检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2021年第12期53卷 99-104页

作者：张韬李茂林邹抒洁 Manita Aryal 刘光亮付钰广中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

旨在制备猪博卡病毒(porcine bocavirus, PBoV)VP1蛋白的多克隆抗体。利用PCR技术对PBoV VP1蛋白的基因进行扩增,将所获基因克隆入原核表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。纯化后的目的蛋白与ISA206佐剂混合后通过... 详细信息

旨在制备猪博卡病毒(porcine bocavirus, PBoV)VP1蛋白的多克隆抗体。利用PCR技术对PBoV VP1蛋白的基因进行扩增,将所获基因克隆入原核表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。纯化后的目的蛋白与ISA206佐剂混合后通过背部皮下免疫日本大耳白兔,3次加强免疫后,收集兔血清,利用间接ELISA、Western blot与间接免疫荧光(IFA)的方法验证并评价多克隆抗体的效价与反应性。结果显示,成功获得PBoV VP1蛋白目的基因,利用原核表达系统大量表达了VP1蛋白,并制备多克隆抗体;ELISA滴定结果显示,该抗体在稀释至12 800倍时反应性依旧良好;Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体可与VP1蛋白条带发生特异性结合;将PBoV感染的猪肠道组织制备冰冻切片,IFA检测结果表明,该抗体与PBoV具有良好的反应性。上述结果表明,本研究成功制备了针对PBoV VP1蛋白的兔多克隆抗体,为深入研究PBoV的VP1蛋白生物学功能奠定了一定物质基础。

关键词：猪博卡病毒 VP1蛋白多克隆抗体

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捻转血矛线虫PCR检测方法的建立及其应用

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西北农业学报 2023年第1期32卷 139-144页

作者：邹敏要慧中杨冰可周璐露赵光明杨文欢吴昌林青西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 陕西省动物疫病预防控制中心西安710299 商南县农业综合执法大队陕西商南726300 家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046

为了能从粪便中对捻转血矛线虫卵进行特异性检测,基于捻转血矛线虫ITS2-28S基因序列设计特异性引物,通过对退火温度反应条件优化,建立捻转血矛线虫特异性PCR检测方法。结果显示,该方法成功从捻转血矛线虫卵中扩增出约270 bp的特异性片段... 详细信息

为了能从粪便中对捻转血矛线虫卵进行特异性检测,基于捻转血矛线虫ITS2-28S基因序列设计特异性引物,通过对退火温度反应条件优化,建立捻转血矛线虫特异性PCR检测方法。结果显示,该方法成功从捻转血矛线虫卵中扩增出约270 bp的特异性片段,其最低检出质量浓度为0.298 pg/μL,敏感性较高;进一步对捻转血矛线虫、细颈线虫、粗纹食道口线虫等多种线虫的虫卵DNA样品进行扩增,该方法仅能特异性扩增出捻转血矛线虫卵的目的片段,证明特异性良好。利用所建立的PCR检测方法对120只山羊的粪便样品进行检测,显示受检样品中捻转血矛线虫阳性率为38.3%,高于显微镜检测结果(阳性率为24.2%)。结果表明,该研究建立的PCR方法能够应用于临床检测山羊粪便样品中的捻转血矛线虫卵,可为山羊捻转血矛线虫病的诊断与防治提供有效技术支持。

关键词：山羊捻转血矛线虫聚合酶链反应 ITS2-28S基因虫卵检测

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表达D型流感病毒HEF蛋白重组新城疫病毒的拯救及其免疫原性研究

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中国兽医科学 2021年第9期51卷 1082-1089页

作者：张鑫张进进贾艳娥罗建勋吉艳红中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

D型流感病毒是近年来新发现的一种流感病毒,宿主范围、地域分布广泛,可与其它呼吸道病毒一起引起严重的牛呼吸道疾病,给家畜养殖业造成了威胁,并存在跨越种间屏障向人类传播的风险。国外的D型流感疫苗研究结果虽然并不理想,但已经在灭... 详细信息

