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基础医学与临床 2004年第3期24卷 282-286页

作者：杨大海倪道凤高扬丁大连林嘉友 Richard J Salvi 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院耳鼻咽喉科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室北京100005 The State University of NewYork at Buffalo

研究卡铂损伤灰鼠 (Chinchilla)耳蜗内毛细胞 (Innerhaircell,IHC)后 ,耳蜗核 (CochlearNucleus,CN)神经元出现的变化及可能涉及的环节。采取腹腔内给药 ,1月后取出用药组、对照组动物耳蜗 ,观察毛细胞 ,绘制耳蜗图 ,对耳蜗核以冠位连... 详细信息

研究卡铂损伤灰鼠 (Chinchilla)耳蜗内毛细胞 (Innerhaircell,IHC)后 ,耳蜗核 (CochlearNucleus,CN)神经元出现的变化及可能涉及的环节。采取腹腔内给药 ,1月后取出用药组、对照组动物耳蜗 ,观察毛细胞 ,绘制耳蜗图 ,对耳蜗核以冠位连续切片 (10 μm) ,利用原位杂交的方法 ,以编码微管蛋白的cDNA片段为探针 ,进行检测。发现与耳蜗图所示全长内毛细胞破坏对应 ,伴随耳蜗核神经元体积缩小 ,耳蜗核内表达微管蛋白的细胞数减少。提示随着耳蜗内毛细胞的损伤、破坏 ,耳蜗核的传入神经冲动刺激被去除 ,影响了耳蜗核团细胞的信号系统的某些环节 ,从而导致细胞体积减少、细胞功能损伤等一系列变化。

关键词：灰鼠耳蜗损伤耳蜗核微管蛋白卡铂

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核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗原基因克隆表达及其抗体诊断原发性胆汁性肝硬化的价值初探

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中华检验医学杂志 2005年第11期28卷 1120-1125页

作者：李永哲刘镭孙庆国曾常茜赵振国佟大伟张蜀澜高扬于孟学朱立平 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科北华大学医学院免疫学教研室北华大学医学院免疫学教研室吉林北方肝胆医院吉林北方肝胆医院中国医学科学院中国协和医大学基础医学研究所免疫学系 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

目的克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,构建重组表达质粒,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,建立酶联免疫吸附法(ELISA),初探抗核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法构建重组表达... 详细信息

目的克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,构建重组表达质粒,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,建立酶联免疫吸附法(ELISA),初探抗核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法构建重组表达载体,在大肠杆菌BL21、M15中表达;融合蛋白经NiNAT树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)及免疫印迹法(WB)进行免疫活性鉴定;应用表达蛋白建立间接ELISA,检测60名健康体检者、68例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、60例病毒性肝炎、60例结缔组织病患者血清中抗gp210、p62和LBR抗体。结果经重组质粒测序和酶切结果证实,gp210、p62和LBR目的基因已正确插入原核表达载体中,基因序列正确,符合表达框架;SDSPAGE检测表达产物分别在69000、62000和27000处有一明显的蛋白表达条带,WB分析表明重组蛋白具有人gp210、p62和LBR抗原反应性。ELISA检测标本血清结果显示,PBC中,抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体阳性率分别为36.8%、30.9%和5.9%;而病毒性肝炎组、结缔组织病组和健康体检组中,除抗gp210抗体在结缔组织病患者中阳性率为1.7%外,3种自身抗体检测结果均为阴性。PBC组3种自身抗体阳性率与疾病对照组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论本研究成功克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,并将其在大肠杆菌中成功表达。应用纯化融合蛋白建立的ELISA检测抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体,对PBC具有较好特异性,为PBC的特异性临床诊断提供了有效的工具。

关键词：肝硬化,胆汁性自身抗原核包膜蛋白

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桂辛通对糖尿病鼠晶体醛糖还原酶及山梨醇的影响

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中医杂志 2000年第7期41卷 435-436页

作者：徐慧媛郝炜欣贾力张克俭张宏孙仁宇梁晓春郭赛珊中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院北京市东城区帅府园1号100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

为了观察桂辛通对糖尿病大鼠晶体醛糖还原酶(AR)活性及山梨醇(SNS)含量的影响,并探讨其作用机理。我们采用链脲佐菌素(STZ)糖尿病(DM)大鼠模型,给予中药桂辛通灌胃,并以氨基胍作对照,观察了中药桂辛通对大鼠晶体AR活性和SNS含量的影响... 详细信息

