检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 672-675页

作者：慈彦鹏王德丽樊兆斌刘丽玲贾莹李鑫磊田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2013年12月在河北省保定市某鸡场分离到一株H5N2亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/3/2013(H5N2)。本研究对其全基因组序列进行测序,并对鸡进行静脉接种指数(IVPI)测定,同时对BALB/c小鼠进行致病性试验。病毒的各基因节段序列... 详细信息

2013年12月在河北省保定市某鸡场分离到一株H5N2亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/3/2013(H5N2)。本研究对其全基因组序列进行测序,并对鸡进行静脉接种指数(IVPI)测定,同时对BALB/c小鼠进行致病性试验。病毒的各基因节段序列分析表明:该病毒的HA基因属于Clade 7.2分支,HA蛋白的裂解位点处具有多个连续碱性氨基酸(342RRRKR346),具备高致病性AIV(HPAIV)的典型分子特征。BLAST分析显示该分离株的各个基因节段分别与H5N1和H9N2亚型AIV的相应基因节段具有很高的同源性,推测该分离株可能为一株重组病毒。该病毒的IVPI为2.94,对鸡呈高致病性;对鼠的半数致死量(MLD50)>6.0 logEID50,呈低致病性,病毒仅在小鼠的肾和鼻甲骨中进行较低程度的复制。以上结果表明,Clade 7.2分支HPAIV仍保持对鸡高致病性而对小鼠低致病性的特征。

关键词：禽流感病毒 H5N2 重组进化分析致病性

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禽流感病毒H5 HA和M基因双重荧光RT-PCR诊断方法的建立

禽流感病毒H5 HA和M基因双重荧光RT-PCR诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王秀荣徐晓龙马勇包红梅施建忠曾显营李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言H5亚型禽流感的爆发不仅给家禽养殖业带来了巨大的损失,同时也造成了人的死亡。因此,迫切需要一种快速、敏感、特异的分子检测方法来应用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的诊断。荧光RT-PCR方法作为病毒快速诊断的有效工具,已经用于H5亚... 详细信息

引言H5亚型禽流感的爆发不仅给家禽养殖业带来了巨大的损失,同时也造成了人的死亡。因此,迫切需要一种快速、敏感、特异的分子检测方法来应用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的诊断。荧光RT-PCR方法作为病毒快速诊断的有效工具,已经用于H5亚型和AIV的检测。但是,由于疫苗免疫大面积应用形成的高免疫压力,H5亚型禽流感病毒不断发生遗传变异,针对H5亚型引物和探针需要随着新病

关键词：禽流感病毒 AIV 双重荧光 RT-PCR H5 HA

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A型流感病毒H7N9亚型和通用三重荧光RT-PCR诊断方法的建立

A型流感病毒H7N9亚型和通用三重荧光RT-PCR诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：徐晓龙包红梅马勇施建忠曾显营李雁冰陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言新型的H7N9亚型流感病毒在家禽上无任何症状显现,无法依靠临床症状进行初步鉴别,这使得监控变得更加困难。目前,在生物安全级别较高的实验室,H7N9亚型流感病毒采取病毒分离培养后,结合血凝和血凝抑制方法做出确诊。在全国各省市级... 详细信息

引言新型的H7N9亚型流感病毒在家禽上无任何症状显现,无法依靠临床症状进行初步鉴别,这使得监控变得更加困难。目前,在生物安全级别较高的实验室,H7N9亚型流感病毒采取病毒分离培养后,结合血凝和血凝抑制方法做出确诊。在全国各省市级实验室,由于不具备生物安全级别较高的实验条件,并且H7N9病毒可感染人类,导致临床发病甚至死亡,病毒分离培养将增加传播风险。因此,国家相

关键词：流感病毒 RT-PCR

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H10亚型禽流感病毒对不同宿主的致病性研究

H10亚型禽流感病毒对不同宿主的致病性研究

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王德丽慈彦鹏崔艳芳樊兆斌刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野... 详细信息

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野鸟体内分离到的多株H10亚型流感病毒株以及H10亚型参考毒株进行遗传演化分析,并对其生物学特性进行研究,为进一步探索H10亚型AIV在自然界

关键词：禽流感病毒 H10

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果子狸源H5N1亚型禽流感病毒的分离及生物学特性鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 181-184页