D型流感病毒是近年来新发现的一种流感病毒,宿主范围、地域分布广泛,可与其它呼吸道病毒一起引起严重的牛呼吸道疾病,给家畜养殖业造成了威胁,并存在跨越种间屏障向人类传播的风险。国外的D型流感疫苗研究结果虽然并不理想,但已经在灭活苗和DNA疫苗两个方向都有所涉及,而国内对于D型流感疫苗的研究尚未有报道。D型流感病毒基因组由7个RNA片段组成,共编码9种蛋白。血凝素酯酶融合蛋白(hemagglutinin-esterase-fusion,HEF)是D型流感病毒唯一的糖蛋白,具有A型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白的功能,同时有较强的免疫原性,是开发预防性疫苗的关键免疫原。本研究采用反向遗传学技术拯救了表达HEF蛋白的重组新城疫病毒,命名为rNDV-F-HEF(NDV97 F裂解位点替换为Lasota裂解位点的突变病毒);传代测序验证重组病毒的遗传稳定性,结果显示HEF基因在重组新城病毒rNDV-F-HEF中可以稳定遗传;Western-blot试验和间接免疫荧光试验表明rNDV-F-HEF能成功表达外源蛋白HEF;rNDV-F-HEF在鸡胚和雏鸡体内的毒力和生长能力与其亲本毒株NDV-F基本一致;rNDV-F-HEF肌肉注射免疫BALB/c小鼠的血清中含有HEF特异性Ig G抗体,其含量在三免后的第7天既能达到较高水平(约1800 ng/m L),说明rNDV-F-HEF具有防控IDV的潜质。重组病毒株rNDV-F-HEF可以用于IDV的预防性疫苗研发。

关键词： D型流感病毒 HEF蛋白新城疫病毒反向遗传学免疫原性

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猪瘟与口蹄疫二联疫苗的制备及其免疫效果评价

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中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 172-178页

作者：高洁袁红焦云娟李坤李平花杨宇轩黄书伦郭海洋邱酉飞包慧芳孙普李冬刘在新卢曾军白兴文中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 WOAH/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r... 详细信息

为研制猪瘟(CSF)与口蹄疫(FMD)二联疫苗并评价其免疫效果,本研究采用真核表达系统瞬时表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白后经AKTA蛋白纯化仪和Hi Trap TALON纯化柱纯化,采用SDS-PAGE检测重组E2蛋白(r E2)的表达与纯化效果,采用western blot检测r E2与His-Tag单克隆抗体(MAb)的反应原性。结果显示,在约50 ku处出现目的蛋白条带,纯化后在约50 ku处出现单一条带。western blot结果显示在50 ku处出现特异性条带。表明,r E2获得了表达且纯化效果较好,反应原性较强。将纯化后的r E2与灭活的口蹄疫病毒(FMDV)O/Tibet/99株混合后经ISA 201佐剂乳化制备二联疫苗,将小鼠分为4组:CSFV E2+FMDV(20μg^(+)1μg)组、CSFV E2(20μg)组、FMDV(1μg)组及PBS阴性对照组。于第1 d和21 d分别将相应疫苗以肌肉注射方式免疫6周龄~8周龄的各组雌性BALB/c小鼠,首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d采血,利用ELISA检测各组小鼠血清中的抗体水平;利用流式细胞术检测免疫后42 d各组小鼠血液中CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞和CD19^(+)B淋巴细胞的占比;采用ELISA检测免疫后42 d各组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平。抗体检测结果显示,与PBS组相比,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠产生的针对两种病毒的抗体水平均显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组和FMDV组小鼠血清中CSFV和FMDV的抗体水平均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术结果显示,E2组、FMDV组和E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞及CD19^(+)B淋巴细胞的占比均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01、P<0.0001);E2+FMDV组与E2组小鼠上述指标均无显著差异;与FMDV组相比,E2+FMDV组小鼠CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞的占比极显著升高(P<0.01),而另外两个指标均无显著差异。ELISA检测结果显示,3个实验组小鼠血清中IFN-γ的分泌水平均显著和极显著高于PBS组(P<0.05、P<0.01),E2+FMDV组与二者单独免疫组小鼠IFN-γ的分泌水平均无显著差异。上述结果表明,E2+FMDV二联疫苗对小鼠的免疫效果与单独免疫E2亚单位疫苗和FMDV灭活疫苗的免疫效果相当,CSFV E2蛋白与FMDV灭活病毒的联合免疫是可行的。综上,本研究首次制备的CSFV E2+FMDV二联苗可作为防控CSF和FMD的一种潜在候选疫苗,为这两种病毒二联甚至多联疫苗的研制奠定了实验基础。

