检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2005年第8期32卷 781-787页

作者：李庆华庞天翔韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

RNA结合蛋白Sam68是细胞有丝分裂期Src酪氨酸磷酸化的靶蛋白.尽管确切机制尚不清楚,一些人还是认为Sam68可通过调控RNA的代谢参与细胞周期调控.利用基因打靶技术,在DT40细胞分离出Sam68基因缺失的细胞系.利用该细胞系,进行Sam68的功能解... 详细信息

RNA结合蛋白Sam68是细胞有丝分裂期Src酪氨酸磷酸化的靶蛋白.尽管确切机制尚不清楚,一些人还是认为Sam68可通过调控RNA的代谢参与细胞周期调控.利用基因打靶技术,在DT40细胞分离出Sam68基因缺失的细胞系.利用该细胞系,进行Sam68的功能解析.与野生型细胞系相比,Sam68基因缺失细胞表现出明显的生长速度迟缓.通过细胞周期研究揭示,这些细胞生长速度延迟是由于细胞周期中的G2/M期延长.因为参与细胞周期G2/M期调控的周期因子Cdc2激酶的活性没有改变,所以提示Sam68不依赖于Cdc2激酶的活性参与细胞周期中G2/M期调控.

关键词： Sam68 RNA结合蛋白基因打靶细胞周期

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基因工程抗体的设计和应用

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中国药学杂志 2002年第4期37卷 245-248页

作者：郑梦杰杨纯正中国医学科学院-中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的　综述基因工程抗体的研究进展 ,为此领域的研究提供参考。方法　根据国内外文献 ,结合作者近年的研究 ,较全面地介绍基因工程抗体的各种设计思路 ,总结各种设计方法的特点 ,并分析基因工程抗体的临床应用现状。结果和结论　基因工... 详细信息

目的　综述基因工程抗体的研究进展 ,为此领域的研究提供参考。方法　根据国内外文献 ,结合作者近年的研究 ,较全面地介绍基因工程抗体的各种设计思路 ,总结各种设计方法的特点 ,并分析基因工程抗体的临床应用现状。结果和结论　基因工程抗体药物的研究正方兴未艾 ,已有一批抗体药物进入临床应用。

关键词：抗体基因工程双特异抗体设计应用

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嵌合抗CD_(20)抗体Fab’片段三维结构的同源模建

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高技术通讯 2001年第12期11卷 4-8页

作者：彭晖杨纯正范冬梅郑梦杰赖增祖熊冬生朱祯平中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

分别以抗CD2 0 Fab’轻链和Fd段的氨基酸一级序列为探针 ,在PDB数据库中搜寻与其同源性高的蛋白作为参考蛋白 ,利用InsightII/MSI的同源蛋白质结构模建系统(homology)在SGI计算机图形工作站上模建轻链和Fd段的三维空间结构后 ,搭建成抗C... 详细信息

分别以抗CD2 0 Fab’轻链和Fd段的氨基酸一级序列为探针 ,在PDB数据库中搜寻与其同源性高的蛋白作为参考蛋白 ,利用InsightII/MSI的同源蛋白质结构模建系统(homology)在SGI计算机图形工作站上模建轻链和Fd段的三维空间结构后 ,搭建成抗CD2 0 嵌合抗体片段Fab’的空间构象 ,并对模建蛋白进行分子力学和分子动力学优化。对优化后的模建蛋白的合理性验证显示 ,模建蛋白的三维结构是合理而可信的。

关键词：同源建模在 CD20 抗体Fab'片段三维结构蛋白 B淋巴细胞瘤药物治疗嵌合抗体

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胰腺源间充质干细胞的分离与鉴定

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中国医学科学院学报 2002年第1期24卷 45-49,I003-I004页

作者：呼莹王秋英马丽马冠杰姜学英赵春华中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究胎儿胰腺间充质干细胞的表型和生物学性状。方法取胎龄为４～５个月水囊引产胎儿，将胰腺细胞在ＳＦ（含２％ＦＣＳ）培养基中培养。测定生长曲线、成纤维细胞集落（Ｃｏｌｏｎｙ　Ｆｏｒｍｉｎｇ　Ｕｎｉｔ－Ｆｉｂｒｏｂｌａ... 详细信息

目的研究胎儿胰腺间充质干细胞的表型和生物学性状。方法取胎龄为４～５个月水囊引产胎儿，将胰腺细胞在ＳＦ（含２％ＦＣＳ）培养基中培养。测定生长曲线、成纤维细胞集落（Ｃｏｌｏｎｙ　Ｆｏｒｍｉｎｇ　Ｕｎｉｔ－Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦＵ－Ｆ）形成实验，利用流式细胞仪对培养细胞进行表型测定，细胞周期分析，ＳＡ方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、ｖｏｎ　Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ　Ｆａｃｔｏｒ（ｖＷＦ）因子表达，体外诱导分化实验。结果从胎儿胰腺可培养出间充质干细胞，并可诱导成骨、软骨、脂肪、肌肉和神经细胞分化。结论从胎儿胰腺可分离培养出间充质干细胞，在体外有效扩增且保持其低分化状态。

