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第10届全国实验血液学会议

作者：孙爱红冯四洲刘斌韩忠朝中国协和医科大学中国医学科学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国协和医科大学中国医学科学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国协和医科大学中国医学科学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国协和医科大学中国医学科学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心

目的采用骨髓腔内移植(iBM)的方法移植脐血单个核细胞(MNC)到NOD/SCID小鼠的下肢胫骨骨髓腔中,观察这种方法对小鼠造血重建和免疫功能恢复的作用。方法 NOD/SCID小鼠预先经137Cs全身照射后,在4h内无菌条件下局麻后从尾静脉或骨髓腔内输... 详细信息

目的采用骨髓腔内移植(iBM)的方法移植脐血单个核细胞(MNC)到NOD/SCID小鼠的下肢胫骨骨髓腔中,观察这种方法对小鼠造血重建和免疫功能恢复的作用。方法 NOD/SCID小鼠预先经137Cs全身照射后,在4h内无菌条件下局麻后从尾静脉或骨髓腔内输注分离脐血MNC。受体小鼠24只随机分为5组:①对照组4只,骨髓腔内输注培养液;②阳性对照组(iTV)5只,尾静脉输注脐血MNCs 3×107/只;③实验Ⅰ组(iBM-1)5只,骨髓腔内输注脐血MNCs 3×106/只;④实验Ⅱ组(iBM-2)5只,骨髓腔内输注脐血MNCs 1×107/只;⑤实验Ⅲ组(iBM-3)5只,骨髓腔内输注

关键词：骨髓腔单个核细胞

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低血清条件下人脐带血间充质干细胞的分离和鉴定

低血清条件下人脐带血间充质干细胞的分离和鉴定

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第10届全国实验血液学会议

目的建立低血清条件下脐带血来源间充质干细胞(MSC)的分离、纯化方法和技术,了解脐血MSC的生物学特性。方法无菌条件下取正常足月剖腹产的肝素抗凝脐带血,取血后4小时内用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,以低血清(2％FBS)DMEM／F12培养... 详细信息

目的建立低血清条件下脐带血来源间充质干细胞(MSC)的分离、纯化方法和技术,了解脐血MSC的生物学特性。方法无菌条件下取正常足月剖腹产的肝素抗凝脐带血,取血后4小时内用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,以低血清(2％FBS)DMEM／F12培养基添加表皮生长因子 (EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)等进行培养,细胞密度106／ cm2,48～72小时后全量换液。待贴壁细胞层70～80％融合时,胰蛋白酶消化传代,观测细胞形态;流式细胞仪检测3-4代细胞表面抗原的表达:检测细胞周期、生长曲线并计算倍增时间。以β-磷

关键词：人脐带血间充质干细胞 MSC 壁细胞分离和鉴定

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反义血管内皮生长因子原位表达对白血病细胞系K562在裸鼠体内生长的影响

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中国医学科学院学报 2005年第4期27卷 495-495页

作者：刘斌何睿杨小羊冯义杨仁池卢士红韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 江西省儿童医院检验科

近年研究表明血管新生与血液肿瘤有很大的关系,其中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的作用引起广泛的关注.本研究直接注射反义VEGF重组表达载体到K562细胞移植瘤中,观察其对移植瘤的生长、血管新生、肿瘤细... 详细信息

近年研究表明血管新生与血液肿瘤有很大的关系,其中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的作用引起广泛的关注.本研究直接注射反义VEGF重组表达载体到K562细胞移植瘤中,观察其对移植瘤的生长、血管新生、肿瘤细胞凋亡的影响.……

关键词：白血病基因治疗反义核酸裸鼠

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CD133在急性白血病中的表达及其意义

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中华血液学杂志 2004年第7期25卷 401-404页

作者：周余孟恒星于珍李茜王亚非麦玉洁韩俊领邱录贵中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的　探讨CD133(AC133)在急性白血病 (AL)中的表达及其意义。方法　采用三色荧光流式细胞术测定 76例AL患者白血病细胞膜上CD133的表达 ;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法测定CD133mRNA的表达。结果　①正常对照和AL患者的C... 详细信息