关键词：猪瘟 E2蛋白口蹄疫二联疫苗

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细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因的生物信息学分析及原核表达

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中国病原生物学杂志 2024年第5期19卷 555-561页

作者：赵文卿薄新文普娜张玉霞陈旭珂张艳艳孙艳齐萌王正荣塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子大学动物科技学院

目的了解细粒棘球绦虫的乳酸脱氢酶蛋白基因的生物信息学特性,并进行原核表达。方法利用NCBI网站登录的细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因序列设计特异性引物和qRT-PCR引物,使用PCR扩增细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因,使用荧光定量法检测细粒棘... 详细信息

目的了解细粒棘球绦虫的乳酸脱氢酶蛋白基因的生物信息学特性,并进行原核表达。方法利用NCBI网站登录的细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因序列设计特异性引物和qRT-PCR引物,使用PCR扩增细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因,使用荧光定量法检测细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶在不同发育阶段的相对表达量,使用生物信息学软件对细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶蛋白进行分析;构建重组pET28a-EgLdh质粒,转进大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blot对蛋白进行免疫原性分析;利用原核表达重组pET28a-EgLDH蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光分析其在虫体上的分布。结果生物信息学分析发现EgLDH全长996 bp,编码331个氨基酸,分子式为C_(1575)H_(2561)N_(425)O_(470)S_(17),相对分子质量为35516.25,理论等电点为6.32,不稳定指数为27.96,显示为稳定蛋白,脂肪系数为106.83,亲水性为0.236,为疏水性蛋白,有13个潜在的B细胞抗原表位;通过双酶切鉴定及测序分析证明,pET28a-EgLDH重组质粒构建成功。重组质粒pET28a-EgLDH转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞后使用IPTG成功诱导表达蛋白,分子质量约为40 ku,Western blot结果显示,重组蛋白能被感染棘球蚴的犬阳性血清识别,表明其均具有良好的反应原性。EgLDH在细粒棘球绦虫阶段的相对转录水平显著高于原头蚴阶段。间接免疫荧光分析显示其定位在原头蚴的表皮层。结论rEgLDH具有较好的免疫活性,是一种潜在的疫苗候选抗原。

关键词：细粒棘球绦虫 EgLDH基因生物信息学分析原核表达

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兔出血症病毒和多杀巴氏杆菌嵌合蛋白VP60-Plp E的构建及其免疫原性鉴定

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中国动物传染病学报 2023年第4期31卷 82-88页

作者：朱伟峰范志宇胡波魏后军王芳陈露江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

兔病毒性出血症(兔瘟)和兔巴氏杆菌病是对家兔危害最严重的两种疫病。用于防控这两种疫病的二联灭活疫苗存在着生产成本偏高问题。虽然基因工程亚单位疫苗的应用有助于提升二联苗的效力,但是生产成本依然偏高。本研究的目的是获得一种... 详细信息

