检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2023年第2期54卷 706-714页

作者：张婷冯涛杨金柯郝雨杨行张大俊史喜绢闫文倩陈玲玲刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要,本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因,以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130... 详细信息

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要,本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因,以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130,将重组转移载体转染骨髓源巨噬细胞(BMDMs),以ASFV CN/GS/2018为亲本毒株感染BMDM,在β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)存在的条件下,经绿色荧光和PCR鉴定,获得条件性敲除D1133L重组毒株vD1133Li。利用荧光显微镜观察该重组毒株与亲本毒株在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中的复制差异,利用qPCR技术比较重组病毒与亲本毒株的复制差异,分析vD1133Li在无IPTG情况下回补D1133L蛋白后与在IPTG诱导情况下的复制差异。结果显示:本研究成功构建了条件性敲除D1133L的ASFV重组病毒vD1133Li,重组毒株不表达D1133L,在IPTG诱导下复制能力显著低于亲本毒株;在稳定表达D1133L的MA-104细胞系中,vD1133Li复制能力恢复。综上所述,D1133L基因对于ASFV复制至关重要,试验结果为进一步研究D1133L在ASFV致病中的机制及针对D1133L靶向药物研发提供了研究基础。

关键词：非洲猪瘟病毒条件性D1133L基因缺失重组病毒增殖特性

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O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒单抗制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4012-4020页

作者：廖焕程石正旺罗俊聪王婉莹冯露周静张帆石鑫泰田宏中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

本研究旨在纯化O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒抗原,并制备单克隆抗体,为口蹄疫新型Cathay毒株的研究提供生物材料。PEG沉淀法纯化O型口蹄疫Cathay毒株抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用间接ELISA方法筛选阳性... 详细信息

本研究旨在纯化O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒抗原,并制备单克隆抗体,为口蹄疫新型Cathay毒株的研究提供生物材料。PEG沉淀法纯化O型口蹄疫Cathay毒株抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用间接ELISA方法筛选阳性细胞,有限稀释法进行亚克隆,获得2株能够稳定分泌特异性针对O型口蹄疫Cathay株病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为10E6与11C7。叠加试验表明,两株单抗的叠加率为49.45%,识别不同的抗原表位。间接ELISA和IFA试验显示,两株单抗与O型口蹄疫Cathay株病毒具有良好的反应性。单抗特异性检测结果表明,2株单抗均能特异性识别Cathay株口蹄疫病毒,不与其他口蹄疫病毒毒株交叉反应。抗体亚型鉴定结果显示,10E6单抗的轻链为Kappa链,11C7单抗的轻链为Lamda链,两株单抗重链类型均为IgG2a。结果表明,本研究成功制备了两株特异性结合O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒的单克隆抗体,两株单抗均具有良好的反应性与特异性。应用两株单抗建立O型口蹄疫Cathay病毒的双抗体夹心ELISA检测方法,该ELISA检测方法特异性、重复性和敏感性良好,为O型口蹄疫Cathay毒株的快速诊断防控与研究建立了基础。

关键词： O型口蹄疫病毒 Cathay拓扑型杂交瘤细胞单克隆抗体 ELISA

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地顶孢霉培养物对北京鸭生长性能、屠宰性能、血常规及血清生化、抗氧化指标的影响

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中国畜牧兽医 2025年第1期52卷 215-225页

作者：金银姬齐志国付瑶王岐蒙曹俊婷闻治国郭江鹏吴永保中国农业科学院饲料研究所农业农村部饲料生物技术重点实验室北京100081 北京市畜牧站北京100107

[目的]本试验旨在研究地顶孢霉培养物对北京鸭生长性能、屠宰性能、血常规及血清生化、抗氧化指标的影响。[方法]选取216只1日龄健康雄性北京鸭(51.36 g±0.15 g),随机分成3组,每组8个重复,每重复12只鸭,分别饲喂在玉米-豆粕型基础... 详细信息

