检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 241-247,270页

作者：韩凌霞刘建华陈艳仇华吉王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋... 详细信息

将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋巴结注射40日龄仔猪2头,分别接种2、3次,接种剂量500μg/次,首次注射35d心脏放血致死。在体内感染性试验期间,动物未出现明显临床症状。试验结束,病理切片结果显示,不同淋巴组织中分别存在淋巴细胞缺失或增多的现象;肾小球、扁桃体、空肠淋巴结和股前淋巴结等冰冻组织切片中存在大量PCV2病毒抗原;血清中PCV2特异性的ELISA抗体效价达12∶560,IFA效价为11∶280;通过聚合酶链式反应(PCR)可以分别从体外感染PK15细胞和体内感染动物及同圈饲养的空白对照猪的淋巴组织中扩增到病毒特异性基因片段。本研究证明含有单拷贝PCV2的重组质粒pMDT-PCV在体内、外均具有感染性,能衍生出病毒,并产生符合自然感染PCV2的大体病变和组织病理学变化,并激发较强的体液免疫应答。

关键词：猪圆环病毒2 病毒分子克隆感染性抗体试验

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中国2000-2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析

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中国病毒学 2006年第6期21卷 575-580页

作者：张庆霞韩宗玺邵昱昊陈建飞荣骏弓刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化... 详细信息

对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化关系显示55株IBV毒株分属于9个群。第Ⅰ-Ⅲ群主要包括美国、日本、荷兰等国家以及中国的部分IBV分离株和疫苗株。其中本研究中的CK/CH/LHN/00I可能为一株分离的疫苗毒,CK/CH/LSD/03I、CK/CH/LDL/01I可能为重组毒。而中国近十年来分离的IBV毒株主要分布在第Ⅵ-Ⅷ群中,此3群内IBV毒株之间N蛋白推导氨基酸同源性为88.3%～100%,与其他各群之间同源性为62.3%～95.1%。因此,此基因型的IBV毒株可能在中国已有较长时期的存在且发生了较大程度的变异。其中第Ⅵ群中两株韩国分离株与中国IBV分离株具有较近的亲缘关系。以上结果表明,中国大多数IBV分离株在N基因进化关系上较为独立,与国外毒株相比,和韩国毒株进化关系密切。此外,中国IBV毒株基因重组现象更加普遍,尤其是疫苗毒和野毒之间的重组。

关键词：传染性支气管炎病毒核蛋白基因遗传变异

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抗鸡传染性法氏囊病病毒VP3单克隆抗体制备及抗原表位的初步分析

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畜牧兽医学报 2006年第12期37卷 1323-1327页

作者：程宇邓小芸高玉龙高宏雷林欢王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病实验室哈尔滨150001

用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4... 详细信息

用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDVVP3蛋白反应，细胞上清EuSA效价均在5．0×10^2以上，腹水EuSA效价为6．4×10^6以上；相加ELISA及肽扫描结果表明，4株中仅HRB-7C和HRB-10E2株单抗针对的抗原表位相近，并利用肽扫描的方法初步定位4株单克隆抗体的抗原表位。本研究对进一步分析IBDV的结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒单克隆抗体抗原表位

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鸡传染性贫血病毒VP2基因的表达及其免疫活性分析

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微生物学报 2006年第5期46卷 841-843页

作者：王晓艳王笑梅高玉龙高宏雷陆桂丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 新疆农业大学乌鲁木齐830052

利用特异性引物从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到VP2基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理的表达载体pET-28a中,构建了原核表达质粒pET-28-VP2。将pET-28-VP2转化至感受态***21(DE3)... 详细信息

利用特异性引物从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到VP2基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理的表达载体pET-28a中,构建了原核表达质粒pET-28-VP2。将pET-28-VP2转化至感受态***21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约31kDa的目的蛋白以可溶性形式表达于上清中。Western blot分析发现,表达产物与鸡传染性贫血的阳性血清发生特异性反应。纯化蛋白免疫小鼠后制得的多抗可以与全病毒发生反应,证明其具有免疫原性,为进一步研究VP2蛋白的功能及开展CIAV疫苗及诊断试剂的研制奠定了基础。

关键词：鸡传染性贫血病毒 VP2基因克隆表达

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犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析

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中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 485-488页

作者：周洁李昌文张洪英陈洪岩李建伟曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因... 详细信息

根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHT,用重组质粒pPROEXTMHT-N转化感受态***5a细胞,用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63Ku的重组N蛋白,占菌体总蛋白18%。经Westernblot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性,将表达产物用ProBondTM纯化试剂盒进行了纯化。用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应,经琼扩试验测定其效价为1∶16。本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原,建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础。

关键词：犬瘟热病毒核衣壳蛋白表达反应活性多克隆抗体

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鸡传染性腔上囊病病毒Gt株全基因组序列分析及真核表达载体的构建

