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动物医学进展 2013年第5期34卷 131-133页

作者：黄建龙范仲鑫邓国华王辉王昌建何世成汪洪冰邱立新鲁杏华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410007 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市畜禽产品质量检测中心湖南长沙410013

为了解批发市场活禽禽流感病毒H5抗体水平,对长沙市2家批发市场活禽禽流感病毒H5抗体进行了监测。结果显示,2008年-2011年从长沙市活禽批发市场所采集的禽血清禽流感病毒H5抗体水平比较低,鸭血清抗体合格率为50.4%,鸡血清抗体合格率为58... 详细信息

为了解批发市场活禽禽流感病毒H5抗体水平,对长沙市2家批发市场活禽禽流感病毒H5抗体进行了监测。结果显示,2008年-2011年从长沙市活禽批发市场所采集的禽血清禽流感病毒H5抗体水平比较低,鸭血清抗体合格率为50.4%,鸡血清抗体合格率为58.1%。12月～3月份家禽血清禽流感病毒H5抗体平均水平比较低,这与禽流感易发于冬春季节这一流行病学特征一致,表明家禽的抗体水平与发病有一定的相关性。

关键词：活禽市场禽流感病毒 H5抗体

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我国2009-2013年H3亚型禽流感病毒表面基因分子特征

我国2009-2013年H3亚型禽流感病毒表面基因分子特征

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛

作者：关立峥邓国华李文辉谭丹崔鹏飞张曦朱占松王晶张芳陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

不同亚型间的禽流感病毒的多基因重组增加了我国南方家鸭中循环存在着的流感病毒的遗传多样性,有研究表明,H3 亚型禽流感病毒是家鸭中普遍存在着的流感亚型,而家鸭作为天然基因库与家禽之间的重要桥梁,其存在促进了流感病毒的传播与新... 详细信息

不同亚型间的禽流感病毒的多基因重组增加了我国南方家鸭中循环存在着的流感病毒的遗传多样性,有研究表明,H3 亚型禽流感病毒是家鸭中普遍存在着的流感亚型,而家鸭作为天然基因库与家禽之间的重要桥梁,其存在促进了流感病毒的传播与新型流感病毒的产生。

关键词：禽流感家鸭生物学特性

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蓝舌病病毒8型VP2蛋白的真核表达与抗原性检测

蓝舌病病毒8型VP2蛋白的真核表达与抗原性检测

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：席娜王文世冯瑜菲李俊平吴东来孙恩成孙亮魏天杨涛徐青元刘二战孙晶魏鹏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

目的:利用真核表达系统对BTV8型VP2蛋白进行表达并对其抗原性进行检测。方法:从BTV8感染的BHK-21细胞提取病毒RNA,依据Genback中已登录的BTV8的L2基因序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增BTV8 VP2全长基因,将VP2基因和pFastBacHTA供体... 详细信息

目的:利用真核表达系统对BTV8型VP2蛋白进行表达并对其抗原性进行检测。方法:从BTV8感染的BHK-21细胞提取病毒RNA,依据Genback中已登录的BTV8的L2基因序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增BTV8 VP2全长基因,将VP2基因和pFastBacHTA供体质粒分别经BamHI和HindⅢ酶切后连接转化将其克隆到pFast-BacHTA供体质粒中构建重组pFast-VP2质粒,双酶切和测序鉴定后将pFast-VP2转化DH10Bac感受态细胞制备提取重组杆粒BAC-VP2,经PCR鉴定后在脂质体Cellfectin Reagent作用下将重组杆粒BAC-VP2转染Sf21细胞,转染后的Sf21细胞经蛋白质印迹检测VP2蛋白及其生物活性。结果:经双酶切以及测序鉴定成功构建了真核表达载体pFast-VP2,利用杆状病毒表达系统成功表达出BTV8重组蛋白VP2.通过包涵体纯化方法对其进行了纯化,Western blot结果显示该蛋白可以与抗BTV8绵羊阳性血清产生反应,显示出良好的抗原性。结论:昆虫杆状病毒表达载体具有高效性和灵活性,能高效地表达大片段基因也能同时表达多个基因,而且表达的重组蛋白经糖基化、磷酸化、二硫键的形成等翻译加工后在结构和功能上更接近天然蛋白,使得重组蛋白具有较好的生物活性。本研究构建的BTV8 VP2蛋白的真核表达载体,为后期建立稳定表达VP2蛋白的细胞模型和VP2蛋白功能研究奠定了基础。

关键词：动物医学蓝舌病病毒重组蛋白真核表达抗原性检测

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蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定

蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定

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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：魏天徐青元耿宏伟冯瑜菲杨涛孙恩成席娜钱爱东吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000

VP7蛋白作为蓝舌病病毒群特异性抗原，在BTV各个血清型中高度保守，而针对VP7蛋白的血清学检测方法也是当前检测BT的主要方法之一。本研究通过鉴定BTV VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，初步阐明了BTV VP7蛋白竞争抑制特异性的分... 详细信息

