检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2019年第8期49卷 977-982页

作者：王怡平张忠伟蒲路莎赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069 吉林省松原市宁江区畜牧业管理局吉林松原138001

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间... 详细信息

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗DEV MAb的杂交瘤细胞株2E3。鉴定结果显示,该MAb为Ig M亚类,ELISA效价可达到1∶10~5以上;间接免疫荧光试验(IFA)中MAb可与细胞中增殖的DEV结合,Western-blot试验中MAb不与变性病毒蛋白作用,表明该MAb可能是构象表位的单抗;病毒中和试验表明,该MAb具有较强的病毒中和活性。上述结果表明,本试验获得的一株具有DEV中和活性的MAb杂交瘤细胞株为建立DEV的检测方法和DEV的相关研究提供了材料支持。

关键词：鸭肠炎病毒单克隆抗体中和活性

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Gga-miR-7b和靶基因SNCA在两品系鸡脾脏中的表达分析

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江苏农业学报 2019年第4期35卷 874-879页

作者：肖春婷廉传江易诚陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040

为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体... 详细信息

为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体外验证gga-miR-7b与SNCA之间的靶向关系。qRT-PCR检测SNCA和gga-miR-7b在B21、B19感染Md5脾脏中的表达量。荧光素酶活性结果显示,gga-miR-7b与SNCA-wt-3′UTR共转染后显著抑制萤火虫荧光素酶活性(P<0.05),对SNCA-mut-3′UTR活性无显著影响。qRT-PCR结果显示,SNCA在B21、B19中,Md5感染5 d均显著上调表达(P<0.05),Md5感染25 d时SNCA在B21中极显著上调表达(P<0.01),在B19中极显著下调表达(P<0.01)。gga-miR-7b在Md5感染14 d,在B21中显著上调表达而在B19中显著下调表达(P<0.05),Md5感染25 d,gga-miR-7b在B21、B19中均极显著上调表达(P<0.01)。综上所述,SNCA是gga-miR-7b的靶基因。gga-miR-7b和SNCA可能与MD抗性/易感性以及MD肿瘤转化有关。

关键词： gga-miR-7b SNCA 靶向关系表达分析

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利用CRISPR/Cas9技术缺失MDV分离株meq基因的研究

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中国家禽 2019年第9期41卷 26-32页

作者：张峰于正浩兰兴鸽张艳萍王永强高立高玉龙李凯祁小乐崔红玉潘青王笑梅刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

鸡马立克氏病病毒(MDV)是一种能够引起鸡肿瘤的疱疹病毒,具有严格的细胞结合特性,对其基因组编辑较为困难。研究利用CRISPR/Cas9技术对中国MDV分离株基因组中的meq基因进行缺失。依据中国MDV分离株BS/15株的meq基因序列,设计了8条靶向me... 详细信息

鸡马立克氏病病毒(MDV)是一种能够引起鸡肿瘤的疱疹病毒,具有严格的细胞结合特性,对其基因组编辑较为困难。研究利用CRISPR/Cas9技术对中国MDV分离株基因组中的meq基因进行缺失。依据中国MDV分离株BS/15株的meq基因序列,设计了8条靶向meq基因的小向导RNA(sgRNA),分别克隆到pX330质粒中,构建表达靶向meq基因sgRNA的质粒pMeqsgRNA。通过pMeq-sgRNA转染、测序分析方法初步评价sgRNA切割效果,选择了两条适合的sgRNA。在鸡胚成纤维细胞(CEF)上同时转染上述筛选的2个pMeq-sgRNA质粒,接种MDV分离株BS/15株,通过PCR检测筛选meq基因缺失克隆株,成功克隆到一株meq基因缺失株。序列分析证明获得的MDV重组毒株确定meq基因序列已被敲除。体外试验证明该MDV重组毒株与亲本毒株在CEF上具有相似的复制能力。研究提供了一种简单、快捷的编辑MDV基因的方法,为MDV功能基因、分子进化和新型基因工程疫苗的研究提供了技术支持。

关键词： MDV CRISPR/Cas9 基因编辑 meq基因

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肠炎沙门菌mreB基因缺失株的构建及其体外生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 356-360页

作者：王曼宇王忠星曹俊许秋刘思国于申业吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

MreB蛋白广泛存在于原核生物中,主要生物功能是聚合形成类似于肌动蛋白微丝的纤维,参与细胞形状的维持。为研究肠炎沙门菌的mreB基因缺失对环境压力的应激变化,本研究利用Red重组方法构建肠炎沙门菌SM6株的mreB基因缺失株,同时构建其回... 详细信息

