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伴有t(3;5)(q25;q34)的骨髓增生异常综合征急性髓系白血病变患者的分子特征

中华血液学杂志 2006年第12期27卷 833-837页

作者：张悦邵英起薛永权王一张美荣刘旭平郑以州肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 苏州大学第一附属医院江苏省血液研究所中山大学肿瘤防治中心

目的研究t(3;5)(q25;q34)的分子特征。方法R显带染色体核型分析和染色体涂染分析确定t(3;5)(q25;q34)存在。RT-PCR法检测患者NPM-MLF1融合基因、MLF1基因表达。PCR联合序列分析检测NPM基因突变。实时定量RT-PCR(Real-time PCR)检测Evi-1... 详细信息

目的研究t(3;5)(q25;q34)的分子特征。方法R显带染色体核型分析和染色体涂染分析确定t(3;5)(q25;q34)存在。RT-PCR法检测患者NPM-MLF1融合基因、MLF1基因表达。PCR联合序列分析检测NPM基因突变。实时定量RT-PCR(Real-time PCR)检测Evi-1,MDS1／Evi-1表达。免疫组化染色确定MLF1和NPM-MLF1蛋白细胞定位分布。Western blot法检测bcl-2蛋白表达。结果染色体核型分析和涂染分析均证实存在染色体t(3;5)(q25;q34),NPM-MLF1融合基因阳性,经诱导治疗获得完全缓解后转为阴性。患者白血病细胞仅表达MLF1基因非编码蛋白剪接体,不表达Evi-1基因,弱表达MDS1／Evi-1。无NPM基因突变,未检出bcl-2蛋白表达。MLF1蛋白定位于细胞质,而NPM-MLF1则主要定位于胞核。结论t(3;5)(q25;q34)是髓系肿瘤的一种少见的染色体易位,该染色体易位导致形成NPM-MLF1融合基因是其发病的分子学基础。

关键词：染色体畸变融合蛋白类 NPM-MLF1 白血病髓系急性骨髓增生异常综合征

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抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体在小鼠体内性质的研究

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天津医药 2006年第9期34卷 625-627页

作者：秦岚赵艳津高瀛岱杨铭苏晔吕晶丽邵梦麟熊冬生杨纯正天津市第一中心医院 300192 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的:研究抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体的体内作用。方法:125I标记抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体采用氯胺T法,并采用昆明鼠和人K562耐药裸鼠移植瘤模型分别测定该微型双功能抗体在小鼠体内的药代动力学和体内组织分布;采用人K562耐药及敏感... 详细信息

目的:研究抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体的体内作用。方法:125I标记抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体采用氯胺T法,并采用昆明鼠和人K562耐药裸鼠移植瘤模型分别测定该微型双功能抗体在小鼠体内的药代动力学和体内组织分布;采用人K562耐药及敏感裸鼠移植瘤模型测定该微型双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性及其不良反应。结果:抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体在昆明鼠体内的半衰期为2h;尾静脉注射抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体6h后,其在肿瘤部位的分布高于其他组织,在12h和24h时,其在肿瘤与血液分布的比率分别为2.69和8.09;抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体能介导人T细胞有效杀伤表达Pgp抗原的K562耐药细胞。结论:抗Pgp/抗CD3微型双功能抗体能在裸鼠皮下人白血病细胞移植瘤部位富集,并能有效地抑制耐药白血病移植瘤的生长,无明显的不良反应。

关键词： P糖蛋白抗原,CD3抗体小鼠

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造血干细胞联合骨髓间充质干细胞移植实验效果观察

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郑州大学学报（医学版） 2006年第5期41卷 873-875页

作者：汪萍呼莹姜学英马冠杰宋永平赵春华中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室中美合作实验室河南省血液病研究所郑州450008 河南省肿瘤医院

目的：对骨髓问充质干细胞（MSC）在造血干细胞移植后造血重建中的作用进行探讨。方法：分离培养水囊引产4～5个月龄胎儿来源的骨髓MSC和脐血CD34^＋造血干／祖细胞（HSC），作为供体细胞。23只重症联合免疫缺陷（scm）小鼠作为受体，... 详细信息