兔病毒性出血症(兔瘟)和兔巴氏杆菌病是对家兔危害最严重的两种疫病。用于防控这两种疫病的二联灭活疫苗存在着生产成本偏高问题。虽然基因工程亚单位疫苗的应用有助于提升二联苗的效力,但是生产成本依然偏高。本研究的目的是获得一种嵌合了巴氏杆菌保护性抗原PlpE的表位的兔出血症病毒VP60重组蛋白。首先通过Bepipred-2.0分析,确定PlpE的免疫显性区域主要位于N端。然后将编码PlpE26-45位、51-95位氨基酸序列的基因片段连接到VP60基因的5’端和3’端,并通过杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得嵌合了PlpE表位的重组蛋白VP60-PlpE。血凝试验显示VP60-PlpE具有明显的血凝活性,提示重组蛋白仍然能够形成病毒样颗粒。Western blot实验结果表明VP60-PlpE与PlpE抗血清反应明显。小鼠免疫保护力实验表明VP60-PlpE对巴氏杆菌具有免疫保护力。家兔免疫保护力实验表明VP60-PlpE对兔出血症病毒和巴氏杆菌均具有免疫保护作用。总之,本研究成功构建出一种嵌合了巴氏杆菌保护性表位的兔出血症病毒VP60,为研制更低成本的兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌病亚单位疫苗提供了基础。

关键词：兔出血症病毒巴氏杆菌表位嵌合抗原 PlpE VP60

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关于我国种猪场猪肺炎支原体净化的思考

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中国兽医杂志 2024年第3期60卷 154-156页

作者：冯志新江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程重点实验室江苏南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300

猪肺炎支原体是一种对生猪影响较大的细菌性病原体,往往可引起猪群发生慢性感染,且难以从猪群和猪场水平上清除,导致养猪业遭受巨大的经济损失。猪肺炎支原体净化在欧洲和北美已全面启动,且有成功案例,我国才刚刚启动。本文结合国外猪... 详细信息

猪肺炎支原体是一种对生猪影响较大的细菌性病原体,往往可引起猪群发生慢性感染,且难以从猪群和猪场水平上清除,导致养猪业遭受巨大的经济损失。猪肺炎支原体净化在欧洲和北美已全面启动,且有成功案例,我国才刚刚启动。本文结合国外猪肺炎支原体净化方案的经验与我国生猪养殖特殊性的分析,提出分群体、分阶段的“三步法”净化建议,并对我国猪肺炎支原体的净化提出了展望。

关键词：种猪场猪肺炎支原体净化

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蓝舌病毒血清1型VP5蛋白的截短表达及其单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2025年

作者：刘学春户鑫兵宋昱庆孟凡华田占成关贵全殷宏独军政中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学

参考GenBank中蓝舌病毒血清1型（BTV-1）标准参考株VP5蛋白氨基酸序列，缺失N端1～79位氨基酸，按照大肠杆菌偏嗜性进行基因密码子优化后，合成编码BTV-1 VP5截短蛋白的基因VP5Δ79aa，将其克隆到表达载体pET-28a-sumo上，构建了重组质... 详细信息

参考GenBank中蓝舌病毒血清1型（BTV-1）标准参考株VP5蛋白氨基酸序列，缺失N端1～79位氨基酸，按照大肠杆菌偏嗜性进行基因密码子优化后，合成编码BTV-1 VP5截短蛋白的基因VP5Δ79aa，将其克隆到表达载体pET-28a-sumo上，构建了重组质粒pET-sumo-VP5Δ79aa。将该重组质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG分别在37 ℃和16 ℃条件下进行诱导表达和可溶性分析，经SDS-PAGE检测，重组VP5Δ79aa蛋白主要以包涵体形式表达。用Ni-NTA亲和层析法纯化重组VP5Δ79aa蛋白，得到与预期大小相符的单一目的条带。纯化后的重组VP5Δ79aa蛋白经不同浓度梯度的尿素透析复性后，将其免疫雌性BALB/c小鼠（6～8周龄），取免疫后脾细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接ELISA、免疫荧光和Western-blot分析，筛选得到2株反应性和特异性良好的单克隆抗体4A10和5H11，其不仅能与重组VP5Δ79aa截短蛋白以及重组全长VP5蛋白反应，而且能特异识别BTV-1感染细胞中的天然VP5蛋白，这为深入研究BTV VP5蛋白的生物学功能及其抗原表位鉴定奠定了基础。

关键词：蓝舌病毒 VP5蛋白截短表达单克隆抗体

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蛋鸡输卵管内鸭源鸡杆菌的分离鉴定与生物学特性分析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：张政钢金鑫鑫梁睿钦蔡梦雷赵东旭刘建钗罗青平崔国林河北工程大学生命科学与食品工程学院湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室湖北洪山实验室

