检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2011年第5期24卷 618-620,624页

作者：张严予廖国阳李卫东中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

高致病性H5N1流感病毒可导致严重的致死性疾病,对人类健康造成了极大威胁。尽管目前尚未发生人与人之间传播,但该病毒一旦与人流感病毒重组,即有可能转变为可在人与人之间传播的高致死性流感病毒,从而导致新的流感大流行。此外,H5N1流... 详细信息

高致病性H5N1流感病毒可导致严重的致死性疾病,对人类健康造成了极大威胁。尽管目前尚未发生人与人之间传播,但该病毒一旦与人流感病毒重组,即有可能转变为可在人与人之间传播的高致死性流感病毒,从而导致新的流感大流行。此外,H5N1流感病毒经过不断变异后可突破种属屏障,从禽类传播给哺乳动物及人类,并进一步在病毒和宿主的多种因素作用下导致宿主发病乃至死亡。本文对H5N1大流行流感疫苗的研究进展作一综述。

关键词：流感病毒A型,H5N1亚型流感疫苗

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表达神经营养因子Neurturin的骨髓间充质干细胞的构建及体外活性检测

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中国生物工程杂志 2012年第3期32卷 1-6页

作者：王晚璞孙茂盛李鸿钧谢天宏严敏周艳尹娜北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

研究神经营养因子Neurturin(NTN)在由于神经元损伤而造成的神经退行性疾病中对神经元的保护和修复作用。利用重组腺病毒载体将NTN基因转入恒河猴骨髓间充质干细胞(rMSC),通过RT-PCR、IF及Western blot方法检测NTN的转录和表达,并采用鸡... 详细信息

研究神经营养因子Neurturin(NTN)在由于神经元损伤而造成的神经退行性疾病中对神经元的保护和修复作用。利用重组腺病毒载体将NTN基因转入恒河猴骨髓间充质干细胞(rMSC),通过RT-PCR、IF及Western blot方法检测NTN的转录和表达,并采用鸡胚背根神经节体外培养实验和胚胎大鼠中脑多巴胺能神经元存活实验对NTN进行体外活性检测。结果表明NTN在rMSC中稳定表达和分泌,并具有体外生物学活性,为由于神经元损伤造成的神经退行性疾病的干细胞移植治疗奠定了一定的基础。

关键词：恒河猴骨髓间充质干细胞重组腺病毒神经营养因子 Neurturin 活性检测

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Benzonase核酸酶在Vero细胞流感病毒灭活疫苗中的应用研究

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病毒学报 2023年第4期39卷 980-990页

作者：阮朝列施锦丽李卫东刘伯川鲍晓林廖国阳杨璐洁周健中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650000

连续细胞系用于生物制品生产可能会造成宿主成分传递给受种者的问题。为了评估Benzonase核酸酶在细胞流感病毒灭活疫苗中降解宿主细胞残余DNA的效果。本研究采用Vero细胞培养流感病毒H3N2,获得病毒原液后,经“Benzonase核酸酶+300kD超... 详细信息

连续细胞系用于生物制品生产可能会造成宿主成分传递给受种者的问题。为了评估Benzonase核酸酶在细胞流感病毒灭活疫苗中降解宿主细胞残余DNA的效果。本研究采用Vero细胞培养流感病毒H3N2,获得病毒原液后,经“Benzonase核酸酶+300kD超滤膜包+Capto Core 700”(实验组)、“300kD超滤膜包+Capto Core 700”(方案一)和“300kD超滤膜包+Capto Core 700+Capto Q”(方案二)三种纯化方案分别对病毒原液进行纯化,取样检测各步骤的血凝效价、血凝素含量、总蛋白含量、宿主蛋白含量、宿主DNA含量评估对流感病毒的纯化效果,并通过透射电镜观察病毒颗粒形态。灭活验证通过后,按血凝素HA含量为15μg/剂(体积0.5mL)皮下免疫BALB/c小鼠2次,免后14d后分离血清检测抗体滴度水平评价免疫原性。结果显示,实验组最终纯化液病毒的回收率为(66.70±4.87)%,配置为单价制剂后各项指标符合药典要求;方案一最终纯化液病毒回收率为(50.00±3.41)%,rcDNA含量为(28366.67±1006.65)pg/mL,配置为单价制剂后rcDNA含量不符合药典要求(<100 pg/剂);方案二对比方案一增加了阴离子交换,纯化后病毒回收率为(46.83±1.62)%,配置为单价制剂后各项指标符合药典要求。透射电镜结果显示病毒颗粒不会受到核酸酶的影响。免疫原性评价结果显示小鼠血清抗体滴度与对照组无显著差异,表明核酸酶对流感病毒的免疫原性没有影响。另外,Vero细胞DNA经核酸酶处理后,使用毛细管电泳未检测到具有大小的DNA片段,说明核酸酶可以将DNA降解为核苷酸。综上,本研究初步确定Benzonase核酸酶用于Vero细胞为基质的流感病毒灭活疫苗的应用。