关键词：胎儿胰腺间充质干细胞分离鉴定

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抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建和表达

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生物工程学报 2003年第4期19卷 444-449页

作者：高瀛岱熊冬生许元富彭晖邵晓枫杨纯正朱祯平中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

构建和表达抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和分子排阻层析鉴... 详细信息

构建和表达抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物 ;采用免疫荧光法、放射免疫分析法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。DNA序列测定结果表明 :抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体已构建成功 ,表达可溶性产物的产量达 2mg L以上 ,纯化产物中二聚体的比例达 90 % ,具有与Jurkat(CD3 + )和K5 62 A0 2细胞 (Pgp+ )结合的活性 ,与抗CD3ScFv及抗PgpScFv的亲合常数相当。成功地构建了抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并获得高效表达。

关键词：抗CD3 抗Pgp 双功能抗体构建表达肿瘤免疫疗法

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抗耐药肿瘤新药PHⅡ-7作用机制的初步研究

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中国医学科学院学报 2002年第2期24卷 134-139页

作者：谭耀红齐静刘卫军杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的测定抗耐药肿瘤新药PHⅡ-7体外抗肿瘤谱,初步研究其抗肿瘤机制。方法用MTT法测定PHⅡ-7体外抗肿瘤活性,用流式细胞仪、电子显微镜和琼脂糖凝胶电泳观察PHⅡ-7对肿瘤细胞凋亡的诱导作用,用Northern印迹分析检测PHⅡ-7对耐药相关基因m... 详细信息

目的测定抗耐药肿瘤新药PHⅡ-7体外抗肿瘤谱,初步研究其抗肿瘤机制。方法用MTT法测定PHⅡ-7体外抗肿瘤活性,用流式细胞仪、电子显微镜和琼脂糖凝胶电泳观察PHⅡ-7对肿瘤细胞凋亡的诱导作用,用Northern印迹分析检测PHⅡ-7对耐药相关基因mdr1和sorcin的影响。结果PHⅡ-7对多种人肿瘤细胞的生长有抑制作用,IC50为0.34～18.61μmol/L,更为突出的是,对于MDR类抗肿瘤药无效的多药耐药肿瘤细胞,PHⅡ-7同样具有生长抑制作用;1μg/ml的PHⅡ-7可诱导HL60、HL60/ADR细胞凋亡;PHⅡ-7可抑制K562/A02细胞中耐药相关基因的表达。结论PHⅡ-7是一种有较好前景的抗耐药肿瘤新药,其可能通过抑制耐药相关基因mdr1和sorcin的表达而提高多药耐药细胞内药物浓度,从而引起肿瘤细胞凋亡。

关键词：氧化吲哚衍生物多药耐药肿瘤细胞株凋亡 sorcin

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脐血巨核祖细胞的体外扩增

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中国医学科学院学报 2005年第2期27卷 199-204页

作者：冯义肖志坚徐世才卢士红刘斌刘津华韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的联合血小板生成素(TPO)、白细胞介素-11(IL-11)和肝素用脐血CD34+细胞定向扩增巨核祖细胞。方法采用免疫磁珠法(M ACS)分选CD34+细胞,用TPO、IL-11和肝素定向扩增巨核祖细胞,巨核祖细胞集落分析(CFU-M K)测定巨核祖细胞扩增倍数,流... 详细信息

目的联合血小板生成素(TPO)、白细胞介素-11(IL-11)和肝素用脐血CD34+细胞定向扩增巨核祖细胞。方法采用免疫磁珠法(M ACS)分选CD34+细胞,用TPO、IL-11和肝素定向扩增巨核祖细胞,巨核祖细胞集落分析(CFU-M K)测定巨核祖细胞扩增倍数,流式细胞术检测巨核祖细胞分化过程中不同细胞组群(CD34+、CD41a+、CD61+、CD34+CD41a+和CD41a+CD61+)的变化,免疫组织化学染色(CD41a)和透射电镜观察巨核细胞形态及超微结构,血小板体外活化实验及非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞功能。结果单用TPO7d时,CD34+CD41a+细胞扩增(4.0±1.7)倍;与IL-11联用后扩增到(10.5±4.8)倍;再加入肝素后扩增达(29.9±6.4)倍,TPO+IL-11+肝素组扩增倍数为TPO组、TPO+IL-11组的7.5、2.85倍,与两组相比差异均有显著性(P<0.05)。TPO+IL-11+肝素组巨核祖细胞中大集落(>50个细胞/集落)达(106.8±26.9)倍,较TPO、TPO+IL-11组均有明显增加(P<0.05)。将扩增第7天的巨核细胞静脉输注于经放射预处理的非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠,可明显加速其血小板及白细胞的恢复并提高小鼠生存率。电镜显示扩增的巨核细胞有一定的界膜发育等成熟特征,体外血小板活化实验证实,扩增的巨核细胞在体外可产生血小板。

关键词：脐血巨核祖细胞血小板生成素白细胞介素-11 肝素

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胎儿骨髓来源的Flk1^+CD34^-细胞的血液血管干细胞特性

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中国医学科学院学报 2002年第6期24卷 606-610,I001页

