检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 521-525页

作者：包媛玲宋守生于蒙蒙刘鹏任殿新孟令宅王素艳李欣翼张卓刘爱晶张艳萍刘长军祁小乐王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069 内蒙古赤峰市敖汉旗农牧局内蒙古敖汉旗024300 国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069

为研究B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品蛋鸡,将本团队前期研制的B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗通过肌肉注射方式免疫蛋鸡(0.5 mL/只),并于首免后3周以相同剂量加强免疫1次。免疫后1周~6周每周采... 详细信息

为研究B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品蛋鸡,将本团队前期研制的B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗通过肌肉注射方式免疫蛋鸡(0.5 mL/只),并于首免后3周以相同剂量加强免疫1次。免疫后1周~6周每周采血,分离血清,采用ELISA检测及中和试验分别检测相应抗体,结果显示,初次免疫后6周,免疫组血清平均ELISA抗体效价达到1:73 522,平均中和抗体效价达到7.6log2。加强免疫后3周通过滴鼻的方式攻毒(aMPV/B LN16强毒滴鼻200μL,5 000 TCID50/只),观察攻毒后1 d~8 d蛋鸡的临床症状。结果显示,攻毒对照组蛋鸡发病率为92.3%,免疫组蛋鸡不发病;攻毒后1 d~8 d采集各组蛋鸡的鼻腔拭子,通过RT-qPCR方法检测病毒拷贝数,结果显示,免疫组蛋鸡鼻腔拭子中的病毒拷贝数较攻毒对照组下降约73.7%~95.0%;攻毒后9 d,采集各组蛋鸡的鼻甲、气管、肺脏制备病理切片后进行病理组织学观察,结果显示,攻毒对照组蛋鸡鼻甲、气管、肺脏出现不同程度的病理损伤,免疫组蛋鸡各组织器官未见明显病理变化。本研究结果首次表明,B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡具有良好的免疫保护效果。本研究为商品蛋鸡的B亚型禽偏肺病毒病的防控和免疫程序的制定提供了参考。

关键词： B亚型禽偏肺病毒灭活疫苗商品蛋鸡免疫保护

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H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2021年第6期43卷 633-638页

作者：陈艳王飞飞杨焕良乔传玲陈化兰张秀英东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小... 详细信息

为制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用血凝抑制(HI)试验和ELISA方法筛选出1株稳定分泌抗SIV HA1蛋白MAb的杂交瘤细胞株(3F8),经ELISA检测结果显示其诱导小鼠产生的腹水效价为1:10^(6);HI试验检测结果显示其效价为12 log2。利用噬菌体随机7肽库对纯化的抗H3N2亚型SIV HA1蛋白的MAb 3F8进行了4轮筛选,经DNA测序得到3个7肽序列,分别是"HPRRRRV"(E1)、"WPFHHHR"(E2),"IERGRTS"(E3),3个7肽序列经比对显示与H3N2 SIV HA1蛋白有部分同源区,为HA蛋白的模拟表位,分别位于HA1蛋白序列的157、158位(E1)、196、199、200位(E2)、276、279、282位(E3),即位于流感病毒HA蛋白5个抗原位点中的B位点与C位点,且均位于HA1段上,与制备的抗HA1段蛋白的MAb鉴定结果一致。本研究制备了SIV H3N2亚型的HA蛋白MAb,并利用噬菌体短肽库技术获得该SIV HA模拟表位,为进一步设计具有广谱保护性的SIV表位疫苗提供了数据支持。

关键词： H3N2 猪流感病毒单克隆抗体噬菌体展示抗原表位

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稳定表达Venus基因的重组猪瘟病毒的构建

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黑龙江畜牧兽医 2020年第20期 67-71,80,158,159页

作者：孙慧敏仇华吉李素李永锋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

为了利用CRISPR/Cas9技术高通量筛选介导猪瘟病毒入侵的功能性受体,试验首先用融合PCR技术,将Venus基因融合至Npro蛋白的第13位与14位氨基酸之间,获得全长感染性克隆pCSFVVenus;之后将pCSFV-Venus转染至SK6细胞拯救重组猪瘟病毒(rCSFV-V... 详细信息

