检索结果-内蒙古大学图书馆

动物营养学报 2021年第11期33卷 6057-6068页

作者：王梦雨万凡伊宝张宏福中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 兰州大学草地农业科技学院兰州730020

二氢槲皮素(DHQ)是黄酮类化合物,因具有抗氧化、抗炎、抗纤维化、抗癌、抗病毒等多种生物学功能,已被应用于食品、医药等领域。尤其在饲料“禁抗”后,作为天然植物提取物,二氢槲皮素在畜牧业生产中具有良好的应用前景。本文首先简要介... 详细信息

二氢槲皮素(DHQ)是黄酮类化合物,因具有抗氧化、抗炎、抗纤维化、抗癌、抗病毒等多种生物学功能,已被应用于食品、医药等领域。尤其在饲料“禁抗”后,作为天然植物提取物,二氢槲皮素在畜牧业生产中具有良好的应用前景。本文首先简要介绍了二氢槲皮素的分子结构和理化性质,其次探讨了二氢槲皮素的生物学功能及其可能的作用机制,最后总结了二氢槲皮素在畜禽生产中的初步研究进展,旨在为开发新型饲料添加剂和畜禽健康养殖提供理论依据。

关键词：二氢槲皮素生物学功能畜禽生产饲料添加剂

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CpG和ICTYOLANE^(TM)31佐剂对ASFV-CD2v蛋白免疫效果的影响

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中国兽医学报 2023年第12期43卷 2418-2424页

作者：庞忠宝黄颖冯春燕翟文竹吉日木图朱鸿飞贾红中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国检验检疫科学研究院三亚生物安全中心北京100179

探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)和ICTYOLANE^(TM)31微乳佐剂对重组表达的ASFV-CD2v蛋白在小鼠体内免疫效果的影响。以杆状病毒表达的CD2v蛋白为抗原,分别配伍CpG寡脱氧核苷酸(CpG oligonucleotide,CPG ODN)和ICTYOLANE^(TM)31微乳佐剂,皮下免疫BALB/c小鼠。首次免疫后14 d进行二免,采集首免后0、14 d以及二免后7、14及28 d血清,通过间接ELISA检测血清中CD2v抗体水平;采集二免后35 d小鼠分离脾脏淋巴细胞,通过流式细胞术分析IFN-γ水平。结果显示,间接ELISA结果显示在二免后7 d可检测到较高水平的CD2v抗体,ICTYOLANE^(TM)31佐剂和CPG ODN佐剂组抗体水平明显高于蛋白组。T细胞亚群分析结果显示,在二免后35 d,CpG ODN佐剂组的CD4^(+)T淋巴细胞的比例最高,达到81.34%,ICTYOLANE^(TM)31佐剂组CD8^(+)T淋巴细胞的比例最低,仅为11.37%。ICTYOLANE^(TM)31佐剂组CD4^(+)/CD8^(+)比值最高,ICTYOLANE^(TM)31佐剂组CD4^(+)T细胞IFN-γ分泌水平最高,可达9.07%,但CpG ODN佐剂组、ICTYOLANE^(TM)31佐剂组及蛋白组间差异不显著。推断,小鼠在第二次免疫后7 d产生了较高水平的抗体,CpG ODN、ICTYOLANE^(TM)31佐剂对ASFV-CD2v蛋白均可增强免疫小鼠产生CD2v抗体的水平,其中CpG ODN佐剂作用更强。ICTYOLANE^(TM)31佐剂及CpG ODN佐剂可以增强机体细胞免疫,其中ICTYOLANE^(TM)31佐剂作用更强。该研究为非洲猪瘟亚单位疫苗相关佐剂的筛选提供了一定参考。

关键词： CpG佐剂非洲猪瘟 CD2v 免疫抗体 IFN-γ ICTYOLANETM31

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不同血清型猪链球菌对新西兰兔的致病性研究

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2566-2575页

作者：张树志刘飞王振勇陈智张琳孙文博张玉玉丁罗刚李建达任素芳于江吴家强山东农业大学动物科技学院泰安271018 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室济南250100 农业农村部畜禽生物组学重点实验室济南250100