目的：对骨髓问充质干细胞（MSC）在造血干细胞移植后造血重建中的作用进行探讨。方法：分离培养水囊引产4～5个月龄胎儿来源的骨髓MSC和脐血CD34^＋造血干／祖细胞（HSC），作为供体细胞。23只重症联合免疫缺陷（scm）小鼠作为受体，随机分成4组，^137Cs全身照射350cGy后，在4h内从尾静脉输入供体细胞。①阴性对照组：5只，不输入任何细胞。②阳性对照组：6只，单纯输入HSC5×10^6ml^-1。③实验Ⅰ组：6只，输入HSC5×10^6ml^-1和MSC5×10^6ml^-1。④实验Ⅱ组：6只，输入HSC5×10^6ml^-1和MSC5×10^6ml^-1输注后观察各组小鼠的存活情况；每周计数外周血单个核细胞（MNC）总数；移植后第7周，PCR检测外周血人体细胞DNA，并用流式细胞仪测定供体骨髓人源细胞嵌合比例。结果：阴性和阳性对照组小鼠均于10d内死亡，骨髓病理切片提示小鼠死于骨髓衰竭。实验Ⅰ、Ⅱ组小鼠均保持良好的生存状态，皮肤黏膜无溃烂、出血，毛发无缺损。实验Ⅰ、Ⅱ组外周血象逐渐回升，第3周，实验Ⅱ组外周血MNC数量（2．63±0．32）×10^9L^-1，高于实验Ⅰ组的（1．33±0．21）×10^9L^-1（P〈0．01），第5周即恢复正常水平。第7周，实验Ⅰ、Ⅱ组小鼠外周血均检测出供体细胞；实验Ⅱ组人源细胞嵌合比例为（7．41±0．79）％，高于实验Ⅰ组（5．11±0．07）％（P〈0．05）。结论：SCID小鼠致死剂量照射后．联合输入HSC和MSC可明显促进造血干细胞移植后造血重建，且不增加移植物抗宿主病的发生率。

关键词：骨髓间充质干细胞小鼠重症联合免疫缺陷造血重建嵌合

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脐带血干细胞的基础与应用研究

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生命科学 2006年第4期18卷 323-327页

作者：顾东生刘斌韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

作为造血干/祖细胞(hematopoieticstemcells/hematopoieticprogenitorcells,HSCs/HPCs)的另一来源,脐带血已经应用于临床治疗多种恶性和非恶性疾病。脐带血中HSCs/HPCs的质与量是决定其临床应用效果的最重要因素。同时,脐带血中还存在... 详细信息

作为造血干/祖细胞(hematopoieticstemcells/hematopoieticprogenitorcells,HSCs/HPCs)的另一来源,脐带血已经应用于临床治疗多种恶性和非恶性疾病。脐带血中HSCs/HPCs的质与量是决定其临床应用效果的最重要因素。同时,脐带血中还存在多种非造血的干细胞和前体细胞,如间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)、内皮前体细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)和非限制性体干细胞(unrestrictedsomaticstemcells,USSCs)等,这些细胞可能会在未来的细胞治疗和再生医学中发挥重要作用。本综述还讨论了脐带血的临床应用及HSCs/HPCs的体外扩增、增加HSCs归巢和再植能力等提高其临床应用能力的相关研究。

关键词：脐带血造血干细胞移植

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胚胎发育相关基因精子转录本在白血病细胞系中的表达及其调节

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白血病．淋巴瘤 2006年第1期15卷 1-3,9页

作者：安莉莉马小彤石洋林永敏郑国光吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨胚胎发育相关基因(EDAG)在白血病细胞中的调控机制。方法用半定量RT-PCR方法检测白血病细胞系中EDAG精子转录本EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,检测EDAG-t的表达改变情况。结果在白血病细胞系K562和U... 详细信息

目的探讨胚胎发育相关基因(EDAG)在白血病细胞中的调控机制。方法用半定量RT-PCR方法检测白血病细胞系中EDAG精子转录本EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,检测EDAG-t的表达改变情况。结果在白血病细胞系K562和U937中也可检测到EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,发现EDAG精子转录本和造血转录本的表达都会随细胞分化而下调,但它们的下调步伐不一致,总的说来,EDAG-t的减弱较EDAG-h慢。结论EDAG精子转录本在白血病细胞中的异常表达值得进一步研究。

关键词：胚胎发育相关基因精予转录本白血病细胞系

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VEGF与血液学恶性疾病

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国际病理科学与临床杂志 2006年第4期26卷 318-320,324页

作者：许子亮韩中朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

VEGF作为一种血管新生的主要病理生理性调节因子,触发了白血病细胞及多发性骨髓瘤细胞的生长、存活及移动,在造血过程中起重要作用。VEGF的表达及其信号转导,对血液学恶性疾病,尤其是对多发性骨髓瘤的发病机制及临床特性都有重要作用。... 详细信息