目的　探讨CD133(AC133)在急性白血病 (AL)中的表达及其意义。方法　采用三色荧光流式细胞术测定 76例AL患者白血病细胞膜上CD133的表达 ;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法测定CD133mRNA的表达。结果　①正常对照和AL患者的CD133mRNA表达与CD133蛋白表达相一致 ,AL患者CD133表达水平显著高于正常对照。②AL患者CD133及CD133mRNA高表达阳性率分别为 4 2 .1%和 4 6 .1%。急性髓系白血病 (AML)M3 患者CD133均高表达阴性 ,AML和急性淋巴细胞白血病 (ALL)的CD133高表达率分别为 4 3.4 %和 38.1% ,差异无显著性。AML M4CD133高表达阳性率显著高于其它AML亚型 ,而T ALL和B ALL的CD133高表达率分别为 2 0 .0 %和 4 3.7% ,差异也无显著性。③AML患者骨髓细胞CD133表达与CD34、HLA DR显著相关 ,ALL患者骨髓细胞CD133表达与CD34无关。④CD133表达与细胞或分子遗传学异常、发病时外周血白细胞数、乳酸脱氢酶水平、多药耐药基因 (mdr1)表达及年龄等预后因素无显著相关。⑤CD133高表达阳性组完全缓解 (CR)率及总反应 (OR)率低于高表达阴性组 ,但仅有CD34/CD133共高表达阳性组CR率低于阴性组 (44 .4 %vs71.4 % ,P <0 .0 5 ) ,差异有显著性。结论　AL患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照 ;

关键词： CD133 急性白血病基因表达抗原 AL 生物学特性

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FLT3基因内部串联重复突变与急性白血病的关系及临床意义

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中华血液学杂志 2004年第7期25卷 393-396页

作者：王莉红周春林张新伟陈森王敏王建祥中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的　研究FLT3基因的内部串联重复 (internaltandemduplication ,ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义。方法　采用PCR方法分析 14 3例急性髓系白血病 (AML)、2 5例急性淋巴细胞白血病 (ALL)、2例急性杂合性白血病 (AHL)、17例骨髓... 详细信息

目的　研究FLT3基因的内部串联重复 (internaltandemduplication ,ITD)突变与急性白血病的关系及临床意义。方法　采用PCR方法分析 14 3例急性髓系白血病 (AML)、2 5例急性淋巴细胞白血病 (ALL)、2例急性杂合性白血病 (AHL)、17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 7例慢性粒细胞白血病急变期 (CML BC)患者骨髓单个核细胞中FLT3基因外显子 14和 15中ITD突变 ,分析FLT3 ITD阳性AML患者的临床特征及疗效。结果　 14 3例AML患者中 37例 (2 5 .9% )FLT3 ITD阳性 ,其中 5 3例M2 中 10例、4 0例M3 中 15例、2 0例M4中 4例、2 3例M5中 8例。在 2 5例ALL、2例AHL、17例MDS和 7例CML BC患者中未检测到FLT3 ITD突变。对其中 5例特征性突变测序结果显示 ,ITD位于外显子 14 ,长度为 2 1～ 6 0bp ,3例为单纯串联重复 ,2例同时出现插入序列 ,均未改变FLT3阅读框架。临床研究表明 ,FLT3 ITD突变在染色体核型正常患者中占有较高比例 (P <0 .0 5 ) ,FLT3 ITD阳性患者外周血白细胞数高 (P <0 .0 5 ) ,化疗后完全缓解率低 (P <0 .0 5 )。结论　FLT3 ITD突变多见于M3 、M5患者 ,为框内突变 (Inframemutation)。FLT3 ITD阳性的AML患者外周血白细胞数高。

关键词： FLT3基因基因突变急性白血病 ITD 配体

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原发性骨髓增生异常综合征患者染色体核型与IPSS危度分组:FAB与WHO分型比较

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中华血液学杂志 2004年第8期25卷 482-485页

作者：于明华刘世和邵英起郝玉书肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的　比较原发性骨髓增生异常综合征 (pMDS)患者WHO(2 0 0 1)分型和FAB分型的亚型与细胞遗传学异常及预后的相关性。方法　按FAB标准确诊并进行了染色体核型分析的 2 37例pMDS患者 ,重新进行血片和骨髓片分类计数并按WHO标准进行分型 ... 详细信息

目的　比较原发性骨髓增生异常综合征 (pMDS)患者WHO(2 0 0 1)分型和FAB分型的亚型与细胞遗传学异常及预后的相关性。方法　按FAB标准确诊并进行了染色体核型分析的 2 37例pMDS患者 ,重新进行血片和骨髓片分类计数并按WHO标准进行分型 ,对两种分型结果的染色体核型异常和国际预后积分系统 (IPSS)危度分组与各亚型的关系进行比较。结果　按FAB标准分型各亚型的染色体异常检出率及染色体异常危度分组无显著性差异 ,按WHO标准分型的难治性血细胞减少伴多系发育异常 (RCMD)患者与RA患者染色体核型异常检出率有显著性差异 (分别为 74 .4 %和 4 2 .5 % ,P <0 .0 0 1) ,IPSS预后好的染色体核型比例RA组 (6 5 .0 % )明显高于RCMD组 (2 4 .4 % )(P <0 .0 0 1) ,中等及差的染色体核型比例RCMD组 (分别为 4 8.9% ,2 6 .7% )明显高于RA组 (分别为 2 7.5 % ,7.5 % ) (P <0 .0 5 )。WHO分型与FAB分型一样 ,各亚型与IPSS危度分组有较好的相关性 ,WHO分型的RCMD低危组比例 (1.1% )较RA(10 .0 % )明显减低 (P <0 .0 5 ) ,RAEB Ⅱ高危组比例 (30 .5 % )较RAEB Ⅰ (0 )明显增高 (P <0 .0 0 1)。