【目的】探究不同血清型猪链球菌(Streptococcus suis,SS)在新西兰兔体内的分布规律及致病性差异,为猪链球菌病的防治提供参考。【方法】分别采用SS1 ZY194株、SS2 QH株、SS7 ZY188株感染新西兰兔,通过临床症状观察,HE染色分析病理组织... 详细信息

【目的】探究不同血清型猪链球菌(Streptococcus suis,SS)在新西兰兔体内的分布规律及致病性差异,为猪链球菌病的防治提供参考。【方法】分别采用SS1 ZY194株、SS2 QH株、SS7 ZY188株感染新西兰兔,通过临床症状观察,HE染色分析病理组织变化;利用实时荧光定量PCR检测脏器载菌量;通过试剂盒检测血清与肝脏生化指标变化;利用ELISA检测相关炎症因子的表达水平。【结果】3个试验组中,SS2组新西兰兔的临床症状表现与脏器的病理变化程度最明显。试验组新西兰兔各脏器均载菌,其中SS2组各脏器载菌量高于SS1和SS7组,且脾脏是载菌量最高的器官。各试验组新西兰兔葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCHO)、低密度脂蛋白(LDL)和尿酸(UA)含量极显著或显著高于对照组(P<0.01;P<0.05),SS2和SS7组新西兰兔高密度脂蛋白(HDL)含量极显著低于对照组(P<0.01)。各试验组新西兰兔谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂肪酶(LPS)含量及炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平极显著或显著高于对照组(P<0.01;P<0.05),其中SS2组各指标的含量最高。【结论】不同血清型猪链球菌均可引起新西兰兔发病,其中SS2 QH株致病性最强。试验结果为猪链球菌病的致病机理研究提供借鉴,为临床防治该病提供理论基础。

关键词：猪链球菌血清型新西兰兔致病性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法多重RT-PCR检测方法的建立和应用

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中国兽医科学 2022年第7期52卷 805-814页

作者：王方洲张婧马雪青李平花包慧芳王健赵志荀李娇阳李国秀刘在新卢曾军曾巧英孙普甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为提高实验室诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的准确性,本研究分析了近几年国内流行的PRRSV毒株序列,针对主要流行的美洲型和欧洲型毒株设计合成特异性引物,建立PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,通过特异性、敏感性和重复性试验,与实... 详细信息

为提高实验室诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的准确性,本研究分析了近几年国内流行的PRRSV毒株序列,针对主要流行的美洲型和欧洲型毒株设计合成特异性引物,建立PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,通过特异性、敏感性和重复性试验,与实时荧光RT-PCR对比检测田间样品,评价该方法的检测能力。结果显示,本研究筛选出了3对特异性引物,成功建立了PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,扩增目的片段大小分别为408 bp、548 bp、689 bp,至少扩增出任意一条特异性条带即可判为阳性;对口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒均无特异性条带扩增;检测美洲型经典毒株VR-2332、高致病性毒株GSWW15株和NADC30样毒株GSWW18的最低病毒量范围为25~50 TCID_(50)/mL;45份田间临床样品的比对检测结果显示,本研究建立的多重RT-PCR检测方法检出阳性率为33.3%,与实时荧光RT-PCR方法的检测结果符合率为95.6%。结果表明,本研究建立的PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PRRSV流行病学的调查,具有良好的应用前景。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法多重RT-PCR 建立应用

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猪流行性腹泻病毒GX15株的遗传进化分析及其致病性初探

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中国动物传染病学报 2023年

作者：孙倩宋瑞鹏林俊覃绍敏陆晨阳杜泓明岑敏劳论邦刘金凤吴健敏广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室广西一遍天种猪集团

本研究针对一株分离自广西某地的猪流行性腹泻病毒（PEDV）GX15开展研究。GX15株基因全长为28042 nt，对其进行序列分析并构建遗传进化树，结果显示该毒株属于GIIb基因亚型，分析其毒力相关基因发现GX15株在S蛋白上的多个中和抗原表位... 详细信息

