养阶段的... 详细信息

为筛选出山羊支原体山羊肺炎亚种的适宜培养基,将山羊支原体山羊肺炎亚种分离株M1601分别接种Thiaucourt肉汤、MEM-KM2和TSA 3种不同的培养基,测定其在3种不同培养基中生长滴度、生长速度,并测定了M1601在最适培养基中在不同培养阶段的生长滴度。结果表明,添加2g/L丙酮酸钠和150mL/L马血清的Thiaucourt肉汤培养基最适宜山羊支原体山羊肺炎亚种的生长,生长滴度可达109 CCU/mL,在培养6h后开始进入对数生长期,培养60h后进入稳定期,培养72h时后进入衰亡期。此试验结果为山羊支原体山羊肺炎亚种培养特性研究提供了参考数据。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种培养基生长曲线

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马泰勒虫病PCR检测方法的建立和应用

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中国畜牧兽医 2012年第2期39卷 28-31页

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成党根生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 西安市长安区动物疾病预防控制中心陕西西安710100

为寻求一种快速、有效的马泰勒虫(Theileria equi,***)PCR检测方法。基于马泰勒虫18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计特异性引物Te-18F、Te-18R,通过PCR技术获得了531bp的核酸片段。用该引物对马泰勒虫、马泰勒虫和驽巴贝斯虫混合样本、... 详细信息

为寻求一种快速、有效的马泰勒虫(Theileria equi,***)PCR检测方法。基于马泰勒虫18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计特异性引物Te-18F、Te-18R,通过PCR技术获得了531bp的核酸片段。用该引物对马泰勒虫、马泰勒虫和驽巴贝斯虫混合样本、驽巴贝斯虫、尤氏泰勒虫、中华泰勒虫、环形泰勒虫、绵羊泰勒虫、吕氏泰勒虫和瑟氏泰勒虫基因组模板进行特异性试验。同时对马泰勒虫基因组模板进行不同浓度稀释后扩增,以便于确定试验的敏感性。用本试验建立的方法与常规显微镜镜检方法对45份马属动物血样进行检测。特异性试验显示,在被检测的9个样本中,只有马泰勒虫及马泰勒虫和驽巴贝斯虫混合模板中扩增出了符合大小的特异核酸片段。驽巴贝斯虫、尤氏泰勒虫、中华泰勒虫、环形泰勒虫、绵羊泰勒虫、吕氏泰勒虫和瑟氏泰勒虫的扩增结果均为阴性。灵敏度试验结果表明,PCR对马泰勒虫的扩增效率可达到10-13。对本试验建立的PCR检测马泰勒虫方法评估结果显示,PCR对马泰勒虫的检出率为17.78%(8/45),显微镜镜检结果只有8.89%(4/45)两者的符合率为100%。本试验建立的马泰勒虫PCR检测方法不失,为一种好的检测方法。

关键词：马泰勒虫 PCR诊断方法建立应用

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猪圆环病毒的分子生物学与检测方法的研究现状

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中国农学通报 2012年第14期28卷 66-72页

作者：田晓婷李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)作为引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,引起了人们的广泛关注。对猪圆环病毒的分子生物学研究和了解,有利于PMWS的预防和控制。而快速有效... 详细信息

猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)作为引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原,引起了人们的广泛关注。对猪圆环病毒的分子生物学研究和了解,有利于PMWS的预防和控制。而快速有效的分子生物学诊断技术将有助于PMWS的流行病学调查研究和早期诊断。经过近20年的系统研究,人们对其病原分子生物学等方面有较深入的了解,在此就猪圆环病毒的分子生物学相关研究进展进行了简单的总结。

关键词：猪圆环病毒基因组结构复制模式分子生物学诊断

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我国牛病毒性腹泻流行状况分析

我国牛病毒性腹泻流行状况分析

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第四届全国牛病防制及产业发展大会

作者：高闪电李有全常惠芸殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室

为了阐明牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在我国部分地区牛群的感染状况,本研究对采自青海地区规模化牛场和散养牛群的血液样品318份,以及来源于我国不同地城的商品化胎牛或新生牛血清40份,进行BVDV血清学以及病毒基因型分析.结果发现青海各地... 详细信息

为了阐明牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在我国部分地区牛群的感染状况,本研究对采自青海地区规模化牛场和散养牛群的血液样品318份,以及来源于我国不同地城的商品化胎牛或新生牛血清40份,进行BVDV血清学以及病毒基因型分析.结果发现青海各地牛群存在BVDV-1的普遍感染,感染率为13.3-68%,主要见于规模化牛场,而散养牛感染以散发为主.通过对间及商品血清RNA进行RT-PCR扩增病毒5'UTR和测序表明,BVDV-1是我国流行的主要病毒基因型,其中至少有8个亚型存在.BVDV-2只在1份样品中检测到,未见BVDV-3引起的感染。

关键词：牛病毒性腹泻感染状况基因型

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