检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2004年第19期84卷 1635-1641页

作者：马宏刘彦信刘士廉许瑞安郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 香港大学分子生物学研究所

目的　研究腺相关病毒 (AAV)介导的重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL114 2 81)在体内外的表达规律及其杀伤肿瘤细胞的生物学活性 ,探讨重组腺相关病毒用于肿瘤基因治疗的应用前景。方法　构建编码TRAIL胞外区 114 2 8... 详细信息

目的　研究腺相关病毒 (AAV)介导的重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL114 2 81)在体内外的表达规律及其杀伤肿瘤细胞的生物学活性 ,探讨重组腺相关病毒用于肿瘤基因治疗的应用前景。方法　构建编码TRAIL胞外区 114 2 81位氨基酸的多肽的重组腺相关病毒载体rAAV TRAIL114 2 81,转染HEK2 93人胚肾细胞 ,获得高滴度的重组病毒颗粒后 ,转导人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat、人肝癌细胞株HepG2和SMMC 772 1以及人宫颈癌细胞株HeLa等 ,并采用经C5 7BL/ 6小鼠门静脉输入、皮下注射、肌内注射、腹腔注射或口服等不同给药途径 ,研究重组腺相关病毒介导的TRAIL114 2 81蛋白在体内外的表达规律。采用实时PCR方法测定重组病毒滴度。采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)、Western印迹法和免疫组化法测定蛋白表达。采用MTT法测定重组rAAV TRAIL114 2 81杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果　成功地获得了rAAV TRAIL114 2 81重组病毒 ,其滴度为每毫升 7 5× 10 12基因组颗粒数 (Gps/ml)。重组病毒转导使TRAIL114 2 81在宿主细胞中高效表达 ,并可显著诱导Jurkat、HeLa和SMMC 772 1等肿瘤细胞凋亡 ,但不能诱导HepG2细胞凋亡。体内实验中 ,经小鼠门静脉输入重组病毒 ,可使TRAIL114 2

关键词： TRAIL 介导重组腺相关病毒表达规律重组病毒滴度体外抗肿瘤活性外源诱导杀伤

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化疗药物增强重组可溶性TRAIL抗肿瘤作用

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 524-528页

作者：王明婕刘彦信李晓玲史娟刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨化疗药物对重组可溶性TRAIL穴rsTRAIL雪抗肿瘤作用的影响及其分子机制。方法13株不同肿瘤细胞经rsTRAIL处理后,采用MTS-PMS染色法和流式细胞仪技术测定细胞凋亡率,观察肿瘤细胞对rsTRAIL的敏感性;化疗药物与rsTRAIL联合作用于... 详细信息

目的探讨化疗药物对重组可溶性TRAIL穴rsTRAIL雪抗肿瘤作用的影响及其分子机制。方法13株不同肿瘤细胞经rsTRAIL处理后,采用MTS-PMS染色法和流式细胞仪技术测定细胞凋亡率,观察肿瘤细胞对rsTRAIL的敏感性;化疗药物与rsTRAIL联合作用于敏感性不同的肿瘤细胞检测细胞敏感性的变化;免疫印迹技术分析TRAIL受体DR5蛋白表达。结果13株肿瘤细胞中约46.2%穴6/13雪的细胞株对rsTRAIL敏感;化疗药物CHX、CP和8-CA可显著提高肿瘤细胞株对rsTRAIL细胞毒作用的敏感性;8-CA和TRAIL联合作用可上调DR5的蛋白表达。结论化疗药物CHX、CP和8-CA可增强rsTRAIL的抗肿瘤作用。

关键词：化疗药物 rsTRAIL 协同作用细胞凋亡 DR5

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K562细胞向红系分化相关EST的鉴别与分析

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中国医学科学院学报 2004年第2期26卷 150-154页

作者：余佳张俊武彭瀚陈等中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的鉴别并获取与 K562细胞向红系分化相关的表达序列标签 (expressed sequence tags,EST)。方法利用改进的差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reverse transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR )方法,分析诱导前及用氯高铁血红素 (hem in)诱导 36h 后 K 562细胞的差异表达 cDNA 片段,挑选其中差异明显的cDNA 片段,经克隆、测序和基因信息学分析,挑选代表新序列或有一定功能线索的差异表达 EST 进行 Northern 印迹分析。结果获得诱导前后 K 562细胞的差异表达 cDNA 片段 60条,其中 38条表达上调,22条表达下调。对 40个差异表达明显的 cDNA 片段的生物信息学分析说明,23个 EST 与 GenBank 中已知序列有 95%以上同源性,10个为只与 dbEST 有高度同源的序列,7个未发现同源序列;进行 Northern 印迹分析的 8个差异表达 EST 中,6个 EST 的杂交结果与 DDRT-PCR 显示的差异表达状况一致。结论改进的 DDRT-PCR 方法能够较好地克服假阳性问题,这些差异表达 EST 的获得为进一步研究红系分化的分子机制和控调网络提供了一定线索。

