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第十届全国免疫学学术大会

作者：滕达陈慧张建民何维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的 :通过分析类风湿性关节炎(RA)患者外周血γδT细胞亚型、比例、及功能,同时检测RA患者血浆中特征性自身抗体及前期鉴定的γδT细胞识别的自身免疫病相关配体CCT6的含量,总结与疾病相关的γδT细胞的特征,为阐明γδT细胞在RA中发... 详细信息

目的 :通过分析类风湿性关节炎(RA)患者外周血γδT细胞亚型、比例、及功能,同时检测RA患者血浆中特征性自身抗体及前期鉴定的γδT细胞识别的自身免疫病相关配体CCT6的含量,总结与疾病相关的γδT细胞的特征,为阐明γδT细胞在RA中发挥的作用及相关机制奠定基础。方法 :利用ELISA法检测RA患者血浆中特征性的自身抗体及CCT6的含量。利用流式细胞技术对RA患者及与之年龄、性别相互匹配的健康对照外周血γδT细胞的相关亚型、比例及分泌细胞因子的功能进行分析。并将γδT细胞的相关检测指标与RA患者血浆中特征性的自身抗体及CCT6的含量做相关性分析,验证其与RA疾病发生发展的作用。结果 :RA患者外周血γδT细胞与健康对照相比,δ1亚群降低,δ2亚群增加,且RA患者分泌IL-17的γδT细胞比例显著降低,分泌IFN-γ的γδT细胞比例显著升高,导致IL-17+γδT/IFN-γ+γδT在患者中显著降低。而RA患者血浆CCT6的浓度显著高于健康对照。相关性分析结果显示,RA患者中IFN-γ+γδT细胞比例与血浆中抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)和类风湿因子(RF)的浓度呈显著相关性,CD27+γδT细胞比例与RF浓度也呈显著相关性,Vδ2γδT细胞在γδT细胞中的比例与血浆CCT6的浓度呈显著负相关。结论 :RA病人外周血γδT细胞相关亚型、比例及其功能发生了与疾病相关的特异性变化,而这种变化与患者血浆中部分特征性的自身抗体呈显著相关,可以作为疾病发展的监测指标之一。γδT细胞识别的自身免疫性疾病的相关抗原CCT6与γδT细胞相互作用的进一步机制研究,能为阐明γδT细胞在自身免疫病中发挥作用的机制奠定基础。

关键词： γδT细胞类风湿性关节炎 CCT6

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类风湿性关节炎患者中γδT细胞疾病相关特征研究

类风湿性关节炎患者中γδT细胞疾病相关特征研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：滕达陈慧张建民何维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的：通过分析类风湿性关节炎(RA)患者外周血γδT细胞亚型、比例、及功能，同时检测RA患者血浆中特征性自身抗体及前期鉴定的γδT细胞识别的自身免疫病相关配体CCT6的含量，总结与疾病相关的γδT细胞的特征，为阐明γδT细胞在RA中... 详细信息

目的：通过分析类风湿性关节炎(RA)患者外周血γδT细胞亚型、比例、及功能，同时检测RA患者血浆中特征性自身抗体及前期鉴定的γδT细胞识别的自身免疫病相关配体CCT6的含量，总结与疾病相关的γδT细胞的特征，为阐明γδT细胞在RA中发挥的作用及相关机制奠定基础。

关键词： γδT细胞类风湿性关节炎 CCT6

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新疆维吾尔族人自然长寿与HLA-DRB,ACE,ApoE基因多态性分析

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北京医学 2014年第7期36卷 525-529页

作者：热米拉.巴力吐尔洪.吐尔逊陈凤辉程祖亨邱长春玛依拉.吾甫尔新疆医科大学第一附属医院综合心脏内科 830054 新疆医科大学第一附属医院神经内科 830054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：探讨人类白细胞抗原（human leukocyte antigen, HLA）基因、血管紧张素转换酶（An-giotensin-Coverting Enzyme, ACE）基因及载脂蛋白E（Apolipoprotein E, ApoE）基因多态性与新疆维吾尔族自然长寿的关系。方法将研究对象根据... 详细信息