为了观察桂辛通对糖尿病大鼠晶体醛糖还原酶(AR)活性及山梨醇(SNS)含量的影响,并探讨其作用机理。我们采用链脲佐菌素(STZ)糖尿病(DM)大鼠模型,给予中药桂辛通灌胃,并以氨基胍作对照,观察了中药桂辛通对大鼠晶体AR活性和SNS含量的影响。结果,桂辛通治疗后,糖尿病大鼠晶体AR活性和SNS含量明显降低。与未治疗糖尿病大鼠比较有显著性差异(P<0.01)。提示桂辛通能改善糖尿病大鼠晶体多元醇代谢,对糖尿病慢性并发症有一定的防治作用。

关键词：糖尿病中医药疗法桂辛通晶体醛糖还原酶

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尼曼-匹克病B型的产前诊断

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中华儿科杂志 1998年第5期36卷 273-275页

作者：张为民郭玉凤施惠平高淑英赵时敏孙念怙中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传室北京市计划生育技术指导所中国协和医科大学北京协和医院

目的对尼曼－匹克病Ｂ型进行产前诊断。方法应用成色底物２－己癸酰氨基－４－硝基苯磷酸胆碱，对４例尼曼－匹克病Ｂ型先证者及其父母进行了外周血白细胞中鞘磷脂酶的酶学分析，并对这４例先证者再妊娠的母亲进行了绒毛、羊水细胞中的... 详细信息

目的对尼曼－匹克病Ｂ型进行产前诊断。方法应用成色底物２－己癸酰氨基－４－硝基苯磷酸胆碱，对４例尼曼－匹克病Ｂ型先证者及其父母进行了外周血白细胞中鞘磷脂酶的酶学分析，并对这４例先证者再妊娠的母亲进行了绒毛、羊水细胞中的酶学分析。结果先证者均有明显的鞘磷脂酶的缺乏，而父母的酶水平与正常有重叠。对２例先证者母亲孕早期绒毛、孕中期羊水进行酶学分析，结果与正常个体差异均无显著意义，另外２例仅于孕中期作了羊水细胞中的酶学分析，结果亦正常。随访４名先证者母亲所生新生儿表型正常。结论绒毛和羊水细胞中鞘磷脂酶分析可用于尼曼－匹克病的产前诊断。

关键词：尼曼-皮克病产前诊断常染色体疾病

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓中正常及异常造血干/祖细胞含量分析

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中华血液学杂志 1998年第10期19卷 518-521页

作者：李强张之南刘尔坤沈悌武永吉许彩民中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血液科华西医科大学附属第二医院儿科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：根据阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓造血干／祖细胞的含量，探讨异常细胞获得造血优势的可能原因。方法：骨髓有核细胞以ＣＤ３４ＦＩＴＣ及ＣＤ５９ＰＥ免疫荧光双标记，经流式细胞仪测定不同细胞群内ＣＤ３４... 详细信息

目的：根据阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓造血干／祖细胞的含量，探讨异常细胞获得造血优势的可能原因。方法：骨髓有核细胞以ＣＤ３４ＦＩＴＣ及ＣＤ５９ＰＥ免疫荧光双标记，经流式细胞仪测定不同细胞群内ＣＤ３４＋细胞含量。结果：①正常对照及ＰＮＨ患者骨髓中的ＣＤ３４＋细胞均分布在“淋巴细胞窗”（Ａ窗）及“原始细胞窗”（Ｄ窗）内。②正常对照Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞数分别为（３７０１±８９６）／１０５个细胞、（１１３７３±１５７４）／１０５个细胞；ＰＮＨ患者Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞分别为（１２１５±７４９）／１０５个细胞及（６４２０±２３３７）／１０５个细胞，均较正常对照显著减少（Ｐ＜０．０１）。③患者ＣＤ５９＋细胞群中ＣＤ３４＋细胞的减少比ＣＤ５９－细胞群更为显著，Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ５９－细胞群中ＣＤ３４＋细胞分别相当于ＣＤ５９＋细胞群的５．６２倍、１．８５倍。④正常对照Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞几乎均为ＣＤ５９＋表型（分别为９９．２％±１．０％、９８．７％±０．８％），而ＰＮＨ患者Ａ窗及Ｄ窗内则都以ＣＤ３４＋ＣＤ５９－细胞占据数量优势（分别为７９．３％±１５．５％、８５．９％±７．８％）。结论：ＰＮ?

