检索结果-内蒙古大学图书馆

中国现代神经疾病杂志 2021年第6期21卷 460-465页

作者：黄铠李文武刘红仙孙浩李志宏褚嘉祐杨昭庆中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省楚雄彝族自治州人民医院神经内科 675000

目的总结一眼咽型肌营养不良症(OPMD)家系的临床及分子生物学特征。方法收集云南省楚雄彝族自治州的一OPMD家系的临床资料,并对其中6位家族成员行外周静脉血基因组DNA分离,通过聚合酶链反应(PCR)、TA克隆和Sanger测序,检测PABPN1基因变... 详细信息

目的总结一眼咽型肌营养不良症(OPMD)家系的临床及分子生物学特征。方法收集云南省楚雄彝族自治州的一OPMD家系的临床资料,并对其中6位家族成员行外周静脉血基因组DNA分离,通过聚合酶链反应(PCR)、TA克隆和Sanger测序,检测PABPN1基因变异特点。结果该OPMD家系中4位成员均于50岁后发病,以眼睑下垂为首发症状,进行性加重并出现以吞咽困难为表现的咽部肌群受累。基因检测显示,先证者(Ⅱ3)及其二姐(Ⅱ2)、四弟(Ⅱ4)和五妹(Ⅱ5)均存在PABPN1基因外显子1(GCN)异常重复扩增,即(GCN)_(10)/(GCN)_(13),在家系中呈现显性遗传模式,最终诊断为OPMD,该家系明确为OPMD家系。结论杂合子(GCN)13异常重复扩增是该OPMD家系成员患病之病因,临床症状在发现疾病中起主导作用,基因检测是明确诊断的"金标准",可为治疗方案的选择以及遗传咨询提供主要依据。

关键词：肌营养不良,眼咽聚核苷酸嘌呤转移酶基因突变系谱

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柯萨奇病毒B组4型TaqMan探针一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2025年第2期38卷 167-171页

作者：郭伟陈俊薇刘煜菡张名冯昌增马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南大学生命科学学院云南昆明650500

目的建立柯萨奇病毒B组4型(Ccoxsackievirus B4,CVB4)Taq Man探针一步法实时荧光定量PCR(real-time fluo-rescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测方法,并进行验证,以期为CVB4的快速定量检测提供可靠方法。方法选择CVB4的VP1序列中较保守部分,设计引物和探针;经体外转录获得阳性RNA标准品,绘制标准曲线,建立CVB4的Taq Man探针一步法RT-q PCR法。验证方法的灵敏度、线性范围、重复性、特异性。应用建立的方法检测16份临床样本。结果方法的检测灵敏度为10~3copies/μL;阳性RNA标准品在10^(3)~10^(10)copies/μL范围内,与荧光单位(relative fluorescence unit,RFU)具有良好的线性关系,线性方程为:y=-3.742 x+48.651,R^(2)为0.998;重复性验证CV<2%;与柯萨奇病毒B组其他血清型CVB2、CVB3、CVB5、CVB6,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71),柯萨奇病毒A组(Coxsackie virus A,CVA)8、10、12型(CVA8、CVA10、CVA12),埃可病毒11型(Echovirus 11,E11)均无交叉反应。16份临床样本中12份为CVB4阳性。结论建立的Taq Man探针一步法RT-q PCR检测方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,可用于CVB4临床样品的检测。

关键词：柯萨奇病毒B组4型 TaqMan探针实时荧光定量PCR

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尼古丁对帕金森病的预防作用机制研究进展

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山东医药 2024年第18期64卷 107-110页

作者：黄璋琼潘玥马开利李牧遥张艺薇吴海婷韦梦晨朱洲海管莹中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 澳门科技大学创新工程学院-计算机科学与工程学院中国澳门烟草与健康联合研究院

研究发现,尼古丁可能降低帕金森病(PD)的发病风险。尼古丁预防PD发生的具体机制尚不明确,尼古丁可能通过多种途径刺激多巴胺(DA)能神经系统,预防PD的发生:尼古丁可以抑制α突触核蛋白或者α突触核蛋白原纤维聚集,预防PD的发生;尼古丁通... 详细信息

研究发现,尼古丁可能降低帕金森病(PD)的发病风险。尼古丁预防PD发生的具体机制尚不明确,尼古丁可能通过多种途径刺激多巴胺(DA)能神经系统,预防PD的发生:尼古丁可以抑制α突触核蛋白或者α突触核蛋白原纤维聚集,预防PD的发生;尼古丁通过抑制活性氧簇的形成或降低单胺氧化酶B的活性而抑制脑组织过度氧化应激反应,预防PD的发生;尼古丁通过上调脑组织α7-烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)表达而抑制脑组织炎症反应,预防PD的发生;尼古丁通过神经元nAChRs结合后抑制脑组织细胞凋亡,预防PD的发生;尼古丁通过促进神经营养因子表达促进DA能神经元的存活,预防PD的发生。