关键词： Benzonase核酸酶疫苗残余DNA 流感病毒

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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒疫苗的研究进展

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病毒学报 2024年第6期40卷 1462-1475页

作者：梁冰岩李倩倩刘晓娟张小龙李智华中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)是一种新发的蜱传病毒,其感染可引起发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS),临床表现以发热伴血小板减少为主要特征,少数患者病情较重且发展迅速,可因多脏器功能衰竭而死亡。目前,针对SFTSV感染的治疗方案大多是症状支持性治疗。尽管近年来研究人员在灭活疫苗、减毒活疫苗、DNA疫苗、重组病毒载体疫苗、蛋白质亚基疫苗的研究中取得了突破性进展,但尚无上市疫苗。此外,动物模型建立也面临诸多问题,具有一定局限性。本文对SFTSV疫苗以及疫苗评价动物模型的国内外研究进行综述。

关键词：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒疫苗动物模型

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嵌合Neurturin在恒河猴脂肪间充质干细胞中的表达及定向诱导作用

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中国细胞生物学学报 2012年第1期34卷 25-33页

作者：周艳孙茂盛李鸿钧王晚璞谢天宏中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

该研究通过重组腺病毒传递嵌合型Nerve growth factor(NGF)/Neurturin(NTN)至恒河猴脂肪间充质干细胞(rhesus adipose mesenchymal stem cells,rASCs)中,评价嵌合型NGF/NTN在诱导该细胞为神经元细胞中的作用,为进一步探讨ASC-NTN体内修复帕金森氏病猴模型潜能提供实验基础。用带有NGF/NTN嵌合基因的重组腺病毒感染rASCs,通过RT-PCR、免疫荧光及ELISA检测重组NTN在rASCs的表达及产物定位,在外源化学诱导剂协同作用下对rASCs进行诱导。rAd-NGF/NTN感染rASCs后检测到NGF/NTN转录产物,表达产物可分泌到细胞外,分泌出的NTN蛋白在体外能够促进鸡胚背根神经节长出神经突起,维持胎鼠中脑神经元的存活。rASCs在内外源性诱导因素诱导下可向神经元样细胞分化。利用rAd-NGF/NTN可将NGF-NTN传递至rASCs中并表达,rASCs能够被定向诱导为具有分泌NTN作用的神经元样细胞。这些研究结果为将来rASCs-NTN移植进入帕金森氏病猴模型进行帕金森氏病治疗提供了重要依据。

关键词： Neurturin 脂肪间充质干细胞重组腺病毒体外活性帕金森氏病

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无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒条件的优化

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中国生物制品学杂志 2010年第6期23卷 639-642页

作者：田石华孙明波张新文马磊高菁霞宋绍辉姜述德李卫东廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的优化无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的条件,为Vero细胞流感疫苗的开发奠定基础。方法在搅拌瓶中采用不同的细胞接种量和不同的微载体浓度培养Vero细胞,制备流感病毒,并检测不同的pH值、TPCK-胰酶含量、病毒接种量及病毒收... 详细信息

目的优化无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的条件,为Vero细胞流感疫苗的开发奠定基础。方法在搅拌瓶中采用不同的细胞接种量和不同的微载体浓度培养Vero细胞,制备流感病毒,并检测不同的pH值、TPCK-胰酶含量、病毒接种量及病毒收获时间对流感病毒血凝滴度的影响。结果以(1.0～5.0)×105个/ml的Vero细胞接种至浓度为3mg/ml的无血清微载体中,病毒培养液pH值为7.2～7.4,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,病毒接种量为1.0MOI,并在感染48h后补加TPCK-胰酶,培养72h后收获上清与细胞内病毒,血凝滴度可达1:512。结论已获得了无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的适宜条件,为应用生物反应器大规模制备流感病毒奠定了基础。

关键词：培养基无血清微载体 Vero细胞流感病毒A型 H1N1亚型

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A组人轮状病毒NSP2基因的克隆、表达及免疫学性质研究(英文)

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中国生物工程杂志 2009年第2期29卷 17-23页

作者：范耀春文喻玲尹兴晓李传印陈元鼎中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒基因组复制过程中起重要作用。在原核系统中重组表达了来自中国的第一株全基因组被克隆和研究了的轮状病毒NSP2,并进一步对其免疫学性质进行了研究。结果显示,在大肠杆菌中能够高效表达重组NSP2蛋白,而且... 详细信息

轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒基因组复制过程中起重要作用。在原核系统中重组表达了来自中国的第一株全基因组被克隆和研究了的轮状病毒NSP2,并进一步对其免疫学性质进行了研究。结果显示,在大肠杆菌中能够高效表达重组NSP2蛋白,而且该蛋白能够诱发豚鼠产生特异性抗体。Western blot和免疫荧光检测表明所得抗体不仅能与该重组NSP2蛋白发生特异性反应,而且可以与轮状病毒SA11株或Wa株感染的MA104细胞中表达的NSP2发生反应。以上这些结果为进一步研究该重组NSP2蛋白的结构。