关键词：血红蛋白尿症 PNH 骨髓造血干细胞流式细胞术

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蛋白芯片技术在自身抗体检测中的应用

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中华检验医学杂志 2006年第12期29卷 1116-1119页

作者：李永哲赵智贤佟大伟张蜀澜胡朝军高扬杨卫平于孟学朱立平程京中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730 生物芯片北京国家工程研究中心博奥生物有限公司中国医学科学院中国协和医大学基础医学研究所免疫学系中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科 100730

目的建立应用蛋白芯片技术检测抗核抗体谱中11种自身抗体的方法,并对蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性进行评价。方法通过蛋白芯片技术与间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)自身抗体检测试剂盒进行比对,验证抗核抗... 详细信息

目的建立应用蛋白芯片技术检测抗核抗体谱中11种自身抗体的方法,并对蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性进行评价。方法通过蛋白芯片技术与间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)自身抗体检测试剂盒进行比对,验证抗核抗体谱检测蛋白芯片(抗SSA-52抗体、抗SSA-60抗体、抗SSB抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗dsDNA抗体、抗rRNP抗体、抗着丝点抗体和抗核抗体)在临床应用中的敏感性和特异性。除抗Jo-1抗体阳性样品较罕见,仅检测阳性样品32份,其他10种自身抗体,每种选择各阳性样本70份,阴性样本294份;并对检测结果进行统计学分析。结果除抗SSA52抗体和抗SSB抗体的检测敏感度分别为95·7%和98·6%外,其他9种自身抗体的检测敏感度均为100%;除抗SSB抗体、抗RNP-68抗体、抗Scl-70抗体、抗dsDNA抗体、抗CENP-B抗体、抗核抗原提取物抗体(ANA)的检测特异度分别为98·0%、98·0%、99·7%、99·7%、99·7%、98·3%外,其他5种自身抗体的检测特异度均为100%。结论蛋白芯片技术检测11种抗核抗体谱自身抗体的检测敏感度(均>95·0%)和特异度(均>98·0%)均较高,且与IIF和ELISA法有较高的符合率,能满足临床检测自身抗体谱的要求。此外,蛋白芯片技术检测自身抗体时具有高通量、简单快速、敏感度好和特异度强等优点,值得临床推广应用。

关键词：自身抗体抗体抗核蛋白芯片自身免疫性疾病

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儿童期脊肌萎缩症的基因诊断及产前基因诊断

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中华儿科杂志 1997年第12期35卷 631-634页

作者：袁丽芳刘天慈杨涛周文敏牛静波霍亮吴沪生赵时敏孙念怙马素参林振兴中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传室首都医科大学附属北京儿童医院中国协和医科大学北京协和医院

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ... 详细信息

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对３７例ＳＭＡ患儿作了ＳＭＡ基因缺失的检测；并作２例ＳＭＡ产前诊断。结果：１８个家系通过ＪＫ５３ＣＡ１／２位点诊断１２个（可诊断率６６．７％），通过５ＤＳ６３７位点诊断１４个（７．８％），１０个ＳＭＡ家系通过ＣＡＴＴ１位点诊断９．５个（９５．０％）；３７例患儿中３２例（８６．５％）有端粒侧ｅｘｏｎ７的纯合性缺失；２例接受产前诊断者，１例胎儿患病，１例胎儿为正常。结论：应用ＳＭＡ基因旁侧ＣＡ重复序列联合ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测进行ＳＭＡ基因诊断和产前诊断简便、准确、可应用于临床。

关键词：肌萎缩脊髓性产前诊断序列分析基因诊断

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反义寡聚脱氧核苷酸抑制卵巢癌细胞株SKOV3/mdr1中MDR1基因的表达

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基础医学与临床 2001年第2期21卷 127-130页

作者：金滢潘凌亚童英张毅张双喜吴英毛宁杨秀玉中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科北京100730 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

多药耐药基因 (MDR1)编码的P -糖蛋白 (Pgp ,P - 170 )是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一。本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响。反义寡聚脱氧核苷酸 (MDR1... 详细信息

