检索结果-内蒙古大学图书馆

应用Gelatin和3D培养验证细胞粘附对传染性支气管炎病毒在体外培养细胞中增殖的影响

中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1089-1094页

作者：王娜娜韩宗玺山丹邵昱昊刘胜旺李海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

除传染性支气管炎病毒(IBV) Beaudette株外,其它IBV均难以在体外细胞系中传代培养。为研究限制IBV体外传代培养的影响因素,本研究应用流式细胞术检测IBV经典株M41囊膜与宿主细胞膜融合程度,结果显示M41可以在体外培养条件下侵入鸡细胞系... 详细信息

除传染性支气管炎病毒(IBV) Beaudette株外,其它IBV均难以在体外细胞系中传代培养。为研究限制IBV体外传代培养的影响因素,本研究应用流式细胞术检测IBV经典株M41囊膜与宿主细胞膜融合程度,结果显示M41可以在体外培养条件下侵入鸡细胞系LMH和DF-1,但荧光定量PCR检测显示侵入的M41无法增殖。进一步通过对比分析M41易感组织气管、非易感组织脾脏及LMH细胞全基因组转录谱数据,结果显示宿主细胞粘附、细胞周期、p53及SRC可能是M41在体外培养细胞中增殖的宿主决定因素。本研究通过在2D培养体系中预先孵育Gelatin和3D培养两种方式来调节细胞粘附的物理环境,结果显示两种方法均可以促进M41在体外培养细胞中的增殖;利用多种经典的细胞周期抑制剂及p53和SRC活性调控分子预先处理LMH和DF1,显示细胞周期、p53活性及SRC活性对IBV体外增殖无显著影响。表明细胞粘附特性是影响IBV体外增殖的重要因素。本研究为IBV体外细胞培养体系的建立奠定了实验基础。

关键词：传染性支气管炎病毒全基因组转录谱分析病毒增殖 3D细胞培养

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H7N9流感病毒人源分离株与禽源分离株复制特性研究

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中国预防兽医学报 2018年第5期40卷 371-374页

作者：郭晶李媛媛裴兰英邓国华施建忠陈化兰李旭勇聊城大学农学院山东聊城252000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解H7N9流感病毒的生物学特性,本研究对H7N9流感病毒人源分离株(AH1)和禽源分离株(CK53)复制特性进行了系统比较研究。序列分析显示,AH1和CK53病毒在进化关系上同源性较高,仅有8个氨基酸位点差异。两株病毒分别接种禽类细胞DF1和CEF... 详细信息

为了解H7N9流感病毒的生物学特性,本研究对H7N9流感病毒人源分离株(AH1)和禽源分离株(CK53)复制特性进行了系统比较研究。序列分析显示,AH1和CK53病毒在进化关系上同源性较高,仅有8个氨基酸位点差异。两株病毒分别接种禽类细胞DF1和CEF,人类细胞A549和Calu-3,检测其复制能力,结果显示在33℃和37℃两种温度条件下,两种病毒在禽类细胞中复制能力相似,但在人类细胞中AH1复制能力强于CK53。CK53在哺乳动物细胞连续培养5代后出现包含PB2/E^(627)K在内共5个氨基酸位点的突变,显示禽源分离株在哺乳动物细胞复制过程中可以迅速获得适应性突变。突变病毒CK53-P5在A549细胞中复制水平明显强于CK53,其复制能力与AH1差异不明显。本研究进一步揭示了H7N9流感病毒人源分离株与禽源分离株的生物学特性差异,为深入了解其致病分子机制提供了实验依据。

关键词： H7N9 流感病毒复制细胞

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两株H6亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传进化分析

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中国预防兽医学报 2018年第4期40卷 275-278页

