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鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡II型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达

畜牧兽医学报 2005年第8期36卷 800-806页

作者：孙永科田占成王云峰童光志智海东刘胜旺王玫杨增岐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100

将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化... 详细信息

将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化的能够同时表达鸡II型干扰素和鸡传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγS1。rFPV-ChIFNγS1接种28日龄的SPF鸡1周后,可以检测到针对传染性支气管炎病毒S1基因的ELISA抗体,重组病毒接种鸡的CD4+、CD8+和γδTCR阳性T淋巴细胞的百分比含量显著高于非免疫对照鸡(P<0.05);免疫4周后用传染性支气管炎LX4强毒株攻击,rFPV-ChIFNγS1免疫组仅有1只出现轻微的呼吸道症状(1/16),而非免疫对照组则有16只发病(16/16),并有2只出现死亡(2/16),表明rFPV-ChIFNγS1对接种鸡可以产生良好的保护效果。

关键词：传染性支气管炎病毒鸡Ⅱ型干扰素重组鸡痘病毒

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新城疫病毒F48E9感染CEF细胞特异性表达基因的筛选鉴定

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中国预防兽医学报 2005年第4期27卷 260-263页

作者：杨新艳刘培欣曹殿军闫丽辉孙建宏单文鲁中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学新疆乌鲁木齐830052

分别以NDVF48E9和LaSota株感染鸡胚成纤维细胞,于感染后8h提取NDV感染CEF细胞总RNA,通过mR NA差异显示技术筛选病毒感染诱导表达的特异性基因。主要方法是先以锚定引物经反转录后,然后以9～10bp随机引物为上游引物,以锚定引物Oligod(T)1... 详细信息

分别以NDVF48E9和LaSota株感染鸡胚成纤维细胞,于感染后8h提取NDV感染CEF细胞总RNA,通过mR NA差异显示技术筛选病毒感染诱导表达的特异性基因。主要方法是先以锚定引物经反转录后,然后以9～10bp随机引物为上游引物,以锚定引物Oligod(T)18为下游引物,进行PCR扩增,PCR产物采用8%的尿素变性PAGE胶电泳进行分离鉴定。对于特征性差异带进行第二次PCR扩增,克隆后测定其核苷酸序列。结果我们发现数个差异条带,选取差异带在500bp以内的条带,经测序后显示经NDVF48E9感染后,有一条差异条带特异性表达的基因所编码的蛋白与Receptor(TNFRSF)_interactingserine_threoninekinase2有47%同源,是一个新基因,其蛋白功能不明确,有可能和细胞的凋亡有关。

关键词： DDRT-PCR 新城疫病毒鸡胚成纤维细胞基因表达

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柯萨奇B组3型病毒中国分离株VP4、3D基因序列及系统发生树分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第10期25卷 823-827页

作者：刘明宇孟庆文吴东来孟繁超哈尔滨医科大学心血管疾病研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

目的研究柯萨奇B组3型病毒(CVB3)中国分离株结构蛋白VP4、非结构蛋白3D基因序列及变异性。方法在HeLa细胞中增殖病毒,用RT-PCR扩增目的基因片段,与pMD18-T载体连接,PCR初步鉴定后测序,进行序列同源性及系统发生分析。结果CVB3中国分离株... 详细信息

目的研究柯萨奇B组3型病毒(CVB3)中国分离株结构蛋白VP4、非结构蛋白3D基因序列及变异性。方法在HeLa细胞中增殖病毒,用RT-PCR扩增目的基因片段,与pMD18-T载体连接,PCR初步鉴定后测序,进行序列同源性及系统发生分析。结果CVB3中国分离株VP4基因含207个碱基,编码69个氨基酸,与Nancy株氨基酸同源性为97.10%;3D基因含1386个碱基,编码462个氨基酸,与Nancy株氨基酸同源性为97.62%。在系统发生中,CVB3中国株VP4基因、3D基因均与Nancy株聚簇。结论CVB3中国分离株VP4和3D基因长度与Nancy株一致,进化上属同一分支。

关键词：柯萨奇B组3型病毒中国分离株 VP4、3D基因序列系统发生树

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畜禽基因工程疫苗及诊断技术产业发展现状与前景

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农业生物技术学报 2005年第2期13卷 133-140页

作者：童光志涂长春军事医学科学院军事兽医研究所哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室长春130062