[目的]本试验旨在研究地顶孢霉培养物对北京鸭生长性能、屠宰性能、血常规及血清生化、抗氧化指标的影响。[方法]选取216只1日龄健康雄性北京鸭(51.36 g±0.15 g),随机分成3组,每组8个重复,每重复12只鸭,分别饲喂在玉米-豆粕型基础饲粮中添加0(对照组)、0.1%、0.2%地顶孢霉培养物的饲粮,饲喂期42 d。统计试验鸭生长性能和屠宰性能,并采集全血和血清样品,测定血常规、血清生化生理和抗氧化指标。[结果](1)饲粮中添加0.1%和0.2%地顶孢霉培养物对北京鸭生长性能均无显著影响(P>0.05)。(2)0.1%地顶孢霉培养物组北京鸭胸肌率显著高于对照组和0.2%添加组(P<0.05);0.2%地顶孢霉培养物组北京鸭肝脏指数显著低于对照组(P<0.05)。(3)与对照组相比,0.2%地顶孢霉培养物组北京鸭血液中淋巴细胞(LYM)和中间细胞数量(MID)以及红细胞宽度标准差(RDW-SD)显著提高,红细胞(WBC)和粒细胞数量(GRA)显著降低(P<0.05)。(4)与对照组相比,0.1%和0.2%地顶孢霉培养物组北京鸭血清葡萄糖含量显著降低(P<0.05),0.1%地顶孢霉培养物组北京鸭血清中甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。(5)与对照组相比,0.1%和0.2%地顶孢霉培养物组42日龄北京鸭血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性均显著提高(P<0.05);与对照组和0.1%地顶孢霉培养物组相比,0.2%地顶孢霉培养物组42日龄北京鸭血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著提高(P<0.05)。[结论]饲粮中添加0.1%和0.2%地顶孢霉培养物未能提高北京鸭生长性能和器官发育,但可显著提高北京鸭胸肌率、机体免疫和抗氧化能力,促进机体葡萄糖和脂肪代谢。

关键词：地顶孢霉培养物北京鸭生长性能屠宰性能抗氧化能力

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犬冠状病毒诊断技术研究进展

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中国兽医科学 2023年第1期53卷 101-106页

作者：张成琪石正旺万颖罗俊聪田宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州1730046 中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112

犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)、α冠状病毒属成员。近几年,冠状病毒感染犬的比例正在不断上升,加上有研究表明犬也会感染新型冠状病毒,而市... 详细信息

犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)、α冠状病毒属成员。近几年,冠状病毒感染犬的比例正在不断上升,加上有研究表明犬也会感染新型冠状病毒,而市场上缺少治疗冠状病毒的特效药物。因此,快速、精确的诊断宠物疫病对该病的防控起到不可或缺的作用。目前,犬冠状病毒常用的检测技术分为临床诊断、病原学检查和血清学检查,但由于冠状病毒病的流行病学特点、临床症状以及病理剖检缺乏特征性变化,据此只能作出初步诊断,病原学检查主要分为病毒分离培养、电镜诊断、PCR、RPA、夹心ELISA和RT-RAA;血清学检查主要分为中和试验、间接ELISA、胶体金免疫层析试纸条。2019年新型冠状病毒感染导致的疫情在全球爆发以来,备受社会各界关注,一些新的变异毒株也在不断出现。因此,亟需一种快速、简便、成本低、灵敏性高、特异性强的诊断方法来监测、预警疫情,为进一步研发特异性疫苗提供参考与帮助。

关键词：检测冠状病毒犬

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兰州熊蜂产卵工蜂血淋巴的蛋白质组学分析

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农业生物技术学报 2023年第7期31卷 1477-1487页

作者：董捷黄敏婕吴杰韩蕾王德前浙江省农业科学院畜牧兽医研究所中国农业科学院蜜蜂研究所/农业部授粉昆虫生物学重点开放实验室

熊蜂出现工蜂卵巢发育并产卵的现象预示着蜂群发展的衰败，工蜂的劳动分工由产卵前的积极采集转变为专职产卵，将对蜂群的采集力和授粉效果造成不利影响。为了探究工蜂产卵的调控机制，本研究利用非标记(label-free)定量蛋白质组学技术... 详细信息