关键词：轮状病毒 NSP2 重组表达免疫学性质

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HSV-1立即早期蛋白ICP22与VP16共同参与α基因转录调控的初步分析

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中国科学（C辑） 2008年第12期38卷 1123-1129页

作者：寸伟郭磊张莹刘龙丁王丽春李建峰董承红王晶晶李琦涵中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus1,HSV-1)在宿主体内形成两种感染模式,不同感染模式的建立与病毒α基因的表达相关.作为病毒α基因表达产物之一的ICP22在病毒复制中发挥了多重作用,但其确切功能尚不清楚.实验利用氯霉素乙酰转移... 详细信息

Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus1,HSV-1)在宿主体内形成两种感染模式,不同感染模式的建立与病毒α基因的表达相关.作为病毒α基因表达产物之一的ICP22在病毒复制中发挥了多重作用,但其确切功能尚不清楚.实验利用氯霉素乙酰转移酶(chloram-phenicol acetyl transferase,CAT)报告系统发现ICP22非特异地抑制多种病毒或细胞启动子的转录启动作用,而且该抑制作用不受特定的病毒或细胞启动子上游调控元件影响.进一步的实验发现,HSV病毒蛋白VP16通过结合α4基因启动子上游特定元件解除ICP22对α4基因的转录抑制.这些结果提示,ICP22和VP16可能共同参与α基因的转录调控,从而建立HSV-1裂解性增殖或潜伏性感染.

关键词：单纯疱疹病毒 ICP22 转录 VP16 α基因

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乙肝核心抗原病毒样颗粒呈现HPV 16L1抗原表位及特异抗体诱导

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中国生物工程杂志 2017年第3期37卷 58-64页

作者：孙文佳姚宇峰杨旭黄惟巍刘存宝龙琼褚晓杰马雁冰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的:构建呈现HPV 16L1抗原表位的病毒样颗粒(VLPs),为新型HPV疫苗及特异抗体制备提供新的思路。方法:将编码HPV 16L1抗原表位QPLGVGISGHPLLNKLDDTE寡聚核苷酸片段克隆于HBc Ag基因编码第78、79位氨基酸序列之间,重组质粒转化大肠杆菌DH... 详细信息

目的:构建呈现HPV 16L1抗原表位的病毒样颗粒(VLPs),为新型HPV疫苗及特异抗体制备提供新的思路。方法:将编码HPV 16L1抗原表位QPLGVGISGHPLLNKLDDTE寡聚核苷酸片段克隆于HBc Ag基因编码第78、79位氨基酸序列之间,重组质粒转化大肠杆菌DH5α。重组蛋白经IPTG诱导后以SDS-PAGE分析表达情况,并以Western blot鉴定重组蛋白中HPV 16L1表位的免疫反应性。菌体超声破碎后经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心进行纯化,并经凝胶层析Sepharose G25脱盐,最后以电子显微镜及高效液相(HPLC)凝胶过滤色谱鉴定VLPs的存在并分析纯度。纯化的病毒样颗粒分别于0周、2周、4周经皮下注射免疫BALB/c小鼠,以Western blot分析血清特异识别L1蛋白的能力。结果:HBc Ag/L1肽嵌合蛋白获得成功表达,能够被商业化L1抗体特异识别,经密度梯度超速离心及HPLC分析显示其与HBc Ag行为一致,电子显微镜观察进一步确定其以HBc Ag病毒样颗粒形式存在。VLPs免疫小鼠获得的抗血清能够特异识别酵母表达的重组L1蛋白。结论:HBc Ag VLPs成功呈现HPV16L1蛋白并有效激发特异抗体应答。

关键词：人乳头瘤病毒表位乙肝核心抗原病毒样颗粒原核表达

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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗纯化工艺的建立

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中国生物制品学杂志 2010年第4期23卷 394-395,402页

作者：衡燮高娜伍胤杰林小瑞周武刚王微唐聪姜述德杨净思孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)纯化工艺。方法采用Sepharose CL-6B凝胶过滤和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析两步纯化法纯化脊髓灰质炎病毒,进行各项检定后再经除菌过滤和灭活。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒纯化后的蛋白去除... 详细信息

目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)纯化工艺。方法采用Sepharose CL-6B凝胶过滤和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析两步纯化法纯化脊髓灰质炎病毒,进行各项检定后再经除菌过滤和灭活。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒纯化后的蛋白去除率均不低于98.81%,病毒滴度分别为8.75、8.50和8.63lgCCID50/ml,DNA残留量均<100pg/ml。除菌过滤和灭活后,D抗原含量略有下降。结论已建立了Sabin株IPV的纯化工艺,纯化后制备出了高纯度的Sabin株IPV。

关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗凝胶过滤层析离子交换层析

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