关键词：尼古丁 α突触核蛋白氧化应激炎症反应细胞凋亡多巴胺能神经元帕金森病

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2019年云南省昆明市1株埃可病毒11型分离株的全基因序列分析

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中国生物制品学杂志 2025年第1期38卷 48-52页

作者：刘煜菡张名陈俊薇郭伟冯昌增马绍辉中国医学科学院、北京协和医学院、医学生物学研究所云南昆明650106 自贡市疾病预防控制中心四川自贡643000 云南大学生命科学院云南昆明650091

目的对从2019年云南省昆明市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者的粪便样品分离获得的1株埃可病毒11型(echovirus 11,E-11)毒株进行全基因组测序及遗传特性分析,为E-11的预防和控制提供参考。方法利用Vero细胞进行病毒分离... 详细信息

目的对从2019年云南省昆明市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者的粪便样品分离获得的1株埃可病毒11型(echovirus 11,E-11)毒株进行全基因组测序及遗传特性分析,为E-11的预防和控制提供参考。方法利用Vero细胞进行病毒分离,提取细胞病变产物的RNA进行RT-PCR并测序,使用MEGA 7.0、Geneious 10.0和Simplot 3.5.1等软件对分离的毒株进行全基因组序列分析。结果19V30322/YN/CHN/2019分离株经测序比对为E-11,与近年来中国广东和湖北的E-11流行株属于同一基因型D的D5亚型,全长为7434 nt,编码1个2195氨基酸的多聚蛋白。19V30322与国内分离的E-11分离株核苷酸序列相似性为81.8%~98.3%,氨基酸序列相似性为94.5%~99.3%,并在进化过程中与柯萨奇病毒A组10型、E-6、柯萨奇病毒B组4型和柯萨奇病毒B组5型发生重组。结论19V3/YN/CHN/2019分离株为E-11的D5亚型,是1株重组株。

关键词：肠道病毒埃可病毒11型全基因组序列分析

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柯萨奇病毒A组4型分离株全基因序列分析

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中国病原生物学杂志 2021年第5期16卷 540-545页

作者：冯昌增张名许丹菡丛山日张铭润乔燕侯丁琳杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析1株柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)毒株的全基因组序列和系统进化特征。方法使用细胞培养法对肠道病毒阳性标本中的病毒进行分离。提取病毒RNA,通过RT-PCR法分段扩增全基因组,经测序、比对和组装后获得CV-A4分离株... 详细信息

目的分析1株柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)毒株的全基因组序列和系统进化特征。方法使用细胞培养法对肠道病毒阳性标本中的病毒进行分离。提取病毒RNA,通过RT-PCR法分段扩增全基因组,经测序、比对和组装后获得CV-A4分离株的全基因组序列。利用MEGA7.0软件分别基于全长VP1序列和全基因组序列构建系统发育树;使用Geneious Prime 2020.1.2软件对全基因组及编码区各区段的核苷酸和氨基酸序列同源性进行分析,并对编码区氨基酸变异情况进行比较分析。结果从人类横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞上分离到1株CV-A4分离株,命名为R09220/YN/CHN/2009。基于全长VP1序列的系统进化分析显示,该分离株属于C2基因亚型。在全基因组核苷酸序列上与其同源性最高的是CV-A4毒株CVA4/SZ/CHN/09(核苷酸为95.4%,氨基酸为98.7%)。与C2基因亚型内16株CV-A4代表株的全序列核苷酸相似性为88.4%~95.4%,氨基酸序列相似性为97.5%~98.7%。通过比较C2基因亚型内的23株CV-A4分离株的全基因组氨基酸序列,R09220/YN/CHN/2009共存在23个氨基酸变异位点,其中10个为其独有的变异位点。结论R09220/YN/CHN/2009为肠道病毒CV-A4,属于C2基因亚型,该亚型在中国大陆流行的CV-A4病毒中占据优势地位。

关键词：柯萨奇病毒A组4型全基因组系统进化分析

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柯萨奇病毒A16型疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2021年第3期34卷 357-361页

作者：冯骁(综述) 李琦涵(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒引起的传染病,柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus type A 16,CA16)和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引发HFMD流行和暴发的主要病原菌。HFMD在5岁以下的儿童中可引起口腔疼痛、厌食、低热及手、脚和口腔溃疡,大部分儿童约1周痊愈,少数儿童可出现心肌炎、肺水肿、无菌脑膜炎等并发症,甚至导致死亡。疫苗接种是预防HFMD的主要途径,目前,EV71灭活疫苗已上市,但CA16疫苗研究进展仍较缓慢。因此,本文对CA16的全病毒灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、类病毒颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗的研究进展作一综述。