关键词：原发性骨髓增生异常综合征染色体核型 IPSS FAB WHO分型细胞遗传学

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两步法从脐血CD_(34)^+细胞获得大量树突细胞的初步研究

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中华血液学杂志 2004年第2期25卷 70-73页

作者：王亚非李茜孟恒星于珍刘津华崔雯周余麦玉洁尤胜国邱录贵中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的　探索利用先扩增后诱导的“两步法”从脐血 (CB)CD34+ 细胞高效大量地获得树突细胞 (DC)。方法　免疫磁珠法从CB分选获得CD34+ 细胞 ,以干细胞因子 (SCF)、IL 3、Flt 3配体 (FL)、Tpo组合刺激 ,扩增 7d、10d和 14d(依次为Ⅰ、Ⅱ和... 详细信息

目的　探索利用先扩增后诱导的“两步法”从脐血 (CB)CD34+ 细胞高效大量地获得树突细胞 (DC)。方法　免疫磁珠法从CB分选获得CD34+ 细胞 ,以干细胞因子 (SCF)、IL 3、Flt 3配体 (FL)、Tpo组合刺激 ,扩增 7d、10d和 14d(依次为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组 )后以GM CSF +IL 4 +TNF α诱导 8d或 5d获得DC ,通过相差显微镜、电镜观察形态 ,流式细胞仪检测表型 ,混合淋巴细胞培养、ELISA法检测培养液上清IL 12含量评价其功能。结果　CBCD34+ 细胞经SCF +IL 3+FL +Tpo刺激扩增 7d、10d和 14d后细胞总数分别扩增了 (5 3.39± 2 0 .5 9)倍、(30 7.17± 119.5 9)倍和 (1117.2 5± 335 .4 9)倍。经GM CSF +IL 4 +TNF α诱导 8d后所得CD1a+ 细胞是扩增前细胞数的 (2 1.4 0± 16 .70 )倍、(14 3.2 0± 6 0 .35 )倍和(15 0 .80± 4 2 .16 )倍 ,Ⅱ、Ⅲ组明显多于Ⅰ组 (P <0 .0 5 ) ,但Ⅱ、Ⅲ组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。所得DC的形态、表型及刺激异基因T细胞增殖能力、IL 12分泌量 ,三组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。当诱导时间缩短至 5d时 ,各组DC功能均显著下降 (P <0 .0 5 )。结论　CBCD34+ 细胞扩增 7～ 10d再诱导 8d可以高效大量获得具有正常功能的DC ,而扩增时间超过 10d并不能显著增加DC产量。

关键词：两步法脐血 CD34^+细胞树突细胞免疫磁珠法流式细胞仪体外扩增

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树突细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养增强其体内外抗肿瘤活性

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中华血液学杂志 2004年第5期25卷 277-280页

作者：葛薇李长虹张伟韩钦邓为民陈磊尤胜国赵春华中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院天津300020 中国医学科学院实验血液学国家重点实验室

目的探讨与树突细胞 (DC)共培养能否增强正常人细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK)的体内外抗瘤活性。方法　分别按照常规方法从正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞 ,将NB4白血病细胞冻融物 (LCL)冲击或未冲击的DC与CIK细胞共培养 (LCL D... 详细信息