MreB蛋白广泛存在于原核生物中,主要生物功能是聚合形成类似于肌动蛋白微丝的纤维,参与细胞形状的维持。为研究肠炎沙门菌的mreB基因缺失对环境压力的应激变化,本研究利用Red重组方法构建肠炎沙门菌SM6株的mreB基因缺失株,同时构建其回补菌株,观察缺失株SM6ΔmreB的形态学变化,分析其对温度缺氧应力、渗透应力以及耐酸性的变化。结果显示,缺失株SM6ΔmreB的菌体变为球状,生长受到抑制;SM6ΔmreB对升温缺氧压力的耐受能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05);在渗透压条件为100mmol/L和200mmol/LNaCl时缺失株的生存能力明显弱于亲本株和回补株(p<0.05);缺失株在强酸环境中的生存能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05),而对中性和弱酸性环境的适应能力与亲本株相似。本研究为进一步探究MreB蛋白在沙门菌的致病机制以及菌蜕形成过程中的作用奠定了基础。

关键词： MreB蛋白沙门菌生物学特性环境压力

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实验用猪感染模型研究概况

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实验动物与比较医学 2019年第4期39卷 253-259页

作者：王玉娥张贺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

传统的生物医学模型动物在实验设施中易于管理,可快速高效地应用于人类疾病相关基因的基础研究,但在某些情况下,它们无法代表人类生理的复杂性。猪在解剖学和生理学上与人类相似度很高,在人类疾病的相关研究中的应用广泛。本综述回顾了... 详细信息

传统的生物医学模型动物在实验设施中易于管理,可快速高效地应用于人类疾病相关基因的基础研究,但在某些情况下,它们无法代表人类生理的复杂性。猪在解剖学和生理学上与人类相似度很高,在人类疾病的相关研究中的应用广泛。本综述回顾了猪作为人类传染性疾病及自身传染病模型的应用概况,并概述了疫病感染模型的表征及特性。

关键词：实验动物猪感染模型

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我国传染性法氏囊病病毒新型变异株分析研究

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1164-1169页

作者：范林进王雨龙吴甜甜李凯姜楠高玉龙高立刘长军崔红玉潘青张艳萍刘玉凤孙先本刘俊启王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 法国诗华动物保健公司北京100102 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7... 详细信息

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7个省的32个IBDV代表株的VP2基因高变区进行了遗传演化分析,结果显示,IBDV新型变异株虽然属于变异株分支,但却不同于美国早期变异株,其形成了一个独立的亚群。动物回归试验结果显示,IBDV新型变异株不致死鸡,但造成其中枢免疫器官法氏囊严重萎缩,B淋巴细胞崩解坏死,复制出了非典型IBD的症状。本研究测定了IBDV新型变异株的最低致病剂量,并依据病毒自身特殊性状,首次提出用法氏囊半数萎缩量(BAD50)作为IBDV新型变异株的病毒效价单位。本研究为IBDV新型变异株的流行规律监测和综合防控提供了数据支撑。

关键词：非典型传染性法氏囊病传染性法氏囊病病毒新型变异株法氏囊半数萎缩量

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CRISPR/Cpf1介导DDX21基因敲除载体活性检测

CRISPR/Cpf1介导DDX21基因敲除载体活性检测

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：鲁国涛张子博田璐李昂陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

目的：旨在建立一种简单、快捷、高效、稳定的家鸡基因组编辑系统,为研究基因功能及模型建立奠定基础.方法：根据鸡DDX21基因序列设计选择4个gRNA,构建Cpf1/gRNA敲除表达载体并转染状态良好的DF-1细胞,经流式细胞仪收集表达红色荧光蛋... 详细信息

目的：旨在建立一种简单、快捷、高效、稳定的家鸡基因组编辑系统,为研究基因功能及模型建立奠定基础.方法：根据鸡DDX21基因序列设计选择4个gRNA,构建Cpf1/gRNA敲除表达载体并转染状态良好的DF-1细胞,经流式细胞仪收集表达红色荧光蛋白的阳性细胞,T7E1酶切法选择高效的敲除载体,TA克隆测序法评估其介导DDX21基因敲除的效率.结果：结果表明4个gRNA序列正确插入表达载体中;T7E1酶切结果显示Cpf1/gRNA1基因靶向敲除活性最高,TA测序分析发现其敲除活性为33.3％.结论：本研究初步建立了CRISPR/Cpf1系统介导的基因编辑技术,结果表明CRISPR/Cpf1能够稳定介导鸡DF-1细胞上的基因组编辑,这为进一步揭示DDX21基因功能、建立DDX21基因敲除的细胞系和鸡体模型提供了理论基础和科学依据.

