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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王秀荣徐晓龙马勇包红梅施建忠曾显营李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言H5亚型禽流感的爆发不仅给家禽养殖业带来了巨大的损失,同时也造成了人的死亡。因此,迫切需要一种快速、敏感、特异的分子检测方法来应用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的诊断。荧光RT-PCR方法作为病毒快速诊断的有效工具,已经用于H5亚... 详细信息

引言H5亚型禽流感的爆发不仅给家禽养殖业带来了巨大的损失,同时也造成了人的死亡。因此,迫切需要一种快速、敏感、特异的分子检测方法来应用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的诊断。荧光RT-PCR方法作为病毒快速诊断的有效工具,已经用于H5亚型和AIV的检测。但是,由于疫苗免疫大面积应用形成的高免疫压力,H5亚型禽流感病毒不断发生遗传变异,针对H5亚型引物和探针需要随着新病

关键词：禽流感病毒 AIV 双重荧光 RT-PCR H5 HA

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A型流感病毒H7N9亚型和通用三重荧光RT-PCR诊断方法的建立

A型流感病毒H7N9亚型和通用三重荧光RT-PCR诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：徐晓龙包红梅马勇施建忠曾显营李雁冰陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言新型的H7N9亚型流感病毒在家禽上无任何症状显现,无法依靠临床症状进行初步鉴别,这使得监控变得更加困难。目前,在生物安全级别较高的实验室,H7N9亚型流感病毒采取病毒分离培养后,结合血凝和血凝抑制方法做出确诊。在全国各省市级... 详细信息

引言新型的H7N9亚型流感病毒在家禽上无任何症状显现,无法依靠临床症状进行初步鉴别,这使得监控变得更加困难。目前,在生物安全级别较高的实验室,H7N9亚型流感病毒采取病毒分离培养后,结合血凝和血凝抑制方法做出确诊。在全国各省市级实验室,由于不具备生物安全级别较高的实验条件,并且H7N9病毒可感染人类,导致临床发病甚至死亡,病毒分离培养将增加传播风险。因此,国家相

关键词：流感病毒 RT-PCR

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H10亚型禽流感病毒对不同宿主的致病性研究

H10亚型禽流感病毒对不同宿主的致病性研究

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王德丽慈彦鹏崔艳芳樊兆斌刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野... 详细信息

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野鸟体内分离到的多株H10亚型流感病毒株以及H10亚型参考毒株进行遗传演化分析,并对其生物学特性进行研究,为进一步探索H10亚型AIV在自然界

关键词：禽流感病毒 H10

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果子狸源H5N1亚型禽流感病毒的分离及生物学特性鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 181-184页

作者：吴珊珊王飞慈彦鹏刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全... 详细信息

2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全基因序列分析表明:该病毒属于Clade 2.3.2分支,其血凝素(HA)蛋白裂解位点存在多个连续的碱性氨基酸(-RRRR-),具有高致病性AIV(HPAIV)的典型分子特征,其HA、NA、PA、NS基因节段与A/muscovy duck/Vietnam/LBM57/2011(MD/VN/LBM57/11)(H5N1)有较高的同源性,为99.2%～99.6%;PB2、PB1、M、NP 4个基因节段与人源AIV A/Hubei/1/2010(HuB/1/10)(H5N1)的同源性最高,为99.0%～99.5%。动物试验显示:该病毒对小鼠的半数致死量为4.9 log EID50,对小鼠具有较高的致病性。在小鼠的肺和鼻甲骨中均能够进行良好的复制。以上结果表明,该分离株未经适应便具备感染哺乳动物并有较高致死的能力。

关键词：果子狸 H5N1亚型HPAIV 进化分析致病性

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H5N1亚型禽流感病毒A/Guangxi/1/2005株抗药机制的研究

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中国预防兽医学报 2012年第9期34卷 682-685页

作者：王飞吴珊珊慈彦鹏刘丽玲田国彬曾显营管雪婷李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-G... 详细信息

为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-GX05)。通过全基因测序并与S-GX05全基因序列进行对比,结果显示S-GX05只在其M2蛋白中有一个氨基酸位点发生突变,即A30P;抗药性鉴定这两株病毒的半数药物抑制浓度(IC50)分别为0.9μM和48.9μM,表明R-GX05对金刚烷胺表现出一定程度的抗性。动物实验证实,这两株病毒对BALB/c小鼠的致病性基本一致,均表现出高致病性,其MLD50分别为4.7 log10 EID50和5.0 log10 EID50,两株病毒在小鼠体内各组织脏器中的分布及增殖能力也基本相同。这些结果表明,S-GX05在药物压力下产生抗药性后,并未引起其它生物学特性的改变。A30P的发现为进一步从分子水平上研究H5N1亚型AIV的抗药机制及新型抗流感新药的研发奠定了基础。

关键词： H5N1禽流感病毒抗药性金刚烷胺

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H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2012年第7期 113-115页

作者：王寿山张超林刘春国石薇琳刘彦云王伟刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室/OIE禽流感参考实验室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,被国际兽医局（oie）列为A类传染病。H9N2亚型AIV为低致病性禽流感病毒,虽然毒力较H5N1亚型AIV弱,

关键词： H9N2亚型禽流感病毒序列分析 NA基因低致病性禽流感病毒 HA A型流感病毒 H5N1亚型 virus

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重组腺病毒载体禽流感疫苗的研究进展

重组腺病毒载体禽流感疫苗的研究进展

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第三届京津冀畜牧兽医科技创新研讨会暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛

作者：王寿山刘春国石薇琳张超林刘彦云王伟刘明天津瑞普生物技术股份有限公司 300308 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽用药物与兽医生物技术重点实验室农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室 OIE 禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

应用复制缺陷型腺病毒作为载体制备新一代禽流感疫苗可以克服在疫苗生产过程中，流感病毒大量增殖的弊端，且它非常安全，可以在无血清悬浮细胞中迅速产生，具有稳定性好、免疫途径简单、可高水平介导外源基因表达、表达宿主细胞范围广... 详细信息

应用复制缺陷型腺病毒作为载体制备新一代禽流感疫苗可以克服在疫苗生产过程中，流感病毒大量增殖的弊端，且它非常安全，可以在无血清悬浮细胞中迅速产生，具有稳定性好、免疫途径简单、可高水平介导外源基因表达、表达宿主细胞范围广泛、没有致癌和致突变的危险、可插入大片段的外源基因、既参与细胞免疫也参与体液免疫等优点。

关键词：禽流感疫苗缺陷型腺病毒基因重组表达载体

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H5N1亚型禽流感灭活疫苗种毒Re-6株的生物学特性及免疫原性研究

H5N1亚型禽流感灭活疫苗种毒Re-6株的生物学特性及免疫原性研究

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第三届(2012)中国黄羽肉鸡行业发展大会

作者：曾显营 ZENG Xianying TIAN Guobin 田国彬 FENG Huapeng 冯华朋 DENG Guohua 邓国华 SHI Jianzhong 施建忠 ZHANG Pantao 张盼涛 SU Wen 苏文 YANG Jing 杨婧 LIU Jingli 刘景利徐佳 XU Jia CHEN Hualan 陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室哈尔滨 150001 State Key Lab of Veterinary Biotechnology/Animal Influenza Laboratory of the Ministry of Agriculture Harbin Weike Biotechnologv Development Company Harbin 150001 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨 150001

本研究对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变灭活疫苗种毒Re—6株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re—6株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,且无病变,HA滴度达210;以0.1ml(106.0EID50/0.1ml)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡10天... 详细信息

本研究对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变灭活疫苗种毒Re—6株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re—6株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,且无病变,HA滴度达210;以0.1ml(106.0EID50/0.1ml)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡10天后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re—6重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡和SPF鸭后,3周时平均HI抗体效价达8.310g2和8.4 log2;免疫鸡和免疫鸭对亲本强毒株GD1322攻击提供完全保护.以上结果表明禽流感灭活疫苗种毒Re—6株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,且该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是理想的疫苗种毒株.

关键词：家禽亚型禽流感灭活疫苗生物学特性免疫原性

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山西亚群H5N1亚型HPAIV对鸭及鸭胚的继代感染研究

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中国预防兽医学报 2010年第5期32卷 365-369页

作者：张翼段振华刘丽玲施建忠田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2006年从山西省分离获得的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)曾引起免疫鸡群的大量死亡,与我国之前分离的病毒抗原差异性较大,称为"山西鸡型"抗原变异株。本研究应用该亚群代表毒株CK/SX/2/06(H5N1),研究该病毒对SPF鸭和鸭胚的致病性,... 详细信息

2006年从山西省分离获得的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)曾引起免疫鸡群的大量死亡,与我国之前分离的病毒抗原差异性较大,称为"山西鸡型"抗原变异株。本研究应用该亚群代表毒株CK/SX/2/06(H5N1),研究该病毒对SPF鸭和鸭胚的致病性,并通过病毒在鸭和鸭胚内的连续传代,探讨该亚群病毒在鸭和鸭胚中的进化规律。结果表明,病毒对3周龄鸭呈低致病性,在各脏器中的复制能力较弱;鸭感染病毒后无明显临床症状,排毒水平较低并且不能感染同居鸭。病毒在3周龄鸭和10日龄鸭胚中分别继代感染3代和5代后,对3周龄鸭仍呈低致病性且HA基因未发生氨基酸位点变化。病毒不能致死3周龄鸭和1日龄雏鸭,但能致死10日龄～23日龄鸭胚,而且对鸭胚的致病性随着鸭胚日龄的增长逐渐减弱,致死鸭胚时间从对10日龄鸭胚24h致死到对23日龄鸭胚72h致死直至对25日龄鸭胚只感染但不致死。病毒对鸭呈低致病性且在鸭群传播中保持着基因水平和致病性上的相对稳定,对不同日龄鸭胚、1日龄和3周龄鸭致病性的不同表现,与目前存在于我国的其他亚群H5N1HPAIV对鸭致病性和进化特点上呈现出明显的差异,并对家禽养殖业存在威胁。

关键词：禽流感病毒山西亚群鸭鸭胚继代感染

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A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)基因的原核表达和免疫原性分析

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中国兽医科学 2010年第4期40卷 357-362页

作者：张新涛刘明杜金玲刘春国李洪涛孙恩成石薇琳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室OIE禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力,利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM-T-1459,获得顺次串联的基因片段3M2e,将其克隆到原核表达载体pMAL-C2x中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化... 详细信息

为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力,利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM-T-1459,获得顺次串联的基因片段3M2e,将其克隆到原核表达载体pMAL-C2x中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,表达出一分子质量为60 ku的可溶性融合蛋白(MBP-3M2e),与预期值相符,该蛋白表达量约占菌体表达量的59.8%。间接免疫荧光和间接ELISA检测结果显示,用纯化后的融合蛋白免疫的SPF鸡血清可与流感病毒的M2蛋白发生反应,且其抗体效价较高,表明纯化后的重组融合蛋白具有良好的免疫原性。

关键词： A型禽流感病毒 M2e基因原核表达免疫原性

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