作者：郭虹赵智刚刘杰文陈辉树赵春华中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究骨髓基质中是否具有血液血管干细胞的特征。方法分离并培养人胎儿骨髓基质细胞(hfMSCs),FACS检测细胞的免疫表型。将此细胞接种在基底膜胶中,由血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导,免疫组化和透射... 详细信息

目的研究骨髓基质中是否具有血液血管干细胞的特征。方法分离并培养人胎儿骨髓基质细胞(hfMSCs),FACS检测细胞的免疫表型。将此细胞接种在基底膜胶中,由血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导,免疫组化和透射电镜检测血管和造血的分化形成。结果此细胞群体的典型特征是CD34阴性的成纤维样细胞99%表达Flk1(即血管内皮细胞生长因子受体2),并能形成血管样结构,而在管样结构形成的过程中诱导出CD34阳性的圆形细胞。结论Flk1+CD34-的hfMSC能向血管内皮细胞和造血细胞分化,提示其具有血液血管干细胞的特征表型。

关键词： Flkl^+CD34^-细胞骨髓基质血液血管干细胞内皮细胞流式细胞仪免疫组织化学细胞免疫表型

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钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用

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中国医学科学院学报 2006年第2期28卷 164-168页

作者：程燕红齐静熊冬生刘杰文齐淑玲潘兵杨纯正朱惠芳中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用。方法采用四唑盐(MTT)比色法测定药物敏感性,分析联合应用低剂量EBB(≤IC20)时阿霉素(ADR)对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)值及... 详细信息

目的研究钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用。方法采用四唑盐(MTT)比色法测定药物敏感性,分析联合应用低剂量EBB(≤IC20)时阿霉素(ADR)对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)值及其增敏倍数;应用流式细胞术测定EBB对细胞周期的影响,同时观察细胞内药物浓度的积累;采用逆转录—多聚酶链反应检测EBB对多药耐药基因-1(mdr1)及拓扑异构酶Ⅱb(topⅡb)mRNA表达水平的影响。结果EBB对MCF-7/ADR的多药耐药具有明显逆转作用,3、7·5μmol/L浓度的EBB可以明显提高MCF-7/ADR对ADR的敏感性,平均增敏倍数分别为50·40、89·80倍,逆转强度明显高于阳性逆转剂维拉帕米(VPL)的14·88倍(P=0·0097)。6μmol/L的EBB处理2h后,细胞内积累的P糖蛋白底物罗丹明123(Rh123)荧光强度峰值发生明显右移;同时EBB可明显增强ADR对MCF-7/ADR细胞在G2/M期的阻滞作用。6和12μmol/L的EBB处理MCF-7/ADR细胞48h后,mdr1的mRNA表达水平有一定的降低趋势,但无统计学差异;topⅡb基因表达差异亦无显著性。结论EBB对MCF-7/ADR细胞具有较强的逆转多药耐药作用,其可能的逆转机制在于增强ADR对耐药细胞在G2/M期的阻滞以及抑制P糖蛋白外排泵作用。

关键词：钙调素拮抗剂 O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺多药耐药逆转

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骨形态发生蛋白激活自身肌肉间质细胞拯救骨髓衰竭

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 272-275,I001页

作者：褚建新赵钧铭丁顺利徐世才刘蔼如王淑萍中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)激活自身肌肉间质细胞以拯救骨髓造血衰竭的作用。方法采用5-氟脲嘧啶与白消安合用诱导大鼠致死性再生障碍性贫血模型,于诱导再障前3d肌肉内植入重组人-BMP-2(rh-BMP-2),并以肌肉内植入琼脂为对照。观察血... 详细信息

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)激活自身肌肉间质细胞以拯救骨髓造血衰竭的作用。方法采用5-氟脲嘧啶与白消安合用诱导大鼠致死性再生障碍性贫血模型,于诱导再障前3d肌肉内植入重组人-BMP-2(rh-BMP-2),并以肌肉内植入琼脂为对照。观察血象、病理形态等变化以及两组再障大鼠的死亡率。同时,给正常小鼠大腿肌肉内植入rh-BMP-2,动态观察植入后局部的形态变化、形成骨及骨髓的形态特点,脾集落形成单位以及基质细胞干细胞生长因子(SCF)的表达。结果小鼠在BMP肌肉内植入1周内,在BMP周围有大量间质细胞增殖,随后形成骨及骨髓,其骨髓基质细胞的SCF表达明显高于自体骨髓;BMP植入组的再障大鼠,不仅血象与对照相比有明显改善,而且死亡率也明显下降,有56.3%大鼠存活超过3个月,其血象完全恢复正常,骨髓和脾脏的组织形态学改变也恢复正常。对照大鼠除1只存活超过3个月外(占4.3%),其余均死于急性再生障碍性贫血。结论BMP肌肉内植入可拯救骨髓造血衰竭,其机制可能与BMP诱导成年自体肌肉内存在的干细胞向造血分化有关;本研究结果为应用成体自身干细胞进行细胞治疗提供了新的途径。

关键词：骨形态发生蛋白骨髓造血衰竭间质干细胞干细胞移植

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