最近20年,畜禽基因工程疫苗及动物疫病诊断技术的开发随着基因工程技术的发展取得了显著的进展。伪狂犬病毒基因缺失疫苗及其相应的鉴别诊断技术,成功地应用于猪伪狂犬病根除计划,表明基因工程标记疫苗将具有广阔的应用前景。本文将针... 详细信息

最近20年,畜禽基因工程疫苗及动物疫病诊断技术的开发随着基因工程技术的发展取得了显著的进展。伪狂犬病毒基因缺失疫苗及其相应的鉴别诊断技术,成功地应用于猪伪狂犬病根除计划,表明基因工程标记疫苗将具有广阔的应用前景。本文将针对畜禽基因工程疫苗及诊断技术的研究开发和产业化现状及发展前景作一概述。

关键词：基因工程疫苗诊断技术

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传染性喉气管炎病毒王岗株gB基因gC基因和gD基因的真核表达

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中国兽医科技 2005年第7期35卷 520-524页

作者：王利丽王云峰智海东王玫步志高冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

将传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗(WG)株的gB、gC、gD基因分别克隆到真核表达载体pCAGGS的EcoRⅠ位点,经过酶切、测序分析,筛选鉴定出含有gB、gC、gD基因的重组质粒,分别命名为pCAGGgB、pCAGGgC、pCAGGgD。用质粒纯化试剂盒对重组质粒进... 详细信息

将传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗(WG)株的gB、gC、gD基因分别克隆到真核表达载体pCAGGS的EcoRⅠ位点,经过酶切、测序分析,筛选鉴定出含有gB、gC、gD基因的重组质粒,分别命名为pCAGGgB、pCAGGgC、pCAGGgD。用质粒纯化试剂盒对重组质粒进行了纯化,将纯化后的质粒转染293T细胞,用间接免疫荧光技术检测了目的蛋白的表达情况。检测结果表明,目的蛋白得到了真实的表达。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gB基因 gC基因 gD基因真核表达

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SARS冠状病毒非结构蛋白Nsp的原核表达

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中国病毒学 2005年第5期20卷 552-554页

作者：刘家森陈淑红刘怀然孟庆文庞海孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室清华大学医学院北京100084

The gene of nonstructural protein 9 of SARS-coronavirus(SARS-CoV) was amplified using PCR from the product derivated from reverse transcription of SARS-CoV genome RNA,and was inserted into the multiple cloning sites of the expression vector *** strain induced with IPTG expressed the specific soluble *** nsp9 protein was harvested and purified by affinity chromatography and processed by prescission *** serum against the nsp9 protein was raised in rabbit.

关键词： SARS冠状病毒复制酶表达

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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

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中国兽医科技 2005年第8期35卷 585-589页

作者：杨涛刘明张云刘春国杜绍范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE... 详细信息

采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示,重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明,融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法,为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 NS1基因原核表达酶联免疫吸附试验

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禽痘病毒感染对禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的影响

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中国预防兽医学报 2005年第2期27卷 154-156页

作者：乔传玲李呈军于康震田国彬刘宝全陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 全国畜牧兽医总站东北农业大学

表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FP... 详细信息

表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FPV_0 17人工感染SPF试验鸡 ,既而在感染后的不同间隔时间接种重组疫苗 ,免疫后检测鸡群的HI抗体水平 ,同时用 10 0LD50 的HPAIVH5N1进行攻击。结果重组疫苗免疫与禽痘病毒人工感染时间间隔在 4周 (或以上 )时 ,预先感染禽痘病毒对重组疫苗的免疫效力不构成影响 ,对禽流感的保护力为 10 0 % ,而间隔时间在 1、2、3周时 ,重组疫苗的免疫保护效力则受到不同程度的影响。

关键词：禽痘病毒禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力

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镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的研究

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畜牧兽医学报 2005年第4期36卷 362-364页

作者：李金龙熊永忠徐世文王秀荣李术东北农业大学动物医学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法,检测了10μmol/L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况,结果表明:10μmol/L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA,并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免... 详细信息

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法,检测了10μmol/L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况,结果表明:10μmol/L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA,并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。

关键词：脾脏淋巴细胞 DNA损伤镉鸡凝胶电泳法定量分析法时间效应免疫毒性 mol 单细胞片段化禽类

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杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析

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中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 549-552页

作者：王喜军胡森王清华邓国华王笑梅吴东来申之义步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后... 详细信息

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS)。SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190 Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性。以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性。结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础。

关键词： SARS冠状病毒纤突蛋白重组杆状病毒 ELISA IFA

来源：评论

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