为了利用CRISPR/Cas9技术高通量筛选介导猪瘟病毒入侵的功能性受体,试验首先用融合PCR技术,将Venus基因融合至Npro蛋白的第13位与14位氨基酸之间,获得全长感染性克隆pCSFVVenus;之后将pCSFV-Venus转染至SK6细胞拯救重组猪瘟病毒(rCSFV-Venus),并将拯救的病毒感染猪肾细胞(PK-15细胞)进行连续传代观察其稳定性;最后将rCSFV-Venus和表达EGFP的重组病毒rCSFV-EGFP以相同剂量感染PK-15细胞,通过流式细胞仪分析荧光强度及感染效率。结果表明:rCSFV-Venus全长感染性克隆构建成功;转染后传至第4代可观察到绿色荧光,表明重组病毒拯救成功;将拯救的病毒连续传代10代,每代感染的PK-15细胞都可观察到绿色荧光,表明重组病毒具有良好的稳定性;流式细胞仪分析结果表明,rCSFV-Venus比rCSFV-EGFP荧光强度强且感染效率高。说明本研究成功拯救了稳定表达Venus基因的rCSFV-Venus,为筛选介导CSFV入侵的功能性受体提供了有力工具。

关键词：猪瘟病毒 Venus基因重组病毒稳定性荧光强度感染效率

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H3亚型犬流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 722-726页

作者：吴颖王福军王秀荣施建忠杨焕良邓国华陈艳陈化兰刘丽玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 黑龙江民族职业学院黑龙江哈尔滨150066

为建立H3亚型犬流感病毒(CIV)荧光定量PCR检测方法,本研究根据H3亚型CIV HA基因的保守区序列,设计合成一对特异性引物和Taq Man MGB探针,经条件优化后初步建立了H3亚型CIV荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,构建的重组质粒标准品在109拷... 详细信息

为建立H3亚型犬流感病毒(CIV)荧光定量PCR检测方法,本研究根据H3亚型CIV HA基因的保守区序列,设计合成一对特异性引物和Taq Man MGB探针,经条件优化后初步建立了H3亚型CIV荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,构建的重组质粒标准品在109拷贝/μL~10^(2)拷贝/μL浓度范围内有良好的线性关系,标准曲线的相关系数为0.999。该方法仅能特异性扩增H3N2亚型CIV核酸,与H3N2亚型禽流感病毒、人流感病毒和猪流感病毒及H9N2亚型CIV、H1N1亚型猪流感病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒等病毒核酸均无交叉反应。该方法最低可检测到的质粒标准品浓度为19拷贝/μL,敏感性高于普通PCR方法。组内与组间重复性试验的变异系数均小于1%。利用该方法对83份临床样品的核酸进行检测,检测结果与病毒分离结果总符合率为97.59%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为临床H3亚型CIV的快速检测提供可靠方法。

关键词： H3亚型犬流感病毒 TaqMan MGB探针荧光定量RT-PCR

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非洲猪瘟病毒pI215L蛋白单克隆抗体的制备及其反应性研究

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中国预防兽医学报 2021年第4期43卷 405-410页

作者：许文杰薛梦迪张元峰李长尧黄丽熊涛翁长江长江大学生命科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致病性的传染病,研究显示,抑制宿主干扰素(IFN)产生的能力与ASFV的致病力密切相关。本实验室前期的研究结果表明,ASFV pI215L蛋白能够显著抑制病毒诱导IFN的产生。为研究pI215L抑制Ι... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致病性的传染病,研究显示,抑制宿主干扰素(IFN)产生的能力与ASFV的致病力密切相关。本实验室前期的研究结果表明,ASFV pI215L蛋白能够显著抑制病毒诱导IFN的产生。为研究pI215L抑制Ι型干扰素(IFN-Ι)的机制提供物质基础,本研究构建了重组原核表达质粒pET-21a-pI215L,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后经SDS-PAGE鉴定,结果显示表达了可溶性的pI215L蛋白。进一步纯化pI215L蛋白后免疫小鼠,并经脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选,获得能够分泌pI215L蛋白单克隆抗体(MAb)的细胞株。Western blot结果显示,该MAb能够特异性识别25 ku处的外源转染过表达不同浓度的pI215L蛋白,并且能够识别感染MOI 1、MOI 10接毒剂量的ASFV编码的内源pI215L蛋白,以及感染ASFV 2 h后不同时间点表达的内源pI215L蛋白;真核表达质粒pET-21a-pI215L转染HEK293T细胞后,以及以MOI 1的ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后分别进行间接免疫荧光(IFA)检测,结果显示,使用兔源标签HA抗体以及Flag抗体为一抗染色的细胞可见绿色荧光,使用抗ASFV pI215L MAb为一抗染色的细胞可见红色荧光,表明本实验制备的MAb可用于IFA试验,识别内外源pI215L蛋白;免疫沉淀(IP)试验结果显示,纯化的MAb能够特异性结合HEK293T细胞中外源过表达的pI215L蛋白以及ASFV感染PAMs细胞中表达的内源pI215L蛋白。本研究为进一步探究pI215L的分子免疫机制以及ASFV疫苗的研制奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pI215L 单克隆抗体