2023年9月湖北省武汉市某鸡场23周龄开产初期海兰褐蛋种鸡出现产蛋率和产蛋质量下降的现象，并伴随鸡只持续死亡，对蛋鸡养殖户造成了较大的经济损失。为探究该病例发生原因，本研究采集发病蛋鸡输卵管，采用7%绵羊血琼脂培养基进行细... 详细信息

2023年9月湖北省武汉市某鸡场23周龄开产初期海兰褐蛋种鸡出现产蛋率和产蛋质量下降的现象，并伴随鸡只持续死亡，对蛋鸡养殖户造成了较大的经济损失。为探究该病例发生原因，本研究采集发病蛋鸡输卵管，采用7%绵羊血琼脂培养基进行细菌分离和纯化，挑选出强溶血性的分离菌株进行鸭源鸡杆菌（***）特异性PCR检测；对分离菌株进行16S rRNA基因测序，并进行系统进化分析；采用药敏纸片法检测分离菌株药敏性质，并采用PCR测定相应耐药基因；将分离菌株采用腹腔注射途径攻毒雏鸡，6×105-6×107CFU/只，测定分离株致病力。结果显示本研究共分离到1株强溶血性细菌，分离菌株与已报道的*** 16S rRNA基因核苷酸同源性均大于99%；且具有***特异性基因序列；分离菌株对四环素、阿米卡星和环丙沙星等13种抗生素耐药，与PCR检测到的耐药基因blaTEM、StrA、sul2等结果一致；动物感染试验结果表明，分离株对雏鸡的LD50为3.16×107，同居组雏鸡在同居2d后咽拭子检测到***，结果表明分离菌株为***，其具有多重耐药性和耐药基因，对雏鸡致病力较强，且具有较强的水平传播能力。

关键词：鸭源鸡杆菌 16S rRNA 耐药性致病性

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基于主成分、隶属函数和全株玉米青贮质量评分指数综合评价我国不同规模奶牛场的全株玉米青贮质量

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动物营养学报 2023年第12期35卷 8122-8132页

作者：陈雅坤杨鹏标闫威明杨嘉宇张建勇呼德赵连生卜登攀中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽营养与饲养全国重点实验室北京100193 上海牧高生物科技有限公司上海201306 河南科技大学洛阳471000 宁夏回族自治区畜牧工作站银川750004

本试验旨在研究我国不同规模奶牛场的全株玉米青贮质量,比较不同青贮质量综合评定方法,为青贮饲料质量评价和调制优质青贮饲料提供理论依据。从我国17个省区不同规模奶牛场采集474个全株玉米青贮样品,通过检测全株玉米青贮质量的相关指... 详细信息

本试验旨在研究我国不同规模奶牛场的全株玉米青贮质量,比较不同青贮质量综合评定方法,为青贮饲料质量评价和调制优质青贮饲料提供理论依据。从我国17个省区不同规模奶牛场采集474个全株玉米青贮样品,通过检测全株玉米青贮质量的相关指标,并分别运用主成分分析、隶属函数分析和全株玉米青贮质量评分指数(CSQS)分析对不同规模奶牛场的全株玉米青贮质量进行综合分析。结果表明:1)不同规模奶牛场全株玉米青贮中干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维、淀粉、粗脂肪、乳酸含量存在显著差异(P<0.05);2)主成分分析提取了5个主成分,累计贡献率达到85.01%,反映了原有指标大部分信息;3)主成分分析、隶属函数分析和CSQS分析结果均显示不同规模奶牛场全株玉米青贮质量由高到低依次为5000头以上、3000~5000头、1000~2999头、500~999头、500头以下。综上所述,奶牛场规模越大,全株玉米青贮质量越好。3种综合评价方法结果一致,但CSQS分析方法由于涉及指标较少,更简便易行,便于推广使用。

关键词：全株玉米青贮主成分隶属函数全株玉米青贮质量评分指数青贮质量综合评价

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