目的探讨与树突细胞 (DC)共培养能否增强正常人细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK)的体内外抗瘤活性。方法　分别按照常规方法从正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞 ,将NB4白血病细胞冻融物 (LCL)冲击或未冲击的DC与CIK细胞共培养 (LCL DC +CIK、DC +CIK) ,以CIK细胞单独培养作为对照。用流式细胞术分析细胞表型 ,酶联免疫斑点法 (ELISPOT)测定分泌IFN γ的细胞数 ,51 Cr释放实验测定体外细胞毒活性 ,同时用NB4细胞系建立荷瘤裸鼠模型研究其体内抗肿瘤活性和归巢情况。结果　在培养第 1 5天 ,LCL DC +CIK与CIK细胞单独培养相比 ,增殖速率明显提高 [(1 8.2± 2 .1 )倍vs(1 1 .6± 2 .3)倍 ,P <0 .0 5 ],CD3 + CD56+ 表达水平也明显提高 [(5 1 .0 5± 2 .6 3) %vs(30 .1 8± 1 .4 5 ) % ,P <0 .0 5 ],分泌IFN γ的细胞数量明显增高 [(86 .33± 5 .5 1 ) / 1 0 4细胞vs(4 4 .6 1± 3.0 5 ) / 1 0 4细胞 ,P <0 .0 5 ],同时LCL DC +CIK对NB4、K5 6 2、KG1a的体外细胞毒活性增强。体内实验显示与单独培养CIK细胞相比 ,LCL DC +CIK细胞共培养后 ,可明显抑制接种瘤细胞裸鼠的成瘤率 ,提高裸鼠的长期无瘤存活率 (1 0 0 %vs 6 6 .7% ,P <0 .0 5 ) ,以DiI标记的LCL DC +CIK细胞在接种后 7d内可在脾脏、淋巴结及肿瘤?

关键词：树突细胞细胞因子杀伤细胞抗肿瘤活性 DC CIK 细胞株

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不同来源的造血干/祖细胞表面归巢相关分子表达谱的比较研究

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中华血液学杂志 2004年第12期25卷 736-739页

作者：郑以州张莉王慧君韩忠朝高桥恒夫中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 东京大学医学科学研究所细胞制备研究室

目的　比较不同来源的造血干 /祖细胞表面归巢相关分子 (HRM)表达谱的差异性。方法　采用高度灵敏的四色流式细胞术检测脐血 (UCB)、动员后的外周血 (mPB)及骨髓 (BM)来源的造血干 /祖细胞表面系列HRM表达水平。结果　UCB、mPB及BM来源... 详细信息

目的　比较不同来源的造血干 /祖细胞表面归巢相关分子 (HRM)表达谱的差异性。方法　采用高度灵敏的四色流式细胞术检测脐血 (UCB)、动员后的外周血 (mPB)及骨髓 (BM)来源的造血干 /祖细胞表面系列HRM表达水平。结果　UCB、mPB及BM来源的CD34bright细胞均高度表达黏附分子CD4 4、CD11a、CD18、CD6 2L、CD31及CD4 9d ;但UCB来源的CD34bright细胞及CD34brightCD38-细胞黏附分子CD4 9e、CD4 9f、CD5 4及趋化因子受体CXCR 4的表达水平显著低于mPB及BM来源者 ;上述不同来源的造血干 /祖细胞均不表达其他趋化因子受体 ,包括CCR 1、CCR 2、CCR 3、CCR 5、CXCR 1、CX CR 2、CXCR 3及CXCR 5 ;更为有意义的是 ,只有mPB来源的CD34bright细胞表达基质金属蛋白酶MMP 2及MMP 9。CD34brightMMP 2 + 及CD34brightMMP 9+ 细胞百分率分别为 (11.4± 4 .9) %及 (2 7.6± 7.8) %。结论　UCB来源的造血干 /祖细胞低表达或不表达某些HRM ,这可能是UCB移植后造血重建延迟的原因之一。

关键词：造血干/祖细胞 CD34 归巢趋化因子受体来源 MMP-2 t细胞表达水平分子表达表达谱

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脐血间充质干细胞鉴定及其生物学特性研究

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中华血液学杂志 2004年第8期25卷 504-505页

作者：孙爱红冯四洲冯义张磊卢士红韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

脐血来源丰富,其造血干细胞增殖能力强,是造血干细胞的来源之一.但是到目前为止,国内外对脐血中间充质干细胞(MSC)的争议较大[1-5].从骨髓中分离培养的MSC,CD34表达阴性,对造血有促进作用.研究MSC与脐血造血干细胞共移植促进脐血移植后... 详细信息

脐血来源丰富,其造血干细胞增殖能力强,是造血干细胞的来源之一.但是到目前为止,国内外对脐血中间充质干细胞(MSC)的争议较大[1-5].从骨髓中分离培养的MSC,CD34表达阴性,对造血有促进作用.研究MSC与脐血造血干细胞共移植促进脐血移植后造血植入等方法成为临床脐觋血移植的热点课题.因此,我们从脐血单个核细胞(MNC)中分离培养MSC,研究其生物学特性及从表达细胞因子角度阐明其促进造血的潜在作用。

关键词：脐血充质干细胞生物学 MSC 成骨细胞细胞生长

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