熊蜂出现工蜂卵巢发育并产卵的现象预示着蜂群发展的衰败，工蜂的劳动分工由产卵前的积极采集转变为专职产卵，将对蜂群的采集力和授粉效果造成不利影响。为了探究工蜂产卵的调控机制，本研究利用非标记(label-free)定量蛋白质组学技术，对兰州熊蜂(Bombus lantschouensis)产卵与未产卵工蜂血淋巴中的差异表达蛋白(differentially expressed proteins, DEPs)进行鉴定和比较，并对DEPs进行GO分类和KEGG通路富集分析，利用qRT-PCR对随机选取的6个DEPs进行转录水平的验证。结果显示，产卵与未产卵工蜂血淋巴共鉴定得到370个DEPs，其中在产卵工蜂上调表达的蛋白有212个，下调表达的蛋白有158个；GO功能注释发现DEPs富集最多的条目为代谢过程(61个DEPs)，其次是催化活性(60个DEPs)和结合功能(50个DEPs)，其中富集在解毒、免疫和抗氧化活性功能的DEPs均呈上调趋势；KEGG通路富集分析显示，DEPs显著富集于能量代谢密切相关的糖酵解/糖异生、碳代谢、脂肪酸氧化、乙醛酸和二羧酸代谢通路，以及蛋白合成相关的细胞外基质受体互作、核糖体和蛋白酶体代谢通路，与昆虫生长发育相关的Notch和Hippo信号通路上也有DEPs显著富集；随机挑选的6个DEPs在转录水平的变化趋势与蛋白质组学结果一致。本研究为深入探讨兰州熊蜂工蜂产卵调控的分子机制提供基础资料，为实现人工抑制工蜂产卵现象提供一定的理论指导。

关键词：兰州熊蜂血淋巴差异表达蛋白(DEP) 产卵工蜂 KEGG通路非标记定量蛋白质组学

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发酵玉米芯对肉牛生长性能、瘤胃发酵参数及菌群的影响

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动物营养学报 2024年第2期36卷 1039-1049页

作者：刘依莎张巧娥许迟吴仙花李涛梁小军宁夏大学动物科技学院银川750021 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 宁夏大北农科技实业有限公司银川750200 宁夏农林科学院动物科学研究所银川750002

本试验旨在研究发酵玉米芯对肉牛生长性能、瘤胃发酵参数及菌群的影响。选用60头体况良好、13月龄左右、体重[(395±32)kg]相近的西门塔尔杂交牛,随机分为3组,每组20个重复,每个重复1头牛。对照组饲喂不添加发酵玉米芯的全混合日粮... 详细信息

本试验旨在研究发酵玉米芯对肉牛生长性能、瘤胃发酵参数及菌群的影响。选用60头体况良好、13月龄左右、体重[(395±32)kg]相近的西门塔尔杂交牛,随机分为3组,每组20个重复,每个重复1头牛。对照组饲喂不添加发酵玉米芯的全混合日粮,试验1组饲喂添加10%发酵玉米芯的全混合日粮,试验2组饲喂添加20%发酵玉米芯的全混合日粮,预试期7 d,正试期93 d。结果显示:1)试验1、2组的平均日采食量和平均日增重显著高于对照组(P<0.05),料重比显著低于对照组(P<0.05)。2)试验1、2组瘤胃液氨态氮(NH_(3)-N)浓度与对照组相比均显著升高(P<0.05),试验2组瘤胃液微生物蛋白(MCP)浓度与对照组和试验1组相比显著提高(P<0.05);各组瘤胃液pH无显著差异(P>0.05);2个试验组瘤胃液总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度均显著低于对照组(P<0.05),但乙酸、丙酸、戊酸摩尔百分比及乙酸/丙酸值没有显著变化(P>0.05);2个试验组瘤胃液丁酸摩尔百分比显著低于对照组(P<0.05),而异丁酸和异戊酸摩尔百分比均显著高于对照组(P<0.05)。3)门水平上,拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)为3组肉牛瘤胃菌群中的主要优势菌门。试验1、2组Bacteroidetes的相对丰度显著高于对照组(P<0.05),试验2组Firmicutes的相对丰度显著低于对照组(P<0.05)。属水平上,3组的主要优势菌属均为普雷沃氏菌属(Prevotella)、拟杆菌目未鉴定属(unidentified Bacteroidales)。试验1、2组普雷沃氏菌科未鉴定属(unidentified Prevotellaceae)的相对丰度显著高于对照组(P<0.05),同时试验1组还显著高于试验2组(P<0.05);对照组Ruminococcus和甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)的相对丰度显著高于试验1、2组(P<0.05);试验2组的梭菌目未分类属(unclassified Clostridiales)和毛螺菌科未鉴定属(unidentified Lachnospiraceae)的相对丰度显著低于对照组和试验1组(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加发酵玉米芯能够提高肉牛的生长性能,改善瘤胃发酵环境,同时影响瘤胃菌群在门水平和属水平上的组成。