作者：李旭勇李玉保刘文强马树杰崔鹏飞孙香雪潘玉迪陈化兰郭晶聊城大学农学院山东聊城252000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究2016年在活禽交易市场鸭体内分离的2株H6亚型禽流感病毒(AIV)[分别是A/duck/Jiangxi/88/2016(H6N6)(简称DK/88/16)和A/duck/Jiangxi/219/2016(H6N2)(简称DK/219/16)]分子特征及遗传进化规律,本实验对其进行了全基因组扩增和测序,并进行了遗传进化分析。结果显示,2株病毒间HA基因同源性较低,仅为94.5%,但与我国近年分离的H6亚型病毒株保持较高同源性。DK/88/16和DK/219/16的NA基因分别与我国近年流行的流感病毒N6和N2基因保持较高同源性。对2株病毒的内部基因分析显示,其内部基因的来源较为复杂,其中DK/88/16的内部基因PA来源于我国最近流行的H5N2或H5N6病毒,显示该株病毒为新的重组病毒。对2株病毒的分子特征分析显示,除M1蛋白的30和215位点及NS1蛋白的42位点具有增强病毒对小鼠致病力的分子特征外,其余均保持低致病力分子特征。以上结果表明,H6N2和H6N6亚型AIV在我国鸭群中持续存在,并不断的遗传重组,需要进行持续的流行病学监测。

关键词：禽流感病毒 H6亚型基因遗传分析

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基于CRISPR/Cas9技术的高通量筛选平台:发掘病毒复制相关宿主分子的新途径

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微生物学报 2018年第11期58卷 1897-1907页

作者：王文静李素肖书奇仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

病毒作为严格的细胞内寄生生物,需要多种宿主蛋白辅助其完成生命周期。寻找与病毒复制相关的宿主因子并揭示其作用机制,将有助于阐明病毒的感染机制,为疫病的防治提供新靶标。与RNA干扰技术相比,近年来兴起的CRISPR/Cas9技术能更特异、... 详细信息

病毒作为严格的细胞内寄生生物,需要多种宿主蛋白辅助其完成生命周期。寻找与病毒复制相关的宿主因子并揭示其作用机制,将有助于阐明病毒的感染机制,为疫病的防治提供新靶标。与RNA干扰技术相比,近年来兴起的CRISPR/Cas9技术能更特异、高效、准确地实现基因组编辑,因而在功能基因研究中得到更广泛应用。而基于CRISPR/Cas9系统的宿主全基因组sgRNA文库高通量筛选技术平台,可快速发现参与病毒侵入、复制等生物学过程的关键宿主因子,通过明确病毒-宿主分子相互作用进而揭示病毒的生命周期,为分子病毒学和免疫学提供了强大的研究工具。本文主要总结了基于CRISPR/Cas9技术的高通量筛选平台的具体筛选流程,归纳和讨论了该平台在筛选调控病毒复制相关宿主因子中的应用现状和发展前景。

关键词： CRISPR/Cas9 高通量筛选 sgRNA文库病毒-宿主相互作用宿主因子

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不同致病性H7N9亚型流感病毒HA蛋白的比较分析

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中国家禽 2018年第7期40卷 14-17页

作者：张莹刘琳徐海峰曾显营施建忠王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为明确高致病性和低致病性H7N9亚型流感病毒血凝素(HA)蛋白的血清学特性是否有差异,通过体外表达两种H7N9亚型流感病毒HA蛋白并进行分析。利用RT-PCR方法扩增出高、低致病性H7N9亚型流感病毒HA基因,测序,并克隆于真核表达载体pCAGGS-Fla... 详细信息