目的：探讨人类白细胞抗原（human leukocyte antigen, HLA）基因、血管紧张素转换酶（An-giotensin-Coverting Enzyme, ACE）基因及载脂蛋白E（Apolipoprotein E, ApoE）基因多态性与新疆维吾尔族自然长寿的关系。方法将研究对象根据年龄分为长寿组和老年组，同时选择同一地区无血缘关系已自然死亡（61-73岁）者为对照组。分别应用聚合酶链反应-序列特异引物法（PCR-SSP），单链构象多态性（SSCP）分析和直接测序技术对长寿组、老年组、对照组进行基因分型。结果长寿组HLA-DR1，DR6（14）基因频率较对照组升高（P〈0.05），与老年组比较差异无统计学意义；长寿组HLA-DR9基因频率较对照组降低（P〈0.05），较老年组显著降低（P〈0.01）；长寿组HLA-DR51基因频率较老年组降低（P〈0.05），与对照组比较差异无统计学意义。在ACE基因分析中，长寿组D/D基因型频率较对照组显著升高（P〈0.01），而较老年组升高（P〈0.05），另外，长寿组D等位基因频率也高于对照组（P〈0.05），与老年组比较差异无统计学意义；另外，3组间DI，Ⅱ基因型比较未见明显差异。 ApoE基因分析中，长寿组ε3/3基因型频率较老年组升高（P〈0.05），与对照组比较差异无统计学意义；长寿组ε4/3基因型频率较对照组明显降低（P〈0.001），较老年组也显著降低（P〈0.01）；其余基因型比较差异无统计学意义。结论 HLA-DRB基因的DR1,DR6（14）等位基因，ApoE的ε4/3基因型及ACE基因的DD基因型，D等位基因对长寿可能有保护作用，是长寿有利基因；HLA-DRB基因的DR9基因型可能不利于长寿，是长寿的危险因素。

关键词：人类白细胞抗原血管紧张素转换酶载脂蛋白E 新疆维吾尔族自然长寿

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通过核质转运调节细胞凋亡的蛋白质

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第10期25卷 883-888页

作者：李竹石许彩民中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

凋亡,也称Ⅰ型程序性细胞死亡,是细胞在面临严重威胁时发起的保护性主动死亡机制.凋亡对于个体的生长发育及各种生理功能具有不可或缺的作用.作为涉及整个细胞的复杂过程,凋亡的顺利进行有赖于众多凋亡相关因子的协调合作与精确调控.细... 详细信息

凋亡,也称Ⅰ型程序性细胞死亡,是细胞在面临严重威胁时发起的保护性主动死亡机制.凋亡对于个体的生长发育及各种生理功能具有不可或缺的作用.作为涉及整个细胞的复杂过程,凋亡的顺利进行有赖于众多凋亡相关因子的协调合作与精确调控.细胞受到凋亡刺激后,核内的某些蛋白质转运出核,将凋亡信号传递到核外,胞质内的多种蛋白质则转运入核,在细胞核这一信息整合的大本营直接发挥作用.这种双向交流机制在胞核与胞质间建立起密切的联系,同时使得相关蛋白质在特定场所发挥促进或抑制凋亡的作用,确保凋亡信号及时、通畅、有序地传递.因此,蛋白质的核质转运作为介导胞核与胞质物质交换、信号交流的关键机制,在凋亡过程中就显得尤为重要.本文主要就核质转运的机制、通过核质转运调节凋亡的蛋白质及其作用机理作一综述.

关键词：凋亡核质转运核孔复合体

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NSPc1相互作用蛋白的筛查及其与组蛋白乙酰化酶HBO1相互作用的验证

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基础医学与临床 2008年第6期28卷 529-534页

作者：龚燕华石磊吴旭东强伯勤彭小忠袁建刚中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1... 详细信息

目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1蛋白的全长、N端和C端作为诱饵筛查人3月胎脑cDNA文库,发现N端诱饵可以与组蛋白乙酰化转移酶HBO1相互作用,该相互作用在体内外实验中都得到了验证。结论组蛋白乙酰化酶HBO1是NSPc1的相互作用蛋白之一,该相互作用可能参与NSPc1对靶基因转录的表观抑制活性的发挥。

关键词：多梳家族神经系统多梳蛋白1 酵母双杂交蛋白质相互作用组蛋白乙酰化酶

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人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系

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基础医学与临床 2008年第2期28卷 144-148页

作者：罗丝杨克恭刘长征邓艳春苏林孔燕陈松森中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在***21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯... 详细信息

目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在***21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。

关键词：人造血增效因子 C末端缺失变异体趋化活性

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小鼠胸腺雄激素受体的定位及其与新分子Rwdd1的关系

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基础医学与临床 2008年第7期28卷 696-701页

作者：陈岱康宁汤龙刘庆丰胡愉崔莲仙何维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究雄激素受体(AR)在胸腺萎缩中的作用机制。方法用免疫组化和RT-PCR观察AR在小鼠胸腺内的分布;用刀豆蛋白A(ConA)诱导胸腺细胞增殖,观察睾酮对细胞增殖的影响;构建AR和Rwdd1的真核表达载体pcDNA3.1-AR和pcDNA3.1-Rwdd1-V5,共转染2... 详细信息

