检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第6期34卷 492-494页

作者：成云张艳萍李志杰郑永胜谭成章刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为分析鸡马立克氏病病毒(MDV)LMS分离株的分子遗传特性,本研究对该分离株基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区为11 746 bp,α样序列为997 bp,短重复区为12 431 bp。在重复区内,... 详细信息

为分析鸡马立克氏病病毒(MDV)LMS分离株的分子遗传特性,本研究对该分离株基因组重复区(包括连接长重复区和短重复区的α样序列)进行了测定。LMS分离株基因组的长重复区为11 746 bp,α样序列为997 bp,短重复区为12 431 bp。在重复区内,预测存在43个ORF,与参考病毒株序列相比存在5个变异较大的ORF。重复区的遗传进化分析表明,LMS分离株与国内814株和欧洲pC12-130株亲缘关系较近。LMS分离株在短重复区潜伏相关转录本(LATs)编码序列的预测转录起始位点位置存在缺失;LMS分离株在α样序列内存在一个新的短重复序列。

关键词：鸡马立克氏病病毒序列测定与分析重复区 α样序列

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新城疫病毒La Sota株F蛋白结构与部分功能区的预测

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中国预防兽医学报 2007年第12期29卷 938-942页

作者：张晓东刘怀然刘培欣闫丽辉刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

以新城疫病毒(Newcastlediseace virus,NDV)La sota F蛋白的氨基酸序列为基础,采用Chou-Fasman法、Garnier-Robson法、Karplus-Schulz法与Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法分别预测蛋白质的二级结构和B细胞抗原表位。预测结果表明,NDV La Sota F蛋白结构较为复杂,含有较多的α-螺旋、β-折叠区,转角和无规则卷曲等有柔韧性区域。此外,应用Tmap法预测了NDV La sota F蛋白的跨膜区域,通过同源建模的方法预测了该蛋白的三维空间结构,并比较了强弱毒株裂解位点处空间结构的不同。为进一步通过试验方法确定其蛋白的B细胞表位和从结构出发了解其生物学功能,提供了理论依据。

关键词： NDV La Sota F蛋白结构 B细胞抗原表位功能

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猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染对仔猪致病性的评估

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中国预防兽医学报 2007年第5期29卷 336-340,393页

作者：温永俊吴国军蔡雪辉刘永刚王洪峰姜成刚尹训南中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究通过猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强毒共感染3周龄健康仔猪来评价其致病性。试验动物随机分为3组,空白对照组(n=3头),PRRSV单独感染组(n=3头),PCV2和PRRSV共感染组(n=6头),从而比较相互之间的差异。通过临床症状、病理学变化、病原学和血清学检查,对二者混合感染仔猪的致病性进行了研究。结果表明PCV2和PRRSV共同感染能引起仔猪断奶后多系统消耗性综合征,表现为淋巴组织肿大、出血,肉芽肿性炎症,坏死性肝炎,仔猪消瘦、生长缓慢等特征性病变;混合感染能加重PRRSV对仔猪引起的间质性肺炎的严重程度。混合感染可以出现支气管肺炎和明显的肝病变,淋巴结多呈界限明显的块状出血等典型病变。

关键词：猪圆环病毒2型猪繁殖与呼吸综合征混合感染致病性

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猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒混合感染的检测及TTV遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 6-10页

作者：刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41... 详细信息

为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41.1%和37.5%,PCV1与PCV2混合感染率为19.6%;PCV2阳性样品中TTV1和TTV2混合感染率达75.0%。此外,对2株TTV1基因组进行测序,与GenBank中登录的6个TTV1序列比对,相似性结果为67.3%～95.1%;对4株TTV2基因组测序,与GenBank登录的4条TTV2序列比对,相似性为84.7%～90.4%;将TTV1与TTV2进行序列比对,相似性仅为44.0%。TTV1和TTV2基因高变区分别位于520 nt～2 594 nt和720 nt～2 170 nt;TTV1基因保守区位于1 nt～520 nt和2 595 nt～2 800 nt;而TTV2基因保守区位于1 nt～719 nt和2 171 nt～2 800 nt。以上结果表明,我国猪群中存在TTV与PCV2的混合感染,并且两种病毒混合感染引起的相关疾病可能存在协同致病性;TTV1和TTV2基因型差异较大,具有遗传变异多样性的特点。

关键词：猪输血传播病毒猪圆环病毒混合感染遗传变异分析

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禽传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第4期34卷 309-312页

作者：王芳刘晓丽赵飞韩宗玺邵昱昊孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定传染性支气管炎病毒(IBV)的抗原表位,本研究将IBV ck/CH/LDL/091022株免疫6周龄～8周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经过有限稀释法克隆筛选,得到一株针对IBV核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)2F2,经鉴定其染... 详细信息

为鉴定传染性支气管炎病毒(IBV)的抗原表位,本研究将IBV ck/CH/LDL/091022株免疫6周龄～8周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经过有限稀释法克隆筛选,得到一株针对IBV核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)2F2,经鉴定其染色体数目为101条,MAb亚类鉴定其重链属于IgG1,轻链属于к链。用肽扫描方法将IBV ck/CH/LDL/091022株N基因截短为具有相互部分重叠的23段,表达带GST标签的重组蛋白,与MAb 2F2进行western blot和ELISA反应后,鉴定其表位为397INWGDSAL404。将表位序列进行Blast结果表明,本研究鉴定的表位在大部分IBV株中均为保守抗原表位,为进一步建立IBV的检测方法奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒单克隆抗体肽扫描表位

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禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