关键词：手足口病肠道病毒柯萨奇病毒A16型疫苗

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精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列修饰对流感病毒溶瘤能力的影响

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中国生物制品学杂志 2022年第5期35卷 551-556,561页

作者：杨英龙琼杨颖李多杨姝马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650000 昆明医科大学云南昆明650000 云南省疾病预防控制中心云南昆明650000

目的探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列修饰对流感病毒溶瘤能力的影响。方法采用流感病毒反向遗传操作体系,将含PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS的质粒PHW200(八质粒)及经RGD修饰的八质粒分别共转染293T细胞,拯救出野生型和重组RGD... 详细信息

目的探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列修饰对流感病毒溶瘤能力的影响。方法采用流感病毒反向遗传操作体系,将含PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS的质粒PHW200(八质粒)及经RGD修饰的八质粒分别共转染293T细胞,拯救出野生型和重组RGD流感病毒。采用胶体金法试纸条进行鉴定,血凝试验检测病毒效价,PCR法检测病毒传代稳定性,噬斑试验检测病毒滴度。用拯救的两种流感病毒感染不同细胞(B16-F10、A549、TC-1、CT26、4T1和Vero细胞),检测细胞活力和细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率。用B16-F10细胞注射小鼠,建立小鼠黑色素瘤模型后,分别注射两种流感病毒及PBS,隔1 d给药1次,共5次,肿瘤细胞接种后19 d,测量肿瘤大小;肿瘤细胞接种后25 d,统计小鼠存活数量。结果野生型和重组RGD流感病毒经胶体金法试纸条鉴定均为阳性,血凝效价分别为1∶2^(8)和1∶2^(9),传代稳定性良好,病毒滴度分别为3×10^(7)和1.8×10^(7) PFU/mL。两种流感病毒感染后B16-F10和A549细胞活力均大幅降低,其他细胞活力变化较小;与相应野生型流感病毒组比较,重组RGD流感病毒组B16-F10细胞中LDH释放率明显升高(P<0.05),A549细胞略升高,但差异无统计学意义(P>0.05),其他细胞均较低。与PBS组比较,两种流感病毒组小鼠肿瘤大小明显减小(P<0.001),小鼠存活率明显升高(P<0.05)。结论RGD修饰的流感病毒对B16-F10具有较好的亲嗜性,且溶瘤能力增强。本研究为溶瘤流感病毒在肿瘤治疗中的应用奠定了基础。

关键词：流感病毒溶瘤能力精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列黑色素瘤

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人工繁育恒河猴的肺炎链球菌携带状况调查及分析

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实验动物与比较医学 2021年第3期41卷 259-265页

作者：刘雨李艳艳张伟杨凤梅刘权李咏洁靳玮华段素琴王俊斌陈丽雄徐鸿界赵远和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的探究人工繁育的恒河猴群体中肺炎链球菌的自然感染状况,为肺炎链球菌感染的临床诊断和治疗提供参考。方法从恒河猴猴群中随机采集20只婴猴、30只成年猴和30只老年猴的鼻拭子和咽拭子样本,采用细菌培养和实时荧光定量PCR方法同时筛... 详细信息

目的探究人工繁育的恒河猴群体中肺炎链球菌的自然感染状况,为肺炎链球菌感染的临床诊断和治疗提供参考。方法从恒河猴猴群中随机采集20只婴猴、30只成年猴和30只老年猴的鼻拭子和咽拭子样本,采用细菌培养和实时荧光定量PCR方法同时筛查样本中肺炎链球菌的携带情况,并对筛查结果为阳性的婴猴的亲代母猴进行肺炎链球菌筛查。再结合革兰染色法、奥普托欣药敏试验、胆汁溶解试验、菊糖发酵试验和PCR扩增测序对样本进行进一步鉴定。结果恒河猴婴猴携带肺炎链球菌的检出率为20%(4/20),而这4只阳性婴猴的亲代母猴检测结果均为阴性。成年恒河猴和老年恒河猴中肺炎链球菌的检出率均为0%。细菌培养物在形态学上观测显示,该菌为灰白色凸起状,周围草绿色溶血环,呈脐窝状,为典型肺炎链球菌的菌落特征。革兰染色结果显示为阳性,胆汁溶解试验和菊糖发酵试验结果均呈阳性,并且该菌对奥普托欣敏感;以上结果表明本次从婴猴鼻咽拭子分离到的4株菌落均为肺炎链球菌。结论本调查发现在恒河猴中肺炎链球菌自然感染群体主要为婴猴,婴猴携带率约为20%,其鼻、咽部均为该菌寄住场所,且未发现母婴垂直传播情况。