关键词：差异显示反转录聚合酶链反应 K562细胞细胞分化表达序列标签

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染色质免疫沉淀技术及其在基因表达调控研究中的初步应用

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中国医学科学院学报 2004年第1期26卷 52-55页

作者：张勇程小款吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的验证抑癌基因表达产物p53蛋白在体内是否结合于p21WAF1/CIP1基因的启动子区,并检测p53蛋白对热休克蛋白hsp90β基因启动子区的结合情况。方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)及PCR技术检测特异基因调节序列,Western印迹分析p53蛋白。结果... 详细信息

目的验证抑癌基因表达产物p53蛋白在体内是否结合于p21WAF1/CIP1基因的启动子区,并检测p53蛋白对热休克蛋白hsp90β基因启动子区的结合情况。方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)及PCR技术检测特异基因调节序列,Western印迹分析p53蛋白。结果在p53抗体免疫沉淀的DNA片段中含有p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区p53蛋白结合序列,免疫沉淀样品中含有p53蛋白。结论p53蛋白在体内结合于p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区,参与两基因的表达调控。

关键词：染色质免疫沉淀 hsp90β p53 p21^WAF1/CIP1

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hsp90α基因在染色质模板上的热诱导转录

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 533-536页

作者：李兆勇代辉杨珺张业吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在体外将带有hsp90α基因启动子的报告基因质粒pBLCAT3α1组装为染色质模板,用于研究hsp90α基因的热诱导转录。方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因... 详细信息

目的在体外将带有hsp90α基因启动子的报告基因质粒pBLCAT3α1组装为染色质模板,用于研究hsp90α基因的热诱导转录。方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因的转录活性。结果优化了热休克处理的HeLa全细胞抽提物在基因转录活性研究中的实验条件:用体外重组表达的染色质组装相关因子与核心组蛋白在体外与hsp90α基因启动子质粒组装成染色质;证明染色质模板的hsp90α基因体外转录水平低于裸露DNA模板,而其热诱导效率显著高于对照组。结论在体外组装的染色质模板具有阻遏hsp90α基因转录的活性,但明显提高了该基因的热诱导表达效率。

关键词：全细胞抽提物体外转录 RT-PCR 染色质组装

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人胎脑中hSNF5结合蛋白的筛选、克隆及分析

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 529-532页

作者：张怡杨珺吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定... 详细信息

目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定核苷酸序列,计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域。结果获得9个阳性克隆。DNA序列分析及同源性比较表明,1个克隆的序列与推导蛋白FLJ20643羧基端的mRNA同源性高达97%,4个克隆与GenBank中可编码蛋白的序列有较高的同源性,其他4个克隆编码的氨基酸顺序与GenBank中的已知序列无同源性。结论在人胎脑cDNA文库中克隆到hSNF5的结合蛋白,这些蛋白质可能通过hSNF5募集染色质重塑复合物以调节其靶基因的转录活性熏及其参与的细胞功能。

关键词： hSNF5 酵母双杂交体系基因调控

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BTB/POZ结构域蛋白GRP对热休克中hsp900α基因表达的增强作用

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中国医学科学院学报 2004年第4期26卷 392-395页

作者：陈永军莫志成张旌张业吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨人BTB/POZ结构域GAGA元件结合相关蛋白(GRP)在hsp90α基因表达中的作用。方法用正义或反义GRP真核表达质粒或空载体,分别与装有hsp90α基因启动子(-1756-+37)的pREP4 episomalvector质粒和对照质粒pMCAT共转染Jurkat细胞,提取... 详细信息

目的探讨人BTB/POZ结构域GAGA元件结合相关蛋白(GRP)在hsp90α基因表达中的作用。方法用正义或反义GRP真核表达质粒或空载体,分别与装有hsp90α基因启动子(-1756-+37)的pREP4 episomalvector质粒和对照质粒pMCAT共转染Jurkat细胞,提取总RNA,用竞争性半定量RT-PCR测定hsp90α-氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因相对启动子活性。结果热休克时,GRP明显促进pREP4 episomal vector质粒上hsp90α-CAT报告基因启动子活性。结论 GRP可能通过参与染色质动态调整促进pREP4 episomal vector质粒上hsp900α CAT的表达。