VEGF作为一种血管新生的主要病理生理性调节因子,触发了白血病细胞及多发性骨髓瘤细胞的生长、存活及移动,在造血过程中起重要作用。VEGF的表达及其信号转导,对血液学恶性疾病,尤其是对多发性骨髓瘤的发病机制及临床特性都有重要作用。针对VEGF及其受体直接或间接的治疗,有可能为临床提供一种新的有效的治疗方法。

关键词：血管内皮生长因子白血病多发性骨髓瘤

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急性髓系白血病干细胞相关转录因子研究进展

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国际移植与血液净化杂志 2006年第3期4卷 29-31页

作者：刘娟妮朱惠芳茹永薪中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

急性髓系白血病干细胞(acutemyeloidleukemiastemcell,AMLLSCs)的存在已被公认,AMLLSCs是正常的造血干/祖细胞被转化而形成的,但其形成的分子机制仍不清楚。本文主要综述AMLLSCs形成相关转录因子的基因表达调控和参与AMLLSCs形成时的浓... 详细信息

急性髓系白血病干细胞(acutemyeloidleukemiastemcell,AMLLSCs)的存在已被公认,AMLLSCs是正常的造血干/祖细胞被转化而形成的,但其形成的分子机制仍不清楚。本文主要综述AMLLSCs形成相关转录因子的基因表达调控和参与AMLLSCs形成时的浓度依赖性。

关键词：白血病干细胞急性髓系白血病转录因子

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抗CD44抗体H144a诱导THP-1细胞凋亡作用的研究

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癌变·畸变·突变 2006年第3期18卷 190-193页

作者：宋国丽廖晓龙韩忠朝深圳大学生命科学学院中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

背景与目的:研究抗CD44抗体HI44a体外诱导白血病细胞THP-1凋亡的作用及其机制。材料与方法:应用Annexin-Ⅴ/PI染色法、原位凋亡检测试剂盒及透射电镜分别检测形态学变化及其凋亡情况,RT-PCR及western-blot方法检测原癌基因c-mycmRNA及... 详细信息

背景与目的:研究抗CD44抗体HI44a体外诱导白血病细胞THP-1凋亡的作用及其机制。材料与方法:应用Annexin-Ⅴ/PI染色法、原位凋亡检测试剂盒及透射电镜分别检测形态学变化及其凋亡情况,RT-PCR及western-blot方法检测原癌基因c-mycmRNA及蛋白水平的表达,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的变化,流式细胞仪检测抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果:采用多种方法均可证实,HI44a对THP-1细胞有明显的诱导凋亡作用。HI44a明显抑制THP-1细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05);同时c-myc在mRNA及蛋白水平的表达水平均明显降低;并可诱导细胞线粒体膜电位的改变。结论:HI44a能够有效诱导THP-1细胞凋亡。其作用机制可能与调节相关癌基因及抗凋亡蛋白的表达,降低线粒体膜电位有关。

关键词：抗CD44抗体细胞凋亡急性白血病

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低氧条件下干细胞因子在MCF-7乳腺癌细胞表达及调控机制

低氧条件下干细胞因子在MCF-7乳腺癌细胞表达及调控机制

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：任贺赵辉韩之波韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的:干细胞因子（stem cell factor,SCF）是一种分泌型的生长因子,起初认为主要生理功能是参与早期造血调控。后续研究发现,干细胞因子及其受体（c—kit）不仅在造血细胞中表达,并且表达于前列腺癌,乳癌,卵巢癌, 结肠癌等多种肿瘤组织... 详细信息