关键词：发酵玉米芯西门塔尔杂交牛生长性能瘤胃发酵参数菌群组成

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结构疫苗学的研究进展

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中国兽医科学 2025年第5期55卷 655-661页

作者：宁小雨邵军军常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

疫苗作为有效防控传染病的重要手段，在预防人和畜禽传染病方面发挥了十分重要的作用。尤其是近年来，新发传染性疫病不断出现，造成了巨大的经济损失和恶劣的社会影响。因此，利用新技术快速设计研发针对新发传染病的疫苗显得尤为重要... 详细信息

疫苗作为有效防控传染病的重要手段，在预防人和畜禽传染病方面发挥了十分重要的作用。尤其是近年来，新发传染性疫病不断出现，造成了巨大的经济损失和恶劣的社会影响。因此，利用新技术快速设计研发针对新发传染病的疫苗显得尤为重要。结构疫苗学作为近年来发展的一种新型疫苗研究方法，可以快速设计抗原结构完整且具有保护效果的疫苗，及时用于疫病防控。本文就结构疫苗学进展做一综述。

关键词：结构疫苗学免疫原表位疫苗

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国内部分地区猪禽粪便中产气荚膜梭菌的分离鉴定、耐药性及生物被膜形成能力分析

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中国动物传染病学报 2025年

作者：闫安龙张亚南王帝刘畅胡剑刚田明星鲍衍清祁晶晶王晓晔李珣王少辉广西大学动物科学技术学院中国农业科学院上海兽医研究所

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是一种常见的条件致病性厌氧菌，广泛存在于猪禽等动物肠道和环境中，可引发坏死性肠炎、肠毒血症等多种疾病。本研究从上海市、江苏省、山东省、河南省、广西壮族自治区、黑龙江省多个地区养... 详细信息

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是一种常见的条件致病性厌氧菌，广泛存在于猪禽等动物肠道和环境中，可引发坏死性肠炎、肠毒血症等多种疾病。本研究从上海市、江苏省、山东省、河南省、广西壮族自治区、黑龙江省多个地区养禽（鸡、鸭、鹅）场和养猪场采集198份粪便样品，通过选择性培养基、革兰氏染色及PCR鉴定产气荚膜梭菌，并利用PCR检测分离菌株毒力基因分布情况。采用K-B法测定分离菌株对16种常用抗生素的敏感性，通过结晶紫法测定分离菌株的生物被膜形成能力。结果显示，从198份粪便样品中共分离到53株产气荚膜梭菌，分离率为26.77%，其中A型占94.34%（50/53），D型占5.66%（3/53）。PCR检测结果显示，基因cpb2、pfoA、colA在产气荚膜梭菌分离株中的分布率为30.18%（16/53）、39.62%（21/53）、58.49%（31/53）。药敏试验结果显示，产气荚膜梭菌分离株对庆大霉素、卡那霉素、复方新诺明100%耐药性，猪源分离菌株对林可霉素、红霉素、头孢氨苄、恩诺沙星等12种抗生素的耐药率均高于禽源分离菌株。所有菌株对青霉素和阿莫西林均敏感。生物被膜形成能力测定结果显示，4株产气荚膜梭菌具有强生物被膜形成能力，5株具有中等生物被膜形成能力，16株具有弱生物被膜形成能力菌株，28株不形成生物被膜，其中禽源产气荚膜梭菌的生物被膜形成能力高于猪源菌株。研究表明产气荚膜梭菌流行广泛，耐药性严重为其流行及防控提供了参考。