关键词： GAGA元件结合相关蛋白 pREP4 episomal vector hsp90a

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肿瘤抑制剂GA对SH-SY5Y细胞凋亡的影响及分子机制研究

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基础医学与临床 2004年第4期24卷 380-384,F003页

作者：沈金花张业吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,... 详细信息

为了探讨HSP90特异的功能抑制剂geldanamycin(GA)能否用于神经母细胞瘤的临床治疗 ,通过检测未分化的和全反式维甲酸 (RA)诱导分化的神经母细胞瘤SH SY5Y细胞在不同浓度GA处理后的细胞存活率 ,发现GA呈剂量依赖性诱导SH SY5Y细胞凋亡 ,但是分化细胞对同样剂量的GA不是很敏感 [细胞存活率依次为 (82 0±6 0 ) %比较 (6 5 0± 3 0 ) % ,P <0 0 2 ;(6 7 9± 3 1) %比较 (4 3 4± 3 9) % ,P <0 0 3;(4 3± 0 8) %比较 (0 4±0 1) % ,P <0 0 5 ]。Western印迹分析和免疫荧光实验显示 ,GA能抑制细胞中c Jun和c Fos的表达 ,并且GA剂量越高 ,其抑制越明显 ;同时GA也诱导了p5 3的核聚集。与未分化细胞相比 ,在相同剂量GA处理后分化细胞中c Jun和c Fos的表达均比未分化细胞略高 ;但是分化细胞中p5 3的核聚集却不如前者明显。提示未分化细胞对同样剂量的GA比分化细胞更敏感 ,可能与分化细胞能抵抗GA引起的c Jun、c Fos的降低以及p5 3的核聚集有关。

关键词： c-Jun c-Fos 凋亡 SH-SY5Y细胞剂量肿瘤抑制神经母细胞瘤分化细胞 HSP90 免疫荧光实验

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精神分裂症遗传易感性研究进展

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基础医学与临床 2004年第5期24卷 497-503页

作者：许琪中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

精神分裂症是人类最常见的精神疾患之一 ,属于复杂的多基因遗传性疾病。随着分子生物学技术和遗传学数据分析方法的进步 ,精神分裂症易感基因方面的研究也取得了一定的进展。本文就近年来国际上关于精神分裂症遗传易感性研究的一些成果... 详细信息

精神分裂症是人类最常见的精神疾患之一 ,属于复杂的多基因遗传性疾病。随着分子生物学技术和遗传学数据分析方法的进步 ,精神分裂症易感基因方面的研究也取得了一定的进展。本文就近年来国际上关于精神分裂症遗传易感性研究的一些成果进行综述 ,主要内容包括 :(1)精神分裂症分子遗传学研究的基本策略与方法 ;(2 )精神分裂症易感基因的全基因组扫描研究结果 ;(3)依据精神分裂症发病的三大假说 ,进行的候选基因研究的部分结果 ;(4 )采用新型多位点联合作用分析方法。

关键词：精神分裂症遗传易感性研究进展分子生物学技术遗传学数据

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人造血增效因子在大肠杆菌中的表达及其生物学作用

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中华血液学杂志 2004年第11期25卷 666-670页

作者：齐春梅杨克恭陈松森张艳丽邓艳春苏林王亚栋罗丝刘长征罗庆良熊国林中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 军事医学科学院放射医学研究所

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3... 详细信息

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达 ,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性。用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成。选用恒河猴 8只 ,随机分为两组 ,每组4只 :一组为单次皮下注射重组hSCF 5 0 0 μg/kg ,另一组为皮下注射rhG CSF 10 μg·kg-1·d-14d后 ,单次注射rhHSF 5 0 0 μg/kg。观察恒河猴外周血CD34+ 细胞、CFU GM数目以及血常规。结果　测序证实合成的hHSF序列与设计一致 ,构建的重组表达载体 pET30a hHSF在E .coli中获高效表达 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。目的蛋白纯度达 95 %以上 ,N端前 10个氨基酸序列分析结果与预期一致 ;相对分子质量为 75 4 0 ;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致。恒河猴实验结果表明 ,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+ 细胞、CFU GM和中性粒细胞数分别在用药后 3h ,1h和 4 5min达高峰 ,动员幅度分别为用药前检测值的 16 .3倍、1.9?

关键词：动员恒河猴外周血 CFU-GM 中性粒细胞 CD34^+细胞人造血高效表达 E.coli 重叠PCR

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