目的:干细胞因子（stem cell factor,SCF）是一种分泌型的生长因子,起初认为主要生理功能是参与早期造血调控。后续研究发现,干细胞因子及其受体（c—kit）不仅在造血细胞中表达,并且表达于前列腺癌,乳癌,卵巢癌, 结肠癌等多种肿瘤组织当中。体内体外多项研究提示,干细胞因子参与多种肿瘤细胞的生长和肿瘤组织的血管新生。尽管越来越多的证据提示干细胞因子参与肿瘤的发生及转移, 但对于该因子在肿瘤细胞中的调控因素知之甚少。肿瘤组织由于瘤细胞生长的速度远大于新生血管的速度,因而多数肿瘤细胞处于缺氧的状态。为了适应低氧环境,肿瘤组织上调多种生长因子,以代偿低氧环境对肿瘤细胞生长造成的不利影响。我们在预实验中发现,在氯化钴模拟的低氧环境中, 干细胞因子mRNA转录增加,提示低氧可能是促进SCF在肿瘤组织中表达的重要因素。以往的相关研究提示,部分低氧调控的细胞因子的转录,依赖于低氧诱导因子-1 （Hypoxia inducible factor-1,HIF-1）的作用。HIF-1 作为一种转录因子,在低氧环境中稳定表达,通过作用于基因的启动子区域相应的低氧反应元件（-GCGTG-）,反式激活相应基因转录。本实验通过鉴定HIF-1与SCF表达的关系,旨在阐明低氧条件下SCF的转录调控机制,为以SCF 做靶点的肿瘤治疗提供新的策略。方法:利用氯化钴模拟低氧环境培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过实时定量PCR的方法检测低氧及常氧条件下SCF和HIF-1mRNA水平表达的变化。构建针对HIF的小干扰RNA表达载体,特异性下调HIF-1的表达,实时定量PCR检测低氧及常氧条件下干扰前后SCF表达水平的变化。应用免疫印记和免疫组化的方法,检测上述实验条件下SCF和HIF-1在蛋白水平的表达变化。应用染色体免疫共沉淀技术,比较常氧和低氧条件下HIF-1与SCF基因启动子区在体内结合的差异。构建 HIF-1表达载体和SCF启动子区（-76至+183）的荧光素酶表达载体,共转染MCF-7细胞,观察过表达HIF- 1前后荧光素酶表达水平的差异。利用定点突变技术,突变潜在的位于启动子区-68至-64位点的低氧反应原件,通过上述共转染方法,再次评价过表达HIF-1前后荧光素酶表达的差异。结果:在氯化钴模拟低氧环境中培养MCF- 7细胞,HIF-1及SCF mRNA表达较常氧条件下分别上升 2．38±0．55和3．86±0．26倍（P＜0．01）,免疫印记和细胞组化显示HIF-1及SCF蛋白较常氧条件下均显著增加（P ＜0．01）．应用针对HIF-1的小干扰RNA特异下调HIF-1 表达,SCF在mRNA水平减低至原来的0．07±0．03（P＜0． 0001）,而免疫印记和免疫组化在蛋白水平均未检测出SCF的表达。应用染色体免疫共沉淀法,于MCF-7细胞的核提取物中,检测到HIF-1与SCF启动子的复合物,证明HIF- 1直接结合于MCF-7的启动子区。我们进而应用HIF-1的过表达载体和带有荧光素酶基因的SCF启动子区载体,共转染MCF-7细胞。HIF-1过表达显著激活SCF的启动子区（P＜0．0005）,而将启动子区的低氧反应元件突变后（- GCGTG-突变为-GTAGA-）,HIF-1上调SCF启动子的作用显著减弱（P＜0．001）。结论:低氧条件下,HIF-1 通过结合位于S C F启动子区的低氧反应元件,直接激活 SCF在乳腺癌细胞中的表达。SCF这一调节机制的发现,可为针对该细胞因子的肿瘤治疗提供新的途径。

关键词：干细胞因子低氧诱导因子-1

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急性淋巴细胞白血病患者DNA拓扑异构酶的表达及临床意义

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白血病．淋巴瘤 2006年第2期15卷 96-98页

作者：张美荣薛华竺晓凡张莉张悦肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA拓扑异构酶(Topo)mRNA水平的表达及其临床意义。方法用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了90例ALL患者DNATopo的表达。结果DNATopo各亚型(Topo-Ⅰ,Topo-Ⅱa,Topo-Ⅱb)的表达阳性率初治... 详细信息

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA拓扑异构酶(Topo)mRNA水平的表达及其临床意义。方法用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了90例ALL患者DNATopo的表达。结果DNATopo各亚型(Topo-Ⅰ,Topo-Ⅱa,Topo-Ⅱb)的表达阳性率初治组(58.1%,51.2%,81.5%)高于复发难治组(33.3%,44.4%,77.9%)和完全缓解(CR)组(14.9%,23.4%,34.1%),各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。表达量各组间比较,CR组与初治组差异有统计学意义(P<0.005);CR组与复发难治组Topo-Ⅱb差异有统计学意义(P<0.05),DNATopo各亚型表达量之间有显著相关性(P<0.001),且各亚型表达量与WBC数之间亦有显著相关性(P<0.01)。结论ALL患者DNATopo各亚型mRNA水平的表达量可能与WBC数共同作为Topo抑制剂药物个体化合理用药的参考指标,但不宜作为判断患者是否对Topo抑制剂耐药的参考指标。

关键词：急性淋巴细胞白血病 DNA拓扑异构酶

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