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非洲猪瘟病毒p72蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2021年第9期43卷 946-951页

作者：庚辛孙明霞王淑杰汤艳东高金源蔡雪辉吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国兽医药品监察所北京100081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)的血清学检测方法,本研究根据ASFV Georgia2007/1株基因组合成其p72全长基因,并将其克隆至p GEX6p-1载体,构建重组质粒pGEX6p-1-p72并经酶切、PCR和测序鉴定正确后转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后经SDS-P... 详细信息

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)的血清学检测方法,本研究根据ASFV Georgia2007/1株基因组合成其p72全长基因,并将其克隆至p GEX6p-1载体,构建重组质粒pGEX6p-1-p72并经酶切、PCR和测序鉴定正确后转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示获得了可溶性表达且纯度较高的重组p72蛋白(rp72)。利用GST亲和纯化层析柱纯化,得到浓度为0.2 mg/mL的rp72。以rp72作为包被抗原,通过优化各反应条件建立检测猪血清中非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法,结果显示,rp72最佳包被浓度为1.25μg/mL,封闭时间为37℃1 h;待检血清稀释度为1.100,孵育时间为37℃30 min;羊抗猪IgG-HRP孵育时间为37℃1 h。利用该方法检测280份阴性血清,确定其临界值为0.412。采用建立的间接ELISA抗体方法对PEDV、PRRSV、CSFV、PRV、TGEV、PPV、PCV、***阳性猪血清进行检测,结果显示,除ASFV阳性对照为阳性外,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,该方法特异性强;将非洲猪瘟抗体阳性猪血清2倍倍比稀释(1.100~1.6400)后,利用该方法进行检测,结果显示其检测阳性血清的稀释度为1.3200倍时OD_(450nm)值仍大于临界值,敏感性高于市售西班牙ASFV阻断ELISA试剂盒检测结果,本研究建立的方法敏感性较高;对该方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批内和批间的变异系数均<10%,重复性良好。利用本研究建立的ASFV ELISA抗体检测方法(p72)对184份临床血清进行检测,结果显示该方法敏感性为100%,特异性为98.70%;与ASFV阻断ELISA抗体检测试剂盒方法总符合率为98.91%,kappa值为0.961。本研究首次基于rp72建立的非洲猪瘟抗体间接ELISA检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为ASFV抗体检测提供了一种快速、精准、经济、高效的方法。

关键词：非洲猪瘟病毒 p72蛋白 ELISA

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先天淋巴细胞及其在病原感染中作用机制的研究进展

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中国预防兽医学报 2021年第11期43卷 1234-1239页

作者：马文杰冯亚文陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069 河北省兽药监察所河北石家庄050050

动物在生命活动过程中会接触细菌、病毒以及寄生虫等病原微生物,绝大多数病原微生物可通过黏膜侵入感染机体。为了预防黏膜途径感染的发生,动物机体演化出一套防御系统—黏膜免疫系统。黏膜免疫系统是动物机体免疫网络中极其重要的组成... 详细信息

