检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2019年第7期46卷 2079-2087页

作者：黄彩云赵志荀朱学亮王战红吴香草吴国华张志东张强中国农业科学院兰州兽医研究所农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室

为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重... 详细信息

为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点(基因组中70303-70304 bp之间),利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定。结果显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中。Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达。本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料。

关键词：绿色荧光蛋白(GFP) 痘苗病毒MVA株重组毒株

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中草药红茶菌的制备及其体内抗口蹄疫病毒活性

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安徽农业科学 2014年第18期42卷 5892-5894,5908页

作者：符乃方吴俊才符启俊吕律何继军李开绵叶剑秋蒋盛军蒋小强邱红辉高李泽何萍谢峥嵘陈吉雄中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 海南东方市畜牧局动物疾病预防控制中心海南东方570100

[目的]研究中草药红茶菌在动物体内对口蹄疫病毒复制的抑制作用。[方法]选取健康猪20头,喷雾和口服中草药红茶菌3 d后,进行O型口蹄疫毒株(猪O型O/China/99株鼠毒)攻毒试验;攻毒后,继续对猪群进行喷雾和口服给药,观察中草药红茶菌对攻毒... 详细信息

[目的]研究中草药红茶菌在动物体内对口蹄疫病毒复制的抑制作用。[方法]选取健康猪20头,喷雾和口服中草药红茶菌3 d后,进行O型口蹄疫毒株(猪O型O/China/99株鼠毒)攻毒试验;攻毒后,继续对猪群进行喷雾和口服给药,观察中草药红茶菌对攻毒猪的保护作用及体内抗口蹄疫病毒的作用。[结果]攻毒结果显示,低剂量给药猪3/5保护,中剂量给药猪1/5保护,高剂量给药猪0/5保护;在低剂量给药条件下,攻毒保护效果优于中剂量和高剂量;从攻毒后的第1天到第7天,陆续从试验猪全血中检测到口蹄疫病毒,其中中草药红茶菌高浓度预防组猪的口蹄疫病毒的复制水平最高,中剂量组较低,低剂量组复制水平最低。[结论]给药合适剂量的中草药红茶菌对猪体内的口蹄疫病毒具有一定的抑制作用。

关键词：中草药红茶菌制备口蹄疫病毒体内抗病毒活性抑制

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中草药红茶菌的制备及其体外抗口蹄疫病毒活性

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安徽农业科学 2014年第17期42卷 5500-5502页

[目的]研究中草药红茶菌的细胞、乳鼠毒性以及对口蹄疫病毒在体外的抗病毒活性。[方法]将中草药红茶菌过滤,用细胞培养液稀释,分别接种在BHK21细胞上观察细胞生长情况,评价其对细胞的毒性作用。将中草药红茶菌用灭菌水稀释,分别接种3日... 详细信息

[目的]研究中草药红茶菌的细胞、乳鼠毒性以及对口蹄疫病毒在体外的抗病毒活性。[方法]将中草药红茶菌过滤,用细胞培养液稀释,分别接种在BHK21细胞上观察细胞生长情况,评价其对细胞的毒性作用。将中草药红茶菌用灭菌水稀释,分别接种3日龄乳鼠,观察乳鼠生长、健康状态和接种部位变化情况,评价其对乳鼠的毒性作用。用稀释的中草药红茶菌与浓度为1 000 LD50的口蹄疫病毒等量混合,37℃条件下作用30 min,接种3日龄乳鼠,观察乳鼠发病死亡情况,估算中草药红茶菌体外可杀灭口蹄疫病毒的最大使用浓度。用稀释的中草药红茶菌与口蹄疫病毒混合,接种BHK21细胞,观察致细胞病变效应,记录不同稀释度的中草药红茶菌对口蹄疫病毒的杀灭效果。[结果]BHK21细胞和乳鼠试验表明,中草药红茶菌在1∶4稀释后,对BHK21细胞无毒性反应,并可有效抑制1 000TCID50口蹄疫病毒在BHK21细胞生长繁殖;1∶2稀释的红茶菌微生态制剂对3日龄乳鼠无毒性反应,并可有效杀灭1 000 LD50口蹄疫病毒。[结论]中草药红茶菌是一种安全性好且对口蹄疫病毒有较好杀灭作用的口蹄疫预防中草药微生态制剂。

关键词：中草药红茶菌口蹄疫病毒预防活性体外

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口蹄疫病毒整联蛋白受体αvβ6在绵羊体内的组织分布

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农业生物技术学报 2011年第1期19卷 107-110页

作者：薛霜独军政赵建勇高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

以间接免疫组化法(IHA)检测口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)整联蛋白αvβ6在健康绵羊(Ovis aries)不同组织器官中的表达分布。研究结果表明,在舌、鼻、唇、软腭、咽、喉头、气管、肺脏和蹄冠状带组织上皮细胞的细胞膜... 详细信息

以间接免疫组化法(IHA)检测口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)整联蛋白αvβ6在健康绵羊(Ovis aries)不同组织器官中的表达分布。研究结果表明,在舌、鼻、唇、软腭、咽、喉头、气管、肺脏和蹄冠状带组织上皮细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物。结果表明,整联蛋白受体αvβ6受体广泛存在于健康绵羊体内的组织器官中,在呼吸系统以及蹄冠状带等多种FMDV易感组织器官的上皮细胞中表达量较高,且主要在细胞膜和细胞质中表达。