目的研究雄激素受体(AR)在胸腺萎缩中的作用机制。方法用免疫组化和RT-PCR观察AR在小鼠胸腺内的分布;用刀豆蛋白A(ConA)诱导胸腺细胞增殖,观察睾酮对细胞增殖的影响;构建AR和Rwdd1的真核表达载体pcDNA3.1-AR和pcDNA3.1-Rwdd1-V5,共转染293T细胞,通过免疫共沉淀(CoIP)法观察二者之间在细胞内是否存在相互作用。结果AR广泛分布在胸腺皮质和髓质,且主要定位于胞核。在不同胸腺细胞亚群中均有AR表达,其中以CD4-CD8-(DN)细胞表达水平最高。3种胸腺上皮细胞系中仅皮质来源的427.1细胞系存在AR表达。胸腺细胞中存在功能性AR。AR与Rwdd1之间不存在直接相互作用。结论小鼠胸腺细胞中存在AR的表达,目前尚不能证明AR与Rwdd1存在直接的相互作用。

关键词：雄激素受体胸腺 Rwdd1

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糖皮质激素受体基因ER22/23EK多态性与新疆维吾尔族人自然长寿的关系及与汉族人群的比较

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基础医学与临床 2008年第2期28卷 113-118页

作者：姜文锡程祖亨牛文全邱长春新疆医科大学新疆乌鲁木齐830054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨糖皮质激素受体基因（GR）第2外显子ER22／23EK多态性与维吾尔族人自然长寿的关系及种族差异。方法选择新疆维吾尔族191名年龄〉90岁的健康个体为长寿组，另选53名年龄（65-70岁）、性别、地域相匹配已自然死亡的正常个体为对... 详细信息

目的探讨糖皮质激素受体基因（GR）第2外显子ER22／23EK多态性与维吾尔族人自然长寿的关系及种族差异。方法选择新疆维吾尔族191名年龄〉90岁的健康个体为长寿组，另选53名年龄（65-70岁）、性别、地域相匹配已自然死亡的正常个体为对照组；同时随机调查移居新疆和田地区30年以上的（65-70岁）汉族老年人82人。采用序列特异引物PCR（PCR-SSP）、PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RELP）和PCR-直接测序（PCR-sequeneing）等技术对GR基因进行分型。结果191名自然长寿老人和53名对照组中，ER22／23EK的等位基因和基因型频率无差异。新疆汉族老人GR基因ER22／23EK携带者显著高于维吾尔族老人，其WM、MM基因型（P〈0．001）和M等位基因频率（P〈0．0001）均显著高于维吾尔族老人，而册基因型和形等位基因频率则显著降低。结论ER22／23EK的等位基因和基因型频率可能与维吾尔族自然长寿无关联，但有显著的种族差异。

关键词：糖皮质激素受体基因自然长寿维吾尔族汉族

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人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定

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免疫学杂志 2008年第6期24卷 684-687页

作者：刘惠荣吴刚周冰申乐薛红陈保生内蒙古农业大学生物工程学院生物科学教研室呼和浩特010018 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京市药品不良反应监测中心北京100024

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合。结论成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具。

关键词：磷脂转移蛋白原核表达抗体

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EGFR与COX-2联合阻断对食管鳞状细胞癌作用的体外实验

EGFR与COX-2联合阻断对食管鳞状细胞癌作用的体外实验

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第九届国际治疗内镜和消化疾病学术会议

作者：叶菲张澍田孟欣颖宗晔朱圣韬李鹏周巧直吕富靖许彩民首都医科大学附属友谊医院胃肠肝胆科首都医科大学消化病学系北京消化疾病中心中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究院医学分子生物学国家重点实验室

背景和目的食管癌是世界最常见的恶性肿瘤之一,我国以食管鳞状细胞癌(ESCC)为主。虽然手术方法和诊断水平不断提高,食管鳞状细胞癌的5年生存率没有明显改善。靶向治疗是在分子生物学理论基础上出现的全新治疗模式。表皮生长因子受体(EG... 详细信息

背景和目的食管癌是世界最常见的恶性肿瘤之一,我国以食管鳞状细胞癌(ESCC)为主。虽然手术方法和诊断水平不断提高,食管鳞状细胞癌的5年生存率没有明显改善。靶向治疗是在分子生物学理论基础上出现的全新治疗模式。表皮生长因子受体(EGFR)与环氧化酶-2(COX-2)是最近研究较多的分子靶向治疗的靶点,两者之间存在正反馈。目前多靶点联合阻断在食管癌治疗中的效果和可行性尚不清楚。本文结合国内鳞状细胞癌发病率高的实际情况,对EGFR与COX-2在食管鳞状细胞癌中的联合阻断做一初步探讨。

关键词：食管鳞状细胞癌增殖细胞周期表皮生长因子环氧化酶-2

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