为明确高致病性和低致病性H7N9亚型流感病毒血凝素(HA)蛋白的血清学特性是否有差异,通过体外表达两种H7N9亚型流感病毒HA蛋白并进行分析。利用RT-PCR方法扩增出高、低致病性H7N9亚型流感病毒HA基因,测序,并克隆于真核表达载体pCAGGS-Flag中,构建两个重组表达质粒,命名为pCAF-H7HPHA和pCAF-H7LPHA,分别转染293T细胞,用间接免疫荧光试验和Western blot试验观察HA蛋白的表达情况。结果显示:与低致病H7N9亚型流感病毒比较,高致病性H7N9亚型流感病毒HA基因裂解位点有连续的碱性氨基酸插入,糖基化位点和受体结合位点没有差异。不同致病性毒株的HA蛋白均能表达良好,表达蛋白分子量约为70 ku;高致病性H7N9亚型流感病毒HA蛋白(或血清)可以与低致病H7N9流感血清(或蛋白)发生反应。结果表明:不同致病性H7N9亚型流感病毒HA蛋白在血清学上没有差异性,为H7N9亚型流感病毒HA蛋白的研究奠定基础。

关键词： H7N9亚型流感 HA蛋白血清学

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高致病性PRRSV感染对仔猪骨髓细胞影响的初步鉴定

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中国预防兽医学报 2018年第4期40卷 321-324页

作者：郑琳琳赵识非刘永刚张冲涂亚斌王刚蔡雪辉东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染对仔猪骨髓细胞的影响,本研究体外培养仔猪骨髓细胞后感染HP-PRRSV,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测骨髓细胞生长情况,并通过流式细胞分析技术检测病毒感染骨髓内细胞的类... 详细信息

为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染对仔猪骨髓细胞的影响,本研究体外培养仔猪骨髓细胞后感染HP-PRRSV,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测骨髓细胞生长情况,并通过流式细胞分析技术检测病毒感染骨髓内细胞的类型。实验结果显示:HP-PRRSV HuN4感染骨髓细胞72h后病毒感染率达到峰值,骨髓细胞存活率显著下降;流式细胞分析结果显示,HP-PRRSV感染的骨髓细胞为髓系前体细胞(SWC3~LSWC8^-)与巨噬细胞(SWC3~HSWC8^-)。本实验结果表明:HP-PRRSV在骨髓内除能够感染巨噬细胞外,还能感染髓系前体细胞,引起仔猪骨髓损伤并影响机体的正常免疫反应。本研究为进一步探究HP-PRRSV感染机体免疫抑制机制奠定了前期基础。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒骨髓细胞 SWC3 SWC8

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兼顾H5亚型高致病性禽流感病毒不同分支HA蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2018年第7期40卷 639-642页

作者：徐海峰张莹刘琳曾显营谷琳琳熊晓宇王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立针对我国主要流行的H5亚型Clade7.2、Clade 2.3.2和Clade2.3.4.4分支高致病性禽流感病毒(HPAIV)不同流行株的免疫学快速检测方法,本研究将Clade7.2分支禽流感疫苗株CK/LN/S4092/2011(H5N1)(Re-7)、Clade2.3.4.4分支疫苗株DK/GZ/4/2013(H5N1)(Re-8)和Clade2.3.2.1e分支疫苗株DK/AH/S1246/14(H5N1)(Re-10)混合作为免疫原免疫4周龄BALB/c雌鼠,4次免疫后无菌取其脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)在聚乙二醇促融剂的作用下融合,通过间接ELISA方法及HI试验筛选获得6株能稳定分泌抗血凝素蛋白(HA)的单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞,分别命名为1B10、2A10、2C8、3E6、4G9和H2B1。经检测1B10、2A10、2C8和H2B1能够与当前AIV流行的分支反应,具有较好的广谱性。本研究为H5亚型AIV快速诊断技术的研发提供基础材料。

关键词： H5亚型禽流感病毒基因型分支单克隆抗体

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猪脑心肌炎病毒3AB蛋白与宿主蛋白RPL11相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2018年第5期40卷 375-380页

作者：薛娟张昆丽张元峰黄丽杨玉莹翁长江长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所基础免疫创新团队/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了研究与猪脑心肌炎病毒(EMCV)3AB相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库,获得6个与EMCV 3AB相互作用的宿主蛋白(RFC5、LRWD1、PIH1D1、RPL11、RPS20和LGALS1),经分析显示这些蛋白分别参与DNA... 详细信息