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中国兽医科学 2008年第5期38卷 407-411页

作者：张云郝雪耿宏伟郭东春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒（ARV）99G株σB编码基因，序列分析表明，99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90％～99％，而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60％；用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载... 详细信息

采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒（ARV）99G株σB编码基因，序列分析表明，99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90％～99％，而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60％；用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中，构建了重组表达质粒pGEX-σB；鉴定后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导，σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达，表达的融合蛋白占总蛋白的41．46％，融合蛋白的分子质量为66ku，主要以包涵体形式存在；Western-blot结果显示，该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应，表明重组蛋白具有良好的反应原性，可用于禽呼肠孤病毒病诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制。

关键词：禽呼肠孤病毒 σB基因原核表达

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马传染性贫血病毒第1 9、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA全基因序列分析

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中国预防兽医学报 2007年第7期29卷 487-491,518页

作者：全滟平赵立平韩秀娥沈楠吕晓玲沈荣显相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDD... 详细信息

不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDDV在基因水平上的差异,本实验对无免疫保护效果的第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA进行了全基因序列测定,并与已测序的疫苗毒株进行序列比较。第19代和第26代FDDV全基因核苷酸序列同源性高达99.5%,与疫苗毒株全基因核苷酸序列的同源性分别为96.9%、96.7%。LTR是EIAV在细胞传代中变异最显著的区域,第19、26代FDDV的LTR与疫苗毒的LTR同源性仅为89.6%、89.3%。马传贫病毒的gag基因高度保守,第19、26代FDDV与疫苗毒株的gag基因推导氨基酸序列仅有2个氨基酸不同。第19、26代FDDV与疫苗毒株的pol基因、env基因的推导氨基酸序列的同源性分别为98.9%、98.8%、93.7%、93.6%。由序列比较结果可以推断,第19代、第26代FDDV不具有免疫保护效果的主要原因可能是由于LTR和env基因的变异,导致病毒复制能力下降或免疫原性丧失,不能诱导机体产生良好的免疫反应。

关键词：马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒全基因序列分析

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鸡马立克氏病病毒疫苗株对强毒株的复制抑制作用

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 7-10页

作者：郑永胜张艳萍李志杰郑惠文谭成章刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究鸡马立克氏病(MD)疫苗株对强毒株体内复制的抑制作用,本研究依据鸡MD病毒(MDV)R-LORF2基因序列设计引物和探针,建立特异性定量检测MDV流行强毒株L-CY的荧光定量PCR方法,并且应用该方法对CVI988疫苗株免疫后不同时间间隔L-CY株攻... 详细信息

为研究鸡马立克氏病(MD)疫苗株对强毒株体内复制的抑制作用,本研究依据鸡MD病毒(MDV)R-LORF2基因序列设计引物和探针,建立特异性定量检测MDV流行强毒株L-CY的荧光定量PCR方法,并且应用该方法对CVI988疫苗株免疫后不同时间间隔L-CY株攻毒鸡体内不同组织的强毒载量进行动态的定量检测。结果显示,免疫后7 d和14 d攻毒鸡体内不同组织强毒载量显著低于单独攻毒鸡;而同时免疫和攻毒组鸡中强毒载量无明显降低。在免疫后7 d攻毒组中,法氏囊中的强毒载量始终稳定在低水平,但羽髓和肾脏中的强毒载量自攻毒后21 d开始明显上升。结果表明,至少要在感染L-CY株14 d前免疫,CVI988疫苗株才能有效抑制强毒株在体内的复制。此外,当免疫后7 d攻毒时,在羽髓或肾脏等非免疫器官中,疫苗病毒不能持续抑制强毒复制,最终导致疫苗不能提供有效的保护。本研究为MD免疫机制的进一步研究提供了依据。

关键词：马立克氏病病毒病毒载量荧光定量PCR 抑制作用

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马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 419-422页

作者：丛锋刘长军张艳萍李志杰张锋成云杨文闯许娜娜中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定鸡羽髓上皮细胞感染马立克氏病病毒(MDV)前后差异表达的蛋白,本研究以MDV强毒GA株人工感染SPF鸡,并通过双向电泳技术进行分析。结果显示:在病毒感染后4 d、7 d、14 d和21 d显著差异表达的蛋白点分别有2个、8个、25个和9个;而通过... 详细信息

为鉴定鸡羽髓上皮细胞感染马立克氏病病毒(MDV)前后差异表达的蛋白,本研究以MDV强毒GA株人工感染SPF鸡,并通过双向电泳技术进行分析。结果显示:在病毒感染后4 d、7 d、14 d和21 d显著差异表达的蛋白点分别有2个、8个、25个和9个;而通过质谱技术鉴定出29种蛋白质,其中包括能量代谢相关蛋白、增殖和凋亡相关蛋白、细胞骨架蛋白、信号传导蛋白、转录相关蛋白、免疫相关蛋白和其他功能蛋白质。本实验首次对鸡羽髓上皮细胞感染MDV后各时期蛋白表达水平的变化进行研究,鉴定了多种差异表达蛋白质,为进一步揭示MDV与宿主的相互关系、感染性病毒粒子的成熟和致病机制提供了依据。

关键词：马立克氏病病毒羽髓上皮细胞双向电泳蛋白质组学

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2012年第9期42卷 916-920页

作者：贠炳岭刘文李德龙秦立廷刘在斯吴关祁小乐王永强高宏雷王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒(ALV)的方法,以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量... 详细信息

为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒(ALV)的方法,以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/mL,且与禽类常见的病毒鸡传染性支气管炎病毒、马立克病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒等无交叉反应。动物感染试验结果表明,用该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌物中的禽白血病病毒。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法的符合率分别为96.5%和93.8%。证实,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。

关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA

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