VP7蛋白作为蓝舌病病毒群特异性抗原，在BTV各个血清型中高度保守，而针对VP7蛋白的血清学检测方法也是当前检测BT的主要方法之一。本研究通过鉴定BTV VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，初步阐明了BTV VP7蛋白竞争抑制特异性的分子基础，这一结果对BT血清学检测方法的建立和改进具有重要的参考价值。

关键词：动物医学蓝舌病病毒蛋白表达群特异性抗原表位

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重组SEA增强H5亚型禽流感灭活疫苗对肉鸡的免疫效果研究

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 393-396页

作者：苏文曾显营田国彬杨婧张盼涛王彦妮陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为评价重组葡萄球菌肠毒素A(rSEA)对H5亚型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫效果的影响,本研究以原核表达的rSEA为免疫增强剂,制备成含有rSEA高(167μg/0.5 mL)、低(16.7μg/0.5 mL)两种剂量的AIV油乳剂灭活苗,分别免疫7 d龄肉鸡,通过检测... 详细信息

为评价重组葡萄球菌肠毒素A(rSEA)对H5亚型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫效果的影响,本研究以原核表达的rSEA为免疫增强剂,制备成含有rSEA高(167μg/0.5 mL)、低(16.7μg/0.5 mL)两种剂量的AIV油乳剂灭活苗,分别免疫7 d龄肉鸡,通过检测免疫鸡AIV HI抗体滴度及外周血CD4+/CD8+值评价其免疫效果。HI抗体检测结果显示,免疫后2周高剂量组HI抗体平均滴度为5.6 log2,低剂量组为4.2 log2,而无rSEA疫苗对照组为2.9 log2(p<0.01);同时在免疫后前4周,rSEA免疫组的HI抗体平均滴度及峰值与对照组相比均差异显著(p<0.05)。T淋巴细胞亚群检测结果显示,肉鸡免疫高剂量rSEA的灭活苗后,其外周血CD4+百分含量及CD4+/CD8+值均显著高于对照组(p<0.05)。上述结果表明,rSEA作为AIV灭活苗免疫增强剂,能够快速诱导较高的HI抗体滴度,同时也可增强细胞免疫反应,有效缩短免疫空白期,使肉鸡短时间内产生较强的免疫应答反应。

关键词：禽流感灭活疫苗 rSEA 免疫增强剂肉鸡

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禽流感病毒H5亚型HA基因在杆状病毒系统中的表达及生物学活性鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 523-526页

作者：赵双成常晓飞田石柳金雄陈普成田国彬邓国华姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究禽流感病毒(AIV)HA蛋白抗原活性,本研究将A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)的HA基因片段克隆于pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTA-HA,转化至DH10Bac感受态细胞,构建重组杆粒,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。... 详细信息

为研究禽流感病毒(AIV)HA蛋白抗原活性,本研究将A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)的HA基因片段克隆于pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTA-HA,转化至DH10Bac感受态细胞,构建重组杆粒,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。采用间接免疫荧光、western blot和血凝试验对所表达的蛋白进行抗原性和生物学活性分析。结果表明,表达重组蛋白分子量约为64 ku;IFA和western blot试验证明重组HA蛋白能够与H5亚型禽流感阳性血清特异结合,具有良好的抗原性;血凝试验和淋巴细胞增殖试验显示重组蛋白具有良好生物学活性。重组蛋白的正确表达为进一步研究HA基因功能活性和制备禽流感HA基因亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：禽流感 HA基因杆状病毒

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两株H5N1亚型禽流感病毒的基因分析及其在不同宿主中致病性的比较

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 350-354页

作者：冯肖肖施建忠邓国华姜永萍王秀荣田国彬曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解两株高致病性禽流感病毒(HPAIV)的分子特征及其对不同宿主的致病性,本研究对DK/HuN/4/08和CK/GX/2/09进行全基因组序列的测定,分析结果表明:两个病毒分离株HA基因的裂解位点均具有HPAIV特有的基序(341RRR(R)KR345/346),并且均属于... 详细信息

为了解两株高致病性禽流感病毒(HPAIV)的分子特征及其对不同宿主的致病性,本研究对DK/HuN/4/08和CK/GX/2/09进行全基因组序列的测定,分析结果表明:两个病毒分离株HA基因的裂解位点均具有HPAIV特有的基序(341RRR(R)KR345/346),并且均属于Clade2.3.2分支,基因组同源性在97.4%～98.3%之间。致病性试验显示,两个病毒分离株均能够以106EID50感染量在3 d内引起鸡全部死亡,并且各脏器均检测到高滴度的病毒含量;两者在SPF鸭中呈现不同的致病性,CK/GX/2/09在4 d内可以使感染鸭100%死亡,而DK/HuN/4/08只引起25%的死亡率;同样在小鼠试验中,两者致病力差异与在鸭体中的反应一致,其MLD50分别为1.63 log10EID50和6.2 log10EID50。本研究表明,这两株遗传背景相似的HPAIV在鸡、鸭和小鼠中的致病性不同,为进一步利用反向遗传技术研究这两株病毒对水禽和哺乳动物致病力差异的分子机制奠定了基础。