本研究针对一株分离自广西某地的猪流行性腹泻病毒（PEDV）GX15开展研究。GX15株基因全长为28042 nt，对其进行序列分析并构建遗传进化树，结果显示该毒株属于GIIb基因亚型，分析其毒力相关基因发现GX15株在S蛋白上的多个中和抗原表位存在变异，其中第254位天冬酰胺（N）和第255位色氨酸（W）的缺失不仅涉及病毒的中和表位，还涉及病毒的附着结构域（CAD），影响病毒与细胞间的结合；而ORF3基因虽然具有PEDV高致病性毒株的分子特征，但在ORF3蛋白上却有F70I和A126T 2个突变。动物感染试验发现，GX15株以104.23TCID50的病毒液经消化道途径人工感染6日龄仔猪可引起腹泻并导致仔猪死亡；以101.23TCID50剂量感染仔猪，仔猪出现腹泻但未发生死亡。本研究结果增进了对当前广西流行的PEDV GIIb亚型毒株遗传变异和致病性的了解，也为后续建立PEDV动物感染模型并进行致病机制研究奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒体外培养特性遗传进化分析动物感染试验

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桑桑牦牛MYL7基因克隆及生物信息学分析

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中国草食动物科学 2024年第4期44卷 15-21页

作者：马荣洛桑顿珠平措占堆卓玛次仁尼玛加措成述儒梁春年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育工程重点实验室兰州730050 甘肃农业大学兰州730070 农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室兰州730050 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所拉萨850004 日喀则市昂仁县农业农村局昂仁857001

克隆西藏桑桑牦牛肌球蛋白轻链7(Myosin light chain 7,MYL7)基因CDS区,进行生物信息学分析并检测该基因在各组织中的表达差异,为探究该基因功能提供一定的理论依据。以桑桑牦牛肌肉组织cDNA为模板,利用PCR技术克隆其CDS区序列,并利用... 详细信息

克隆西藏桑桑牦牛肌球蛋白轻链7(Myosin light chain 7,MYL7)基因CDS区,进行生物信息学分析并检测该基因在各组织中的表达差异,为探究该基因功能提供一定的理论依据。以桑桑牦牛肌肉组织cDNA为模板,利用PCR技术克隆其CDS区序列,并利用多种在线生物软件及工具进行生物信息学分析。结果表明,桑桑牦牛MYL7基因CDS区长447 bp,共编码148个氨基酸,该基因编码的蛋白分子式为C743H1155N187O237S7,原子数为2329个,理论等电点为4.37,不稳定系数和总平均亲水性分别为36.02和-0.364,属于稳定的亲水性蛋白;具有特异性的磷酸化位点11个,其中5个丝氨酸、5个苏氨酸和1个酪氨酸。MYL7蛋白无信号肽和跨膜螺旋结构,属于非分泌性蛋白。通过亚细胞定位发现,桑桑牦牛MYL7基因在线粒体、细胞核、细胞质、细胞膜中均有所分布。蛋白高级结构主要是α-螺旋和无规则卷曲。通过构建系统进化树发现,桑桑牦牛与野牦牛亲缘关系最近,符合实际情况,说明MYL7基因在进化过程中具有一定的保守性。

关键词：桑桑牦牛 MYL7基因基因克隆生物信息学分析

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甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球作为口蹄疫病毒核酸疫苗递送载体的特性评价

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畜牧兽医学报 2021年第12期52卷 3557-3568页

作者：李显张中旺张富东吕建亮李嘉豪潘丽中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/中国国家口蹄疫参考实验室兰州730064

旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactide-co-glycolide),PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)核酸疫苗递送载体进行评价。采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的... 详细信息

旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactide-co-glycolide),PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)核酸疫苗递送载体进行评价。采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的甘露糖修饰的壳聚糖衍生物(mannose modified chitosan,MCS),然后,经双重乳化挥发法制备得到甘露糖修饰的壳聚糖PLGA纳米微球(MCS-PLGA-NPs)。采用纳米粒径仪检测MCS-PLGA-NPs粒径分布和表面电势(zeta)、扫描电镜考察其形态、琼脂糖凝胶电泳观察其对质粒的吸附和吸附质粒后抵抗核酸酶降解能力、CCK-8法检测MCS-PLGA-NPs的细胞毒性、激光共聚焦观察巨噬细胞对MCS-PLGA-NPs-质粒DNA复合物的摄取、荧光显微镜和Western blot验证MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA在细胞中的表达。元素分析结果表明,成功制备了取代度为5%~10%的MCS。纳米粒径测定和扫描电镜结果表明,MCS-PLGA-NPs的zeta为正值、粒径分布均匀且形态规则呈球形。琼脂糖凝胶电泳结果显示,MCS-PLGA-NPs吸附质粒的能力随着其质量的增加而增强并且可以在一定程度上抵抗核酸酶降解质粒DNA。在细胞毒性试验中,不同浓度的MCS-PLGA-NPs与RAW264.7细胞共孵育24 h后,细胞存活率仍在85%以上。在细胞摄取试验中,用激光共聚焦显微镜可以明显观察到质粒DNA结合到纳米微球表面被RAW264.7细胞摄取。荧光显微镜和Western blot试验证明MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA可以在细胞中进行表达。综上表明,本研究成功制备了MCS以及具有递送核酸疫苗能力的MCS-PLGA-NPs,为FMDV核酸疫苗的递送研究提供了新的方向和见解,也为该递送载体携带特定抗原靶向抗原递呈细胞表面甘露糖受体以及应用于动物免疫的研究奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒甘露糖修饰的壳聚糖壳聚糖接枝聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球递送载体核酸疫苗

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大肠杆菌双质粒CRISPR-Cas9系统的优化及应用

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生物技术通报 2021年第12期37卷 252-264页

作者：王凯凯王晓璐苏小运张杰中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193

近年来,CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)基因编辑系统已经成功应用于多种微生物中。由于CRISPR-Cas9系统仅受PAM(protospacer adjacent motif)位点NGG的限制,因此理论上CRISPR-Cas9系统可以编辑基因组中任何含NGG的位点或基因,但研究发现该系统对影响微生物生长及代谢的关键靶基因改造时会出现效率降低,甚至是无法获得突变株的现象。前期已有大量研究报道了降低CRISPR-Cas9系统脱靶效应的策略,但依然未能有效解决编辑效率降低的问题。因此,本研究通过使用不同拷贝数的质粒调节Cas9、gRNA的表达和同源臂浓度使其协同发挥基因编辑功能,建立了更加高效的双质粒CRISPR-Cas9系统。试验结果表明,该系统对大肠杆菌pfkA(6-phosphofructokinase isozyme 1)、pfkB(6-phosphofructokinase isozyme 2)、zwf(glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase)单基因敲除最高效率达到100%;在nagABE基因簇位点通过替换引入甘油激酶基因glpK(glycerol kinase)的效率为10%。相比于单质粒CRISPR-Cas9系统,优化的双质粒系统成功进行了pfkB基因的敲除及glpK基因的整合,且将pfkA、zwf基因的敲除效率分别提升了31%和63%。突变株与野生株之间碳源代谢的差异进一步表明基因敲除效率与基因特殊活性相关。结果证明,过量的靶基因同源臂和gRNA的过表达可以有效提升CRISPR-Cas9系统在大肠杆菌中的编辑效率。

关键词： CRISPR-Cas9系统大肠杆菌基因编辑双质粒系统

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TaqMan荧光定量PCR检测滑液囊支原体方法的建立及其感染鸡血液内载量测定

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微生物学通报 2024年第9期51卷 3648-3657页

作者：朱悦祁晶晶武梦思张广冻丁思羽陈玥彤高崧于圣青扬州大学兽医学院江苏扬州225009 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 扬州优佳创生物科技有限公司江苏扬州225261 锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121000

【背景】滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是禽类的常见病原,严重危害家禽养殖业的发展。MS易与其他病原混合感染,给临床诊断造成困难,因此亟须建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对疑似患病禽进行快速诊断,以降低经济损失。【目... 详细信息