为了研究与猪脑心肌炎病毒(EMCV)3AB相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库,获得6个与EMCV 3AB相互作用的宿主蛋白(RFC5、LRWD1、PIH1D1、RPL11、RPS20和LGALS1),经分析显示这些蛋白分别参与DNA复制、有丝分裂和细胞凋亡等过程;酵母共转化试验与免疫共沉淀试验证实EMCV 3AB和RPL11两者之间存在特异性结合;激光共聚焦试验显示EMCV 3AB与RPL11共同过度表达时,二者共定位在细胞核中,而在EMCV感染状态下,3AB与RPL11主要共定位在细胞质中。另外,EMCV感染HeLa细胞能降低细胞中p53的蛋白水平,但3AB并不直接促进p53蛋白降解,表明EMCV 3AB对RPL11-MDM2-p53通路无影响。本研究发现并证实了RPL11与EMCV 3AB之间的相互作用,为进一步研究RPL11蛋白在EMCV复制中的作用奠定了基础。

关键词：猪脑心肌炎病毒 3AB蛋白 60S核糖体蛋白L11 病毒-宿主相互作用

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亲环蛋白A对动物病毒感染的调控及其分子机制

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畜牧兽医科技信息 2019年第7期35卷 4-6页

作者：吴甜甜王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传统的抗病毒策略多以病毒自身为靶点,随着天然免疫研究的不断深入,宿主的一系列抗病毒靶点相继被鉴定。亲环蛋白A(Cyclophilin A, CypA)是亲环蛋白(Cyclophilins, Cyps)家族中含量最丰富、被研究最多的一个成员。CypA不仅具有多种生理... 详细信息

传统的抗病毒策略多以病毒自身为靶点,随着天然免疫研究的不断深入,宿主的一系列抗病毒靶点相继被鉴定。亲环蛋白A(Cyclophilin A, CypA)是亲环蛋白(Cyclophilins, Cyps)家族中含量最丰富、被研究最多的一个成员。CypA不仅具有多种生理功能,也广泛参与到多种病毒的感染过程中,其作为抗病毒制剂的靶点近来也不断被关注。本文综述了CypA对不同动物病毒感染的调控作用及其分子机制,对于新型抗病毒策略的探索具有重要意义。

关键词：亲环蛋白A 动物病毒抗病毒

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稳定表达犬SLAM受体的Vero细胞系的建立与应用

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2018年第6期39卷 7-12页

作者：朱璐宇彭丽艳周雨霞王喜军步志高内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

信号淋巴细胞活化分子是(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)和麻疹病毒(Measles virus,MV)等麻疹病毒属病毒的主要细胞受体,在病毒入侵细胞的过程中具有重要作用。为了构建稳定表... 详细信息

信号淋巴细胞活化分子是(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM)犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)和麻疹病毒(Measles virus,MV)等麻疹病毒属病毒的主要细胞受体,在病毒入侵细胞的过程中具有重要作用。为了构建稳定表达犬SLAM(d SLAM)受体的Vero细胞系,本研究将d SLAM基因克隆至真核表达质粒p CAGG-TK-neo中,在d SLAM基因3’端引入Flag标签序列作为分子标记,并在其下游引入9 nt的Linker序列、猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV) 2A基因以及红色荧光蛋白m Cherry基因,构建了重组质粒p CAGG-dSLAMFlag-mCherry。用该重组质粒转染Vero细胞,经G418压力筛选、红色荧光蛋白表达及表达绿色荧光蛋白的重组CDV(r20/8-EGFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达d SLAM的细胞系。CDV野生型分离株JL17感染试验结果显示,JL17株在第15代次的Vero-dSLAM细胞上可良好生长,而在Vero细胞上不能形成细胞病变。结果表明,Vero-dSLAM细胞可稳定表达d SLAM,为CDV野生型毒株的分离和致病机制研究奠定了基础。

关键词：信号淋巴细胞活化分子 Vero细胞犬瘟热病毒病毒分离

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