检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1363-1369页

作者：吴运谱乔传玲杨焕良陈艳展小过辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心沈阳110164

RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5 HA-EGFP。采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5 HA-EGFP)。经目的基... 详细信息

RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5 HA-EGFP。采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5 HA-EGFP)。经目的基因PCR检测及序列测定,结果表明:HA基因已经正确地插入到腺病毒的基因组中;通过RT-PCR检测与Western blot分析,结果表明:HA基因能够进行正确转录,并且所表达的蛋白具有相应的生物学活性。子代重组腺病毒rAd-H5 HA-EGFP经增殖、纯化后感染性滴度可达2.26×1010TCID50mL-1。rAd-H5 HA-EGFP免疫BALB/c小鼠能够诱导特异性的HI抗体产生,有效阻止病毒在体内的复制。

关键词：猪流感病毒 H5N1亚型 HA基因重组腺病毒

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1株猪源2009/H1N1流感病毒反向遗传系统的建立

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畜牧与兽医 2017年第1期49卷 61-64页

作者：许榜丰孟沙沙吴运谱陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明... 详细信息

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明,R-HLJ44与亲本病毒HLJ44的核苷酸序列完全一致;二者在细胞上具有相似的增殖特性;抗原性未发生变化;分别以106TCID50的剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,结果显示R-HLJ44与亲本HLJ44在小鼠脏器中的复制滴度也基本一致。以上结果表明拯救的重组病毒保持了与亲本病毒一致的生物学特性。该病毒反向遗传系统的建立,为进一步研究H1N1亚型流感病毒的致病分子机制及新型疫苗研制等奠定了基础。

关键词：流感病毒猪 2009/H1N1 反向遗传系统

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A型流感病毒核蛋白结构和功能的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2009年第9期 17-19页

作者：杜金玲刘春国刘明李洪涛张新涛石薇琳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

A型流感病毒为重要的传染性病原。流感病毒核蛋白是病毒转录装置中的结构成分,在病毒生活周期中执行多种重要功能,文章简要综述了核蛋白在流感病毒结构和功能方面的研究进展,以便为促进疫苗的设计和抗病毒治疗药物的研制提供借鉴。

关键词：流感病毒核蛋白结构与功能

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抗原表位鉴定方法的研究进展

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中国畜牧兽医 2012年第7期39卷 66-70页

作者：文雪霞陈化兰熊永忠王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

抗原表位是抗原分子中能与相应淋巴细胞表面的受体结合的特殊化学基团,一般由几个氨基酸残基序列或其空间结构组成。它是引起免疫应答的物质基础,其性质决定了抗原的特异性。抗原表位的鉴定方法主要有肽扫描技术、氨基酸定点突变技术、X... 详细信息

抗原表位是抗原分子中能与相应淋巴细胞表面的受体结合的特殊化学基团,一般由几个氨基酸残基序列或其空间结构组成。它是引起免疫应答的物质基础,其性质决定了抗原的特异性。抗原表位的鉴定方法主要有肽扫描技术、氨基酸定点突变技术、X-ray衍射或核磁共振技术、质谱技术、噬菌体展示肽技术及生物信息技术预测等,文章将从这几方面入手对近几年来鉴定抗原表位的方法作一综述。

关键词：抗原表位鉴定方法研究进展

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镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的研究

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畜牧兽医学报 2005年第4期36卷 362-364页

作者：李金龙熊永忠徐世文王秀荣李术东北农业大学动物医学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法,检测了10μmol/L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况,结果表明:10μmol/L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA,并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免... 详细信息

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法,检测了10μmol/L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况,结果表明:10μmol/L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA,并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。

关键词：脾脏淋巴细胞 DNA损伤镉鸡凝胶电泳法定量分析法时间效应免疫毒性 mol 单细胞片段化禽类

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鸭肠炎病毒疫苗株UL41和UL40基因间隔区作为其复制非必需区的鉴定

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 996-1000页

作者：刘静赵玉博焦晨晨陈普成胡玉珍姜永萍陈化兰柳金雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为探寻鸭肠炎病毒(DEV)基因组中可插入外源基因的复制非必需区,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建重组质粒pX459-ul4140和含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的穿梭片段UL41-RFP-UL40,转染后拯救重组病毒,并对其进行噬斑纯化。通过PC... 详细信息

为探寻鸭肠炎病毒(DEV)基因组中可插入外源基因的复制非必需区,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建重组质粒pX459-ul4140和含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的穿梭片段UL41-RFP-UL40,转染后拯救重组病毒,并对其进行噬斑纯化。通过PCR和荧光显微镜观察对重组病毒进行鉴定,结果显示,经拯救得到表达RFP的重组病毒rDEV-ul4140RFP;所有代次的rDEV-ul4140RFP在显微镜下均能观察到红色荧光,表明重组病毒中的RFP基因稳定存在。将rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEFs)后,收集24 h、48 h、72 h、96 h的细胞和上清,检测TCID并绘制生长曲线。结果显示,rDEV-ul4140RFP在CEF中的生长曲线和亲本DEV疫苗株无显著差异。利用SPF鸭对rDEV-ul4140RFP的免疫保护效果进行评价。攻毒保护实验结果显示,rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株均能对SPF鸭提供100%的免疫保护。本研究结果证实DEV基因组UL41和UL40基因间隔区可作为外源基因的插入位点,为以DEV为载体构建相关重组疫苗提供参考依据。