作者：吴珊珊王飞慈彦鹏刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全... 详细信息

2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全基因序列分析表明:该病毒属于Clade 2.3.2分支,其血凝素(HA)蛋白裂解位点存在多个连续的碱性氨基酸(-RRRR-),具有高致病性AIV(HPAIV)的典型分子特征,其HA、NA、PA、NS基因节段与A/muscovy duck/Vietnam/LBM57/2011(MD/VN/LBM57/11)(H5N1)有较高的同源性,为99.2%～99.6%;PB2、PB1、M、NP 4个基因节段与人源AIV A/Hubei/1/2010(HuB/1/10)(H5N1)的同源性最高,为99.0%～99.5%。动物试验显示:该病毒对小鼠的半数致死量为4.9 log EID50,对小鼠具有较高的致病性。在小鼠的肺和鼻甲骨中均能够进行良好的复制。以上结果表明,该分离株未经适应便具备感染哺乳动物并有较高致死的能力。

关键词：果子狸 H5N1亚型HPAIV 进化分析致病性

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抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 414-418页

作者：文雪霞包红梅孙佳善赵玉辉王云鹤姜永萍陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MA... 详细信息

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白。利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。

关键词：禽流感 NS1蛋白单克隆抗体抗原表位

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表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 436-439页

作者：王伟刘春国王寿山张超林刘彦云吕让刘明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达H 5N 1亚型clade 2.3.4禽流感病毒(AIV)HA基因的重组腺病毒,本研究通过RT-PCR扩增A/wild duck/Shandong/628/2011(H 5N 1)的H A基因,克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,构建重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV-HA。采用A d-Easy技术,制备表达AIVHA基因的复制缺陷型重组腺病毒rAd-H A。将rA d-HA感染Ad293细胞,可产生明显的细胞病变。通过细胞超薄切片观察到完整的腺病毒颗粒。经RT-PCR、间接免疫荧光及western blot证明HA基因在A d293细胞中成功转录和表达,并且表达的蛋白具有良好的生物学活性。本研究为新型H5N1亚型AIV活载体疫苗的研发奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型 HA基因重组腺病毒

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禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

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2013新型疫苗、重组蛋白及多肽药物研发注册与质量评价研讨会

作者：刘明张新涛刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感参考实验室

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱... 详细信息

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导后经SDS-PAGE和Western blot鉴定得到与预期值相符的重组融合蛋白。融合蛋白得到高效可溶性表达,表达量约占菌体表达量的60%。间接ELISA表明,通过MBP树脂柱分离纯化的重组蛋白具有较好的免疫原性,该试验为M2e亚单位疫苗研究的进一步开展奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 M2e表位疫苗免疫原性

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H5N1亚型禽流感病毒A/Guangxi/1/2005株抗药机制的研究

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中国预防兽医学报 2012年第9期34卷 682-685页

作者：王飞吴珊珊慈彦鹏刘丽玲田国彬曾显营管雪婷李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-G... 详细信息

为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-GX05)。通过全基因测序并与S-GX05全基因序列进行对比,结果显示S-GX05只在其M2蛋白中有一个氨基酸位点发生突变,即A30P;抗药性鉴定这两株病毒的半数药物抑制浓度(IC50)分别为0.9μM和48.9μM,表明R-GX05对金刚烷胺表现出一定程度的抗性。动物实验证实,这两株病毒对BALB/c小鼠的致病性基本一致,均表现出高致病性,其MLD50分别为4.7 log10 EID50和5.0 log10 EID50,两株病毒在小鼠体内各组织脏器中的分布及增殖能力也基本相同。这些结果表明,S-GX05在药物压力下产生抗药性后,并未引起其它生物学特性的改变。A30P的发现为进一步从分子水平上研究H5N1亚型AIV的抗药机制及新型抗流感新药的研发奠定了基础。

关键词： H5N1禽流感病毒抗药性金刚烷胺

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H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2012年第7期 113-115页

作者：王寿山张超林刘春国石薇琳刘彦云王伟刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室/OIE禽流感参考实验室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。H9N2亚型AIV为低致病性禽流感病毒,虽然毒力较H5N1亚型AIV弱,

关键词： H9N2亚型禽流感病毒序列分析 NA基因低致病性禽流感病毒 HA A型流感病毒 H5N1亚型 virus

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