关键词：口蹄疫病毒整联蛋白αvβ6 间接免疫组织化学组织分布

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口蹄疫病毒免疫逃避机制研究进展

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畜牧与兽医 2011年第7期43卷 96-99页

作者：马延滨高闪电丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种剧烈的接触传染性疾病。病毒可以进化出不同的方法逃避机体免疫系统的清除,处于一种潜在感染状态,这种现象叫做免疫逃避。免疫逃避可以阻断机体的先天性免疫应答以及获得性免疫应答,这主要是通过诱导免疫细... 详细信息

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种剧烈的接触传染性疾病。病毒可以进化出不同的方法逃避机体免疫系统的清除,处于一种潜在感染状态,这种现象叫做免疫逃避。免疫逃避可以阻断机体的先天性免疫应答以及获得性免疫应答,这主要是通过诱导免疫细胞凋亡、抑制免疫效应分子功能、抑制抗原呈递实现的。全面深入地研究口蹄疫发病及免疫机制将有助于高保护力疫苗的研制,同时为口蹄疫的生物疗法提供可能。

关键词： FMDV 免疫抑制细胞凋亡免疫逃避

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转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 120-124页

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

转录介导的扩增技术可以RNA或DNA为模板,利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42°C等温反应条件下进行扩增,产物为RNA。该技术在每一循环可产生模板的100～1000个拷贝转录本,15～30min可将模板扩增约1010倍,在人类白细胞抗原等位基因分型... 详细信息

转录介导的扩增技术可以RNA或DNA为模板,利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42°C等温反应条件下进行扩增,产物为RNA。该技术在每一循环可产生模板的100～1000个拷贝转录本,15～30min可将模板扩增约1010倍,在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。

关键词：转录介导的扩增技术恒温扩增诊断

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SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第7期26卷 631-634页

作者：高闪电常惠芸独军政邵军军丛国正林彤韩雪清谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100029

目的：表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端，进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法：以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板，设计特异性引物，扩增VPl基因及其C端编码区，然后将该其分别克... 详细信息

目的：表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端，进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法：以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板，设计特异性引物，扩增VPl基因及其C端编码区，然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a（＋）中，转化大肠杆菌工程菌株BL21（DE3）plysS，经IPTG诱导，以金属离子螯合层析法对表达的VPl、VP1C端融合蛋白进行纯化，经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体，以ELISA方法测定抗体效价。结果：实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端的高效表达，表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS—PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带，具有较高的纯度。Western blot结果显示，纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应，而与阴性对照血清无交叉反应。结论：用纯化的VPl及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1：12800以上，具有较高的特异性。

关键词： SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VP1 原核表达反应原性分析

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实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用

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中国农学通报 2010年第7期26卷 11-15页

作者：薛霜独军政高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。随着现代医学和分子生... 详细信息

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医学的基础研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。笔者将对FQ-PCR技术的原理、检测方法研究进展以及目前的应用状况等作一综述。

关键词：实时荧光定量PCR 探针应用

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整联蛋白结构与信号转导机制

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动物医学进展 2010年第1期31卷 63-67页

作者：薛霜独军政赵建勇高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

整联蛋白是一类α/β异源二聚体膜受体分子,通过细胞膜的双向信号转导作用以调节细胞分化、迁移、免疫、黏附等生物学功能。整联蛋白能通过多种途径如黏附斑激酶、胞内-外离子浓度及结构域构象变化等介导细胞信号转导。近年来,研究的焦... 详细信息

整联蛋白是一类α/β异源二聚体膜受体分子,通过细胞膜的双向信号转导作用以调节细胞分化、迁移、免疫、黏附等生物学功能。整联蛋白能通过多种途径如黏附斑激酶、胞内-外离子浓度及结构域构象变化等介导细胞信号转导。近年来,研究的焦点是整联蛋白如何通过构象的改变来调节细胞信号转导以及对配体的亲和力。论文主要从分子水平上就整联蛋白结构和介导的信号转导机理进行了综述。

关键词：整联蛋白构象信号转导配体亲和力

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NASBA(依赖核酸序列的扩增)技术及其在病毒检测中的应用

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中国生物工程杂志 2009年第1期29卷 80-85页

作者：高闪电常惠芸丛国正独军政邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家VI蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

NASBA（nucleic acid sequence—based amplification）即依赖核酸序列的扩增技术，是一种扩增RNA的新技术，是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42％进行，可以在2h左右将模板RNA扩增... 详细信息

NASBA（nucleic acid sequence—based amplification）即依赖核酸序列的扩增技术，是一种扩增RNA的新技术，是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42％进行，可以在2h左右将模板RNA扩增约10卧佗倍，不需特殊的仪器。NASBA已经广泛应用于细菌、病毒等多种病原微生物的检测，就NASBA的技术原理及其在病毒检测中的应用作一综述。

关键词：依赖核酸序列的扩增(NASBA) 恒温扩增病毒检测

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