关键词： CRISPR/Cpf1 基因敲除 DF-1细胞 DDX21

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适配体对霉菌毒素致小鼠肠道菌群失调的缓解作用

适配体对霉菌毒素致小鼠肠道菌群失调的缓解作用

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：张圆圆王玉娥张贺赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069

目的：探索已筛选获得的适配体对玉米赤霉烯酮(ZEN)引起的小鼠肠道菌群失调的缓解作用.方法：采用体重19.43±1.8gSPF雌性BABL/c小鼠12只,随机分为三组,于腹腔左侧注射ZEN甲醇溶剂对照组(甲醇浓度0.5 μL/mL)、ZEN组(5 mg/mL)、ZEN... 详细信息

目的：探索已筛选获得的适配体对玉米赤霉烯酮(ZEN)引起的小鼠肠道菌群失调的缓解作用.方法：采用体重19.43±1.8gSPF雌性BABL/c小鼠12只,随机分为三组,于腹腔左侧注射ZEN甲醇溶剂对照组(甲醇浓度0.5 μL/mL)、ZEN组(5 mg/mL)、ZEN组(5 mg/mL)各100μL24h后,对应以上分组腹腔右侧分别注射生理盐水、生理盐水、获得适配体Z100处理组(1 μmol/L)各100μL,每组3只,24 h后采集新鲜粪便,利用Illumina HiSeq 2500高通量测序方法,对样品16S rDNA基因的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了 α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析;另采集新鲜粪便,测定粪便中ZEN的含量.

关键词：适配体玉米赤霉烯酮 SPF小鼠粪便菌群

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实验用SPF大白猪和长白猪的标准化研究与应用前景

实验用SPF大白猪和长白猪的标准化研究与应用前景

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：高彩霞辛畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室150069哈尔滨

标准化SPF猪群是生命科学研究的重要支撑条件之一，在畜牧兽医生产实践中也发挥着重要作用。大白猪和长白猪是最普遍的主导瘦肉型商业品系，在实验动物方面的研究鲜有报道。本文介绍了 SPF大白猪和长白猪基础群的引进，探讨了猪群的标... 详细信息

标准化SPF猪群是生命科学研究的重要支撑条件之一，在畜牧兽医生产实践中也发挥着重要作用。大白猪和长白猪是最普遍的主导瘦肉型商业品系，在实验动物方面的研究鲜有报道。本文介绍了 SPF大白猪和长白猪基础群的引进，探讨了猪群的标准化研究和应用前景，其研究不仅丰富了我国实验动物资源，也为畜禽疫病防控技术研发提供核心支持。

关键词： SPF 大白猪长白猪标准化应用前景

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RIG-Ⅰ介导PCV2感染小鼠诱导天然免疫应答的研究

RIG-Ⅰ介导PCV2感染小鼠诱导天然免疫应答的研究

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：孟庆文许曼黄立平邵玉乐曾为俊王辉鲁国涛刘长明陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室150069哈尔滨

猪圆环病毒2型(PCV2)为环状单链DNA病毒，是引起PMWS的主要病原，导致严重的免疫抑制，给猪业生产造成重大的经济损失.RIG-Ⅰ是细胞质RNA传感器，除识别病毒RNA外，还能检测DNA病毒的入侵.为探究RIG-Ⅰ在PCV2感染诱导的RIG-Ⅰ信号通路... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)为环状单链DNA病毒，是引起PMWS的主要病原，导致严重的免疫抑制，给猪业生产造成重大的经济损失.RIG-Ⅰ是细胞质RNA传感器，除识别病毒RNA外，还能检测DNA病毒的入侵.为探究RIG-Ⅰ在PCV2感染诱导的RIG-Ⅰ信号通路、Ⅰ型干扰素及炎性细胞因子中的作用，本研究分别将30只8周龄野生型(WT)ICR雌鼠与30只RIG-Ⅰ-/-小鼠各随机分成两组(感染组和对照组)，腹腔接种PCV2a/LG株，在接种后第3、7、14、21和28 d分别测量小鼠体重，采集小鼠肺、脾组织.

关键词： RIG-Ⅰ PCV2 基因敲除小鼠天然免疫

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