【背景】滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是禽类的常见病原,严重危害家禽养殖业的发展。MS易与其他病原混合感染,给临床诊断造成困难,因此亟须建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对疑似患病禽进行快速诊断,以降低经济损失。【目的】建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法,测定MS在感染鸡血液内的载量变化,为临床检测MS感染提供技术支持。【方法】参考GenBank中登录的MS基因保守区域序列设计特异性引物和探针,以温度梯度qPCR法确定最适退火温度,用矩阵法优化其引物和探针加入量,通过提取MS 0801基因组作为模板构建标准曲线,并进行特异性、灵敏度、重复性试验,建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法。使用建立的方法检测滴鼻攻毒和足垫攻毒后MS在感染鸡血液内的载量变化。【结果】建立的TaqMan荧光定量PCR方法最佳退火温度为55℃,引物和探针(10 mol/L)加入量分别为0.8 mL和0.4 mL;扩增曲线具有良好的线性关系,R^(2)>0.99;特异性强,仅对MS有特异性反应,对其他病原均无扩增反应;敏感性高,最低检测限为25 copies/μL;重复性好,批间试验和批内试验变异系数均小于2%。通过TaqMan荧光定量PCR检测MS在感染鸡血液内的动态变化,发现两个攻毒组MS含量的峰值和总体波动无明显差异,但足垫攻毒的MS在血液中的增殖要快于滴鼻攻毒。【结论】本实验建立了一种能够快速检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法,并用于检测MS在感染鸡血液内的动态变化,为临床上检测MS感染提供了技术支撑,为疫苗免疫评价方法提供了新的思路。

关键词：滑液囊支原体 TaqMan荧光定量PCR 攻毒模型增殖变化

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奶源异质性耐药大肠杆菌及其耐药亚群特性研究

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畜牧兽医学报 2024年第12期55卷 5813-5824页

作者：高姣姣郑楠邵伟陈贺马宪兰赵艳坤新疆农业大学动物科学学院新疆肉乳用草食动物营养实验室乌鲁木齐830052 新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(乌鲁木齐)新疆农产品质量安全实验室乌鲁木齐830091 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部奶及奶制品质量安全控制重点实验室北京100193

旨在探究奶源大肠杆菌是否存在异质性耐药现象,对异质性耐药大肠杆菌及其耐药亚群的生物学特性进行研究,探究其可能的异质性耐药机制。本研究采用微量肉汤稀释法测定从生牛乳中分离得到的1株大肠杆菌D1的最低抑菌浓度(minimum inhibitor... 详细信息

旨在探究奶源大肠杆菌是否存在异质性耐药现象,对异质性耐药大肠杆菌及其耐药亚群的生物学特性进行研究,探究其可能的异质性耐药机制。本研究采用微量肉汤稀释法测定从生牛乳中分离得到的1株大肠杆菌D1的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),采用K-B纸片扩散法对大肠杆菌的异质性耐药情况进行初筛,采用菌落谱型分析(population analysis profile,PAP)进行确证,并通过耐药稳定性测试和生物膜试验探究大肠杆菌的异质性耐药特征,最后通过全基因组测序和重测序分析产生异质性耐药的机制。结果发现,该株大肠杆菌对多黏菌素E表现为中介,对磺胺异恶唑耐药,对其余抗生素表现为敏感,K-B纸片扩散法筛出2种大肠杆菌-抗菌药物异质性耐药组合。PAP确证显示,D1-阿莫西林-克拉维酸的MIC/最高非抑菌浓度(maximum noninhibitory concentration,MNIC)的比值为8,耐药亚群的发生频率为2.45×10^(-6),确证为多西环素异质性耐药菌株。传代稳定性表明耐药亚群不能稳定遗传,而生长试验不存在生长滞后现象,耐药亚群的生物膜产量极显著大于亲本菌株。全基因组测序结果发现,耐药亚群与亲本菌株之间存在基因突变,而突变基因txR是一种特定的转录调节因子,可能导致大肠杆菌对多西环素产生异质性耐药。奶源大肠杆菌存在多西环素异质性耐药的现象,提示临床中应合理使用多西环素抗生素,因此在使用多西环素进行临床治疗时应更加注意异质性耐药的发生,需采用有效的检测方法,为临床防控和合理使用抗生素提供指导。

关键词：奶源大肠杆菌异质性耐药耐药亚群全基因组

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