关键词：恒河猴肺炎链球菌携带率婴猴

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KRAS基因3'UTR多态性与云南汉族人群宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的相关性

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昆明医科大学学报 2024年第2期45卷 14-22页

作者：郭妮张承洪超刘伟鹏姚宇峰严志凌中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 镇雄县人民医院妇科云南镇雄657200 昆明医科大学第三附属医院妇科云南昆明650118

目的探究KRAS基因中3′U TR区域的rs712和rs7973450位点与云南汉族人群宫颈癌(cervical cancer,CC)和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的相关性。方法共纳入CIN患者461例、CC患者961例及其健康对照983例,采用TaqMan探针法进行基因分型检测,并分析2个SNP位点与CIN及CC的相关性。结果rs7973450位点的A等位基因可能是CIN(P=0.004,OR=0.651,95%CI 0.487~0.871)与CC(P=7.00×10-4,OR=0.667,95%CI 0.529~0.844)发生的保护性因素。rs712位点在CIN组、CC组和对照组间等位基因和基因型分布频率的差异无统计学意义(P>0.017);单倍型分析的结果显示,单倍型rs712Ars7973450G与更高的CIN(P=4.00×10^(-4),OR=1.714,95%CI1.269~2.314)和CC(P=3.84×10^(-5),OR=1.667,95%CI 1.305~2.131)发生风险相关;单倍型rs712A-rs7973450A则与更低的CC发生风险相关(P=0.012,OR=0.790,95%CI 0.658~0.950)。结论位于KRAS基因3U′TR区域的SNP位点rs7973450的A等位基因可能是云南汉族人群CIN和CC发生的保护性因素。

关键词： KRAS基因单核苷酸多态性宫颈癌宫颈上皮内瘤变云南汉族人群相关性

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基于CRISPR/Cas9系统构建Uox基因敲除的高尿酸血症小鼠模型

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中国实验动物学报 2025年第3期33卷 411-419页

作者：张艺薇龙维虎唐东红范胜涛王鹏王陈芸李哲丽黄璋琼叶尤松北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118 北京唯尚立德生物科技有限公司北京102200

目的通过CRISPR/Cas9技术构建Uox基因敲除且能稳定遗传的小鼠品系,并评价其是否能够模拟高尿酸血症患者的疾病特点。方法在Uox基因Exon 2~4的前后两侧设计双sgRNA,将基因敲除所需的sgRNA与Cas9 mRNA按照一定比例显微注射进小鼠的受精... 详细信息

目的通过CRISPR/Cas9技术构建Uox基因敲除且能稳定遗传的小鼠品系,并评价其是否能够模拟高尿酸血症患者的疾病特点。方法在Uox基因Exon 2~4的前后两侧设计双sgRNA,将基因敲除所需的sgRNA与Cas9 mRNA按照一定比例显微注射进小鼠的受精卵中,培养2~4 h后,将胚胎移植至代孕母鼠体内并最终获得F0代小鼠。对F0代小鼠进行PCR鉴定与测序分析,筛选适合的Uox基因阳性敲除小鼠与野生型(wide type, WT)小鼠合笼获得F1代,再挑选F1代中杂合子(基因型为Uox^(+/-))雌鼠与雄鼠合笼得到纯合的F2代小鼠(基因型为Uox^(-/-))。最后检测Uox^(-/-)小鼠与WT小鼠血清尿酸、尿液尿酸,血清中肌酐、尿素、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶的含量并进行对比,通过苏木素-伊红(HE)染色结合Masson染色观察肾和肝组织的病理变化。结果与WT小鼠相比,Uox^(-/-)小鼠血清尿酸(雄鼠:(478.4±114.6)μmol/L,P<0.001;雌鼠:(507.7±129.6)μmol/L,P<0.001)、尿液尿酸(雄鼠:(4116.8±1928.1)μmol/L,P<0.001;雌鼠:(2998.0±547.7)μmol/L,P<0.01)、血清中肌酐((91.8±55.6)μmol/L,P<0.001)、尿素((28.6±13.9) mmol/L,P<0.05)、丙氨酸氨基转移酶((53.3±23.3) U/L,P<0.01)及门冬氨酸氨基转移酶((203.3±70.3) U/L,P<0.001)水平均显著升高。组织病理学的结果显示,Uox^(-/-)小鼠的肝中可见中量肝细胞变性,肾中可见中重度的肾小管囊性扩张、变性和纤维化,肾小球肥大增生,小血管扩张充血,间质单核及淋巴细胞浸润。结论通过CRISPR/Cas9技术成功构建了Uox基因Exon 2敲除的小鼠纯合品系,可以作为高尿酸领域相关研究的动物模型。

关键词：高尿酸血症动物模型 CRISPR/Cas9 基因敲除尿酸氧化酶

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