关键词：高致病性禽流感 H5N1亚型遗传进化致病性

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CHD9:一个新的与流感病毒PA蛋白相互作用的宿主因子

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 409-411页

作者：朱鹏阳冯华朋宋家升李雁冰施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

PA蛋白是禽流感病毒(AIV)聚合酶的组成部分,对AIV的复制具有重要作用。为鉴定家鸭体内与AIV PA蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究利用酵母双杂交系统,以表达A/goose/Hubei/65/05(H5N1)AIV PA蛋白的重组质粒为诱饵,筛选家鸭脑组织cDNA文库,... 详细信息

PA蛋白是禽流感病毒(AIV)聚合酶的组成部分,对AIV的复制具有重要作用。为鉴定家鸭体内与AIV PA蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究利用酵母双杂交系统,以表达A/goose/Hubei/65/05(H5N1)AIV PA蛋白的重组质粒为诱饵,筛选家鸭脑组织cDNA文库,鉴定得到一个cDNA片段,经测序分析表明,该cDNA片段编码蛋白为色素域解旋酶DNA结合蛋白9(CHD9)。将重组诱饵质粒pDEST32-PA与捕获的鸭cDNA重组质粒共转化MaV203受体菌,进行X-gal显色反应检测,分析结果显示,菌落可以迅速变蓝,并且菌落在SC-Leu-Trp-His+3AT 3种营养缺陷培养基平板上生长良好。证明CHD9与PA蛋白在酵母双杂交系统中具有较强的相互作用。CHD9的初步鉴定为研究AIV在机体中的复制过程奠定了基础。

关键词：色素域解旋酶DNA结合蛋白9 PA蛋白宿主蛋白

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两株H4N3禽流感病毒全基因组序列分析及对小鼠的致病性研究

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中国预防兽医学报 2012年第4期34卷 266-269页

作者：张文亮张曦朱占松谭丹崔鹏飞施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2009年在我国南方活禽交易市场进行流行病学调查时,从鸭体内分离到2株H4N3亚型禽流感病毒(AIV),DK/FJ/S1419/09(H4N3)(FJ/419/2009)和DK/HUN/S1010/09(H4N3)(HuN/010/2009)。为了解这2株H4N3亚型AIV的生物学特性,本研究对其进行全基因组分析及对小鼠致病性研究。结果显示:其HA基因来源于近两年流行的H4亚型病毒株,NA基因来源于其它亚型病毒株。内部基因来源较复杂,与FJ/419/2009内部基因同源性最高的病毒株均来自国内H5、H6等亚型分离株,但与HuN/010/2009同源的内部基因则差异较大,与PA、M和NS同源性最高的病毒株分别为A/wild/duck/Korea/UP122/2007(H1N1),A/muscovy/duck/Thailand/CU-LM1983/2009(H4N6)and A/avian/Japan 8KI0068/2008(H3N6)。用106EID50病毒剂量感染6周龄BALB/c小鼠,结果显示试验组小鼠感染后第3 d采脏器样品,仅在鼻甲和肺部能检测到病毒存在。以上数据表明,尽管这2株H4N3特殊亚型组合病毒来源复杂,但对小鼠的致病性较低。

关键词：禽流感病毒 H4亚型基因组分析致病性

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H5N1亚型禽流感病毒A/Guangxi/1/2005株抗药机制的研究

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中国预防兽医学报 2012年第9期34卷 682-685页

作者：王飞吴珊珊慈彦鹏刘丽玲田国彬曾显营管雪婷李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-G... 详细信息

为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-GX05)。通过全基因测序并与S-GX05全基因序列进行对比,结果显示S-GX05只在其M2蛋白中有一个氨基酸位点发生突变,即A30P;抗药性鉴定这两株病毒的半数药物抑制浓度(IC50)分别为0.9μM和48.9μM,表明R-GX05对金刚烷胺表现出一定程度的抗性。动物实验证实,这两株病毒对BALB/c小鼠的致病性基本一致,均表现出高致病性,其MLD50分别为4.7 log10 EID50和5.0 log10 EID50,两株病毒在小鼠体内各组织脏器中的分布及增殖能力也基本相同。这些结果表明,S-GX05在药物压力下产生抗药性后,并未引起其它生物学特性的改变。A30P的发现为进一步从分子水平上研究H5N1亚型AIV的抗药机制及新型抗流感新药的研发奠定了基础。

关键词： H5N1禽流感病毒抗药性金刚烷胺

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