多药耐药基因 (MDR1)编码的P -糖蛋白 (Pgp ,P - 170 )是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一。本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响。反义寡聚脱氧核苷酸 (MDR1-AS)通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3/mdr1细胞 ,将正义寡聚脱氧核苷酸 (MDR1-S)同样导入细胞为对照。经以脂质体介导的 1.6 μmol/LMDR1-AS转染后 ,Pgp阳性的细胞百分数从 10 0 %降至 48.7% ,经过 16和 10 μmol/L两个浓度的单纯MDR1-AS转染后 ,Pgp阳性细胞的百分数也从 10 0 %分别降至 5 2 .6 %和 86 .7%。同时 ,利用RT -PCR检测了MDR1mRNA水平的变化 ,以β -actin作为内对照 ,发现MDR1mRNA水平在MDR1-AS转染后降至内对照的 6 0 %左右 ,而用MDR1-S转染的细胞与SKOV3/mdr1细胞比无明显变化。所以导入MDR1基因硫代反义寡聚脱氧核苷酸可以部分抑制SKOV3/mdr1细胞中MDR1基因的表达。

关键词：反义寡核苷酸卵巢癌多药耐药基因治疗基因表达

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不同造模方法的病毒性面神经麻痹动物模型比较

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第4期21卷 169-171页

作者：刘稳高志强神平全世明冯国栋查洋张彦东中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院耳鼻咽喉科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所病理学系

目的：比较不同方法建立的单纯疱疹病毒1型（HSV-1）感染性面神经麻痹（面瘫）的动物模型，以选择发病率高、较稳定的造模方法。方法：Balb／c小鼠120只，分为4组，每组30只。A组：切断右侧面神经耳后支，于神经断端接种25plHSV-1病毒液... 详细信息

目的：比较不同方法建立的单纯疱疹病毒1型（HSV-1）感染性面神经麻痹（面瘫）的动物模型，以选择发病率高、较稳定的造模方法。方法：Balb／c小鼠120只，分为4组，每组30只。A组：切断右侧面神经耳后支，于神经断端接种25plHSV-1病毒液；B组：右侧耳廓背面皮肤划痕接种25ul HSV-1病毒液；C组：右侧耳廓背面皮下注射25ul HSV-1病毒液；D组：右侧耳后皮下注射100ul HSV-1病毒液。观察小鼠双侧面部运动的对称性和全身情况，比较各组间面瘫发生率和动物死亡率。对面瘫鼠行颞骨连续切片苏木精-伊红染色。结果：A组13只出现右侧面瘫（43．33％），持续3～7d恢复，死亡0只；B组6只出现右侧面瘫（20％），持续2～9d恢复，死亡0只；C组没有动物出现面瘫或死亡；D组1只出现右侧面瘫（3．33％），持续6d恢复，死亡12只（40％）。颞骨连续切片显示面瘫鼠右侧面神经肿胀、神经周围间隙变小，面神经横截面积／面神经管横截面积的比值变大。结论：经面神经耳后支接种HSV-1可以引起小鼠暂时性面瘫，和其他接种方法相比，面瘫发生率较高，死亡少，造模可靠。

关键词：疱疹病毒1型,人面神经麻痹疾病模型,动物

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基质金属蛋白酶及其组织抑制物预测葡萄胎恶变的研究

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中华妇产科杂志 2000年第9期35卷 547-550页

作者：李志英向阳戴理程国钧张德永杨秀玉宋鸿钊湖北三峡学院医学院妇产科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科 100730 中国医学科学院基础医学研究所遗传室解放军总医院妇产科

目的　探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9、MMP 2 )及其组织抑制物 (TIMP 1、TIMP 2 )表达量与葡萄胎恶变的相关性。方法　提取组织总RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测2 2例正常早期妊娠绒毛及 37例葡萄胎组织中MMP 9、MMP 2、TI... 详细信息

目的　探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9、MMP 2 )及其组织抑制物 (TIMP 1、TIMP 2 )表达量与葡萄胎恶变的相关性。方法　提取组织总RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测2 2例正常早期妊娠绒毛及 37例葡萄胎组织中MMP 9、MMP 2、TIMP 1、TIMP 2基因表达量。结果　MMP 9、MMP 2、TIMP 1及TIMP 2在葡萄胎组织及正常绒毛组织中的表达量差异无显著性 (P >0 .0 5 )。但MMP 9/TIMP 1比值在发生恶变的葡萄胎组织明显高于未发生恶变的葡萄胎组织及正常绒毛组织(P <0 .0 1) ;而MMP 2 /TIMP 2在各组织中则无明显差异。结论　MMP 9/TIMP 1与葡萄胎恶变有关 ;MMP 9与TIMP

关键词：金属蛋白酶类金属蛋白酶类组织抑制剂葡萄胎

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