关键词：产气荚膜梭菌生物学特性毒力因子耐药性生物被膜

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荷斯坦牛肺干细胞分离培养与生物学特性研究

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 540-551页

作者：刘晏辰周世莹张洋高扬关伟军中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 首都体育学院北京100191

本研究利用荷斯坦牛肺间质干细胞(LR-MSCs),通过体外试验观察LR-MSCs在不同条件下的成骨分化能力,以期为临床应用及组织工程提供新的种子细胞。本项目以荷斯坦牛(健康荷斯坦牛胎牛,0日龄,1只,雄性)为对象,通过无菌方法获得肺组织,通过... 详细信息

本研究利用荷斯坦牛肺间质干细胞(LR-MSCs),通过体外试验观察LR-MSCs在不同条件下的成骨分化能力,以期为临床应用及组织工程提供新的种子细胞。本项目以荷斯坦牛(健康荷斯坦牛胎牛,0日龄,1只,雄性)为对象,通过无菌方法获得肺组织,通过组织块贴壁方法获得LR-MSCs,并将其原代培养。通过绘制3代、9代、15代细胞的生长曲线,测定其增殖时间及成体能力。利用RT-PCR技术对干细胞表面标志物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166、CD34和CD45)的表达进行检测。对该基因进行染色体核型分析,并对其进行遗传转化,观察该基因的多向性。结果显示,这种方法能获得LR-MSCs,它们在体外培养时表现为长梭形和螺旋形,并呈现典型的“S”曲线。第9世代的倍增时间比15世代的短,但比3世代的长(P<0.01);第9代LR-MSCs的成株率较3代明显降低,而15代较高,差异有统计学意义(P<0.05)。应用RT-PCR技术检测到在LR-MSCs中特异表达的CD29、CD44、CD73、CD90。前期研究发现,LR-MSCs可特异性地表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166,而CD34、CD45则不表达。对LR-MSCs进行染色体组测序,发现其为正常二倍体(2n=60,XY)。通过对荷斯坦牛LR-MSCs的免疫荧光染色及RT-PCR分析,证明LR-MSCs具有向脂肪、骨、软骨等多种细胞定向分化的能力。这可能为今后的组织工程研究提供了一种新的种子细胞。

关键词：肺间充质干细胞组织原代培养诱导分化检测多向潜在能力研究

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针对非洲猪瘟病毒p30基因CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建和初步鉴定

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中国动物传染病学报 2023年第2期31卷 59-66页

作者：于海男崔帅王洋刘雪婷高新桃房立春郭晓宇朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院生物技术研究所北京100181 山东省农业科学院家禽研究所济南250031

构建针对非洲猪瘟病毒(ASFV)p30(CP204L)基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,探究该系统对p30蛋白真核表达的影响。以含p30基因序列的质粒p30-IRES为模板,定向扩增目的基因片段并克隆至pmCherry-N1载体,构建含有p30、红色荧光报告基因的融... 详细信息

构建针对非洲猪瘟病毒(ASFV)p30(CP204L)基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,探究该系统对p30蛋白真核表达的影响。以含p30基因序列的质粒p30-IRES为模板,定向扩增目的基因片段并克隆至pmCherry-N1载体,构建含有p30、红色荧光报告基因的融合表达质粒;通过网站http://***/设计靶向CP204L的单导向RNA(sgRNA),并克隆至Cas9表达质粒eSpCas9-2A-GFP(PX458)中。将融合表达质粒与Cas9表达质粒共转染HEK 293T细胞,同时设置对照组,转染48 h后通过Western blot和荧光定量PCR(qPCR)方法分别检测转染细胞中p30蛋白和mRNA表达水平。由于CRISPR/Cas9基因编辑系统靶向切割p30基因,Western blot和qPCR结果显示转染靶向p30基因的Cas9质粒后,p30蛋白的真核表达受到抑制,具有显著性差异(P<0.05)。结果表明,CRISPR/Cas9基因编辑系统可以高效切割非洲猪瘟p30基因,抑制该蛋白的真核表达水平,该体系为抑制病毒生长和疫情防控提供了新的研究思路。

关键词：非洲猪瘟病毒 p30基因 CRISPR/Cas9 单导向RNA 真核表达

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