关键词：鸭肠炎病毒 CRISPR/Cas9 复制非必需区

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不同致病性H7N9亚型流感病毒HA蛋白的比较分析

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中国家禽 2018年第7期40卷 14-17页

作者：张莹刘琳徐海峰曾显营施建忠王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为明确高致病性和低致病性H7N9亚型流感病毒血凝素(HA)蛋白的血清学特性是否有差异,通过体外表达两种H7N9亚型流感病毒HA蛋白并进行分析。利用RT-PCR方法扩增出高、低致病性H7N9亚型流感病毒HA基因,测序,并克隆于真核表达载体pCAGGS-Fla... 详细信息

为明确高致病性和低致病性H7N9亚型流感病毒血凝素(HA)蛋白的血清学特性是否有差异,通过体外表达两种H7N9亚型流感病毒HA蛋白并进行分析。利用RT-PCR方法扩增出高、低致病性H7N9亚型流感病毒HA基因,测序,并克隆于真核表达载体pCAGGS-Flag中,构建两个重组表达质粒,命名为pCAF-H7HPHA和pCAF-H7LPHA,分别转染293T细胞,用间接免疫荧光试验和Western blot试验观察HA蛋白的表达情况。结果显示:与低致病H7N9亚型流感病毒比较,高致病性H7N9亚型流感病毒HA基因裂解位点有连续的碱性氨基酸插入,糖基化位点和受体结合位点没有差异。不同致病性毒株的HA蛋白均能表达良好,表达蛋白分子量约为70 ku;高致病性H7N9亚型流感病毒HA蛋白(或血清)可以与低致病H7N9流感血清(或蛋白)发生反应。结果表明:不同致病性H7N9亚型流感病毒HA蛋白在血清学上没有差异性,为H7N9亚型流感病毒HA蛋白的研究奠定基础。

关键词： H7N9亚型流感 HA蛋白血清学

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猪流感病毒血凝素基因原核表达及其在间接ELISA中的初步应用

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畜牧与兽医 2008年第11期40卷 10-13页

作者：陈艳乔传玲丁选亚杨焕良辛晓光韩庆功陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性,在间接ELISA中的初步应用表明具有良好的抗原反应性。本研究为以重组HA蛋白为抗原建立H1亚型猪流感抗体的ELISA检测方法奠定了基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因原核表达

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禽流感病毒N4亚型神经氨酸酶基因的克隆和序列分析

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中国兽医学报 2004年第3期24卷 212-215页

作者：王秀荣邓国华姜永萍乔传玲田国斌刘丽玲于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 农业部畜牧兽医局

应用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒 A/ Turkey/ Ontario/ 6 118/ 6 8(H8N4 )毒株 ,Tri Zol L S Reagent提取病毒 RNA,RT- PCR扩增神经氨酸酶 (NA)基因全片段 ,克隆到 p MD18- T载体上 ,并进行了鉴定和序列测定。所获得的 NA基... 详细信息

应用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒 A/ Turkey/ Ontario/ 6 118/ 6 8(H8N4 )毒株 ,Tri Zol L S Reagent提取病毒 RNA,RT- PCR扩增神经氨酸酶 (NA)基因全片段 ,克隆到 p MD18- T载体上 ,并进行了鉴定和序列测定。所获得的 NA基因片段长 14 4 1bp,编码 4 90个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列进行预测 ,有 9个潜在的糖基化位点和2

关键词：禽流感病毒 N4亚型神经氨酸酶基因克隆序列分析鸡群生物学特征

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流感病毒PA蛋白与宿主SSR4蛋白的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2021年第10期43卷 1029-1033页

作者：王倩李俊平梁立滨赵玉辉温霞孔凡迪王广文石文军李奇兵姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开发实验室黑龙江哈尔滨150069

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病... 详细信息

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病毒PA蛋白可能存在相互作用的宿主因子,其中之一为Signal sequence receptor subunit 4(SSR4)。为研究流感病毒PA蛋白与宿主蛋白SSR4的相互作用,本研究采用酵母回交试验验证二者之间是否存在相互作用,结果显示PA蛋白与SSR4之间存在相互作用;在真核细胞中利用免疫共沉淀(Co-IP)试验检测,结果进一步证实了PA蛋白与SSR4蛋白之间的相互作用。利用慢病毒包装系统构建SSR4蛋白的过表达细胞系,并感染病毒后进行噬斑滴定,结果显示SSR4过表达可以抑制流感病毒的复制。瞬时转染过表达SSR4后再转染流感病毒聚合酶复合体表达质粒及荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告系统检测SSR4蛋白对聚合酶活性的影响,结果显示SSR4过表达后可以显著抑制流感病毒的聚合酶活性。本研究首次证实SSR4可以抑制流感病毒复制,并可使流感病毒RNP聚合酶活性显著降低,上述结果进一步完善了PA蛋白与宿主因子的互作网络,丰富了对宿主因子参与流感病毒复制周期的认识。

关键词：流感病毒 PA蛋白 SSR4蛋白相互作用

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