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中国兽医科学 2006年第10期36卷 820-826页

作者：祁小乐高玉龙高宏雷邓小芸张宁王晓燕王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBD... 详细信息

采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV真核表达载体pCAGGmGtAHRT和pCAG-GmGtBHRT,为IBDV新型高效拯救平台的构建及基于此的病毒基因功能奠定了基础。

关键词：传染性腔上囊病病毒 Gt株分子标签核酶真核表达载体

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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达

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中国生物工程杂志 2006年第6期26卷 40-44页

作者：刘春国刘明张云杨涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 沈阳农业大学沈阳110161

将H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1。将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期... 详细信息

将H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1。将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1。rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Westernblot和ELISA分析表明:获得了分子量为26kDa的特异性NS1蛋白;并且该蛋白可与H5N1AIV攻毒鸭的血清发生特异性免疫反应,而不能与H5N1AIV灭活疫苗免疫鸭的血清发生反应。试验结果表明:NS1在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达,具有与天然蛋白相似的免疫活性,并可以作为区分免疫及自然感染个体的鉴别诊断抗原,为建立禽流感病毒自然感染家禽与禽流感灭活疫苗免疫家禽的鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词： AIV H5N1 NS1 杆状病毒表达鉴别抗原

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HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果比较

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农业生物技术学报 2006年第3期14卷 301-306页

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高邓国华于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

为评估HA基因密码子优化及不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,pCIHA5、pCAGGHA5、pCIoptiHA5和pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5和7无采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化,对4种疫苗单次免疫的免疫保护效果进行比较评估。结果表明,100μg剂量组中,pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死和不排毒),pCIoptHA5(75%)和pCIHA5(50%)仅可形成部分免疫保护;10μg剂量免疫组中,pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5可对免疫鸡形成100%的保护(不发病和不致死),pCIoptiHA5可形成对免疫鸡的部分免疫保护(75%),而pCIHA5则基本不能形成免疫保护。结果表明,HA基因密码子的优化以及鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果同时证明,通过密码子和载体的优化,可使H5亚型禽流感DNA疫苗有效免疫保护剂量降低至10μg,其推广应用已具备充分的经济可行性。pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的优化DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护

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断乳仔猪多系统衰竭综合征的病原学调查

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中国兽医杂志 2006年第9期42卷 21-22页

作者：李曦符芳李媛王靖飞崔尚金童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)于1991年首次在加拿大报道。该病临床主要呈现渐进性体重减轻、呼吸困难、有些出现黄疸、间质性肺炎、肝炎、肾炎、淋巴结损伤等症状。加拿大的Ellis博士自具有PMWS症状的猪体分离到1株小病毒,且鉴定为... 详细信息

断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)于1991年首次在加拿大报道。该病临床主要呈现渐进性体重减轻、呼吸困难、有些出现黄疸、间质性肺炎、肝炎、肾炎、淋巴结损伤等症状。加拿大的Ellis博士自具有PMWS症状的猪体分离到1株小病毒,且鉴定为圆环类病毒,实验证明,感染猪呈现的PMWS症状与圆环病毒间存在着密切的关系。该病毒被命名为Ⅱ型猪圆环病毒(PCV-2)。将PMWS在SPF仔猪中复制试验表明,可以检测到PCV-2的高滴度抗体,表明PMWS与PCV-2感染具有密切的关系。[第一段]

关键词：多系统衰竭综合征断乳仔猪病原学调查 Ⅱ型猪圆环病毒 PCV-2 PMWS 间质性肺炎类病毒

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中国高致病性禽流感免疫预防风险评估

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畜牧兽医学报 2006年第6期37卷 621-624页

作者：吴春艳王靖飞赵丽丹李静吉增涛杨彦涛王笑梅童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病诊断与流行病学中心哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

疫苗接种是当前我国预防和控制HPAI疫情的有效手段之一。由于影响HPAI免疫预防效果的因素众多,会给免疫预防带来风险。对这些风险因子进行识别,并系统分析其所引起的风险程度的高低,进而采取针对性的风险管理措施,能有效提高免疫预防的... 详细信息

疫苗接种是当前我国预防和控制HPAI疫情的有效手段之一。由于影响HPAI免疫预防效果的因素众多,会给免疫预防带来风险。对这些风险因子进行识别,并系统分析其所引起的风险程度的高低,进而采取针对性的风险管理措施,能有效提高免疫预防的效果。本研究首次运用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)构建了HPAI免疫预防风险评估模型,通过确定风险因子权重,依权重大小对风险因子进行排序,确定风险等级。分析结果表明:管理不良、接种操作不规范、实验室监测等是我国免疫预防的高风险因素。通过对免疫预防风险进行综合分析,为HPAI免疫预防管理和决策提供了科学依据。

关键词：高致病性禽流感免疫预防层次分析法风险评估

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