动物在生命活动过程中会接触细菌、病毒以及寄生虫等病原微生物,绝大多数病原微生物可通过黏膜侵入感染机体。为了预防黏膜途径感染的发生,动物机体演化出一套防御系统—黏膜免疫系统。黏膜免疫系统是动物机体免疫网络中极其重要的组成部分,是机体抵抗病原微生物感染的第一道防线。它除了包含屏障结构如紧密排列的上皮细胞外,还包含效应细胞如先天淋巴细胞(Innate lym-phoid cells,ILCs)、M细胞(Membranous cell)和单核细胞等免疫细胞。ILCs主要存在于黏膜中,参与共生微生物的调控、淋巴细胞的发育、受损组织的修复及上皮屏障的保护作用。近年来,越来越多的研究发现在病原感染过程中,ILCs参与协调黏膜免疫抵抗病原微生物的感染。本文着重对ILCs协助机体拮抗几种不同类型病原微生物感染的功能进行综述,为进一步研究ILCs在病原感染中的作用提供参考。

关键词：病原微生物病原感染黏膜免疫系统免疫细胞第一道防线淋巴细胞 M细胞效应细胞

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肠道菌群参与宿主免疫应答的作用及机制研究进展

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微生物学报 2020年第4期60卷 629-640页

作者：张贺王玉娥陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

肠道菌群作为动物体内重要的组成部分,能够直接参与机体的免疫调控作用,促进机体免疫系统发育,维持正常免疫功能。同时,免疫系统对肠道菌群又有调控和制约作用。本文主要综述了肠道菌群的组成以及影响肠道菌群变化的因素,系统阐述了肠... 详细信息

肠道菌群作为动物体内重要的组成部分,能够直接参与机体的免疫调控作用,促进机体免疫系统发育,维持正常免疫功能。同时,免疫系统对肠道菌群又有调控和制约作用。本文主要综述了肠道菌群的组成以及影响肠道菌群变化的因素,系统阐述了肠道菌群与疾病相互作用的机制,总结了肠道菌群在宿主感染与免疫应答中的作用,为开展肠道菌群参与机体免疫应答的机制方面的研究提供新的思路。

关键词：肠道菌群免疫应答机制

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非洲猪瘟病毒A137R蛋白多克隆抗体的制备与应用

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中国预防兽医学报 2021年第1期43卷 60-64页

作者：向志达张涛清张元峰黄丽杨玉莹翁长江长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高致病性病毒性传染病。为制备兔抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018分离株基因组DNA为模板扩增ASFV A137R基因,将其克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组表... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高致病性病毒性传染病。为制备兔抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018分离株基因组DNA为模板扩增ASFV A137R基因,将其克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组表达质粒pET-21a-A137R,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的A137R重组蛋白分子质量约15.0 ku,其主要以可溶形式表达。利用HisTrap亲和层析和凝胶过滤层析纯化获得高纯度的A137R重组蛋白,利用该纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,经Protein G亲和层析介质纯化后经western blot、间接免疫荧光和免疫共沉淀试验检测结果显示,制备的兔抗ASFV A137R蛋白的多克隆抗体能特异性地识别HEK293T细胞中瞬时表达的ASFV Flag-A137R蛋白和ASFV感染猪肺泡巨噬细胞中表达的ASFV A137R蛋白。本研究为进一步探究ASFV A137R蛋白的功能、其在ASFV感染及致病性中的作用和诊断技术研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 A137R蛋白多克隆抗体

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抗犬瘟热病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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动物医学进展 2020年第2期41卷 29-33页

作者：赵爽爽刘云李彤彤王文静薛雨佳刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为制备抗犬瘟热病毒(CDV)血凝素蛋白的单克隆抗体,以CDV弱毒株Onderstepoort免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合制备杂交瘤细胞。用昆虫杆状病毒表达系统表达的血凝素蛋白作为ELISA包被抗原,进行杂交瘤细胞筛选,获得3... 详细信息

为制备抗犬瘟热病毒(CDV)血凝素蛋白的单克隆抗体,以CDV弱毒株Onderstepoort免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合制备杂交瘤细胞。用昆虫杆状病毒表达系统表达的血凝素蛋白作为ELISA包被抗原,进行杂交瘤细胞筛选,获得3株阳性杂交瘤细胞株,分别命名3A8、3E4和1C7。经鉴定,抗体均为IgG1亚型,轻链为kappa链。杂交瘤细胞培养上清中抗体效价为1∶64~1∶256,腹水中抗体效价为1∶10~5~1∶10~7,病毒中和试验表明,3E4对CDV具有中和活性,腹水中抗体中和效价为1∶512。制备的单克隆抗体为CDV感染动物的治疗和基因工程抗体的开发奠定了基础。

关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体中和活性

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