检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2020年第1期31卷 112-116页

作者：贺凌煜朱文勇杨丽源廖国阳昆明医科大学云南昆明650599 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

由于与病毒或细菌引起的呼吸道感染症状极为相似,对肺炎支原体感染易误诊进而失去最佳治疗时间,并且由于出现大范围的大环内酯类药物的耐药现象,因此开发快速、灵敏、高效的诊断方法极为重要。本文对目前肺炎支原体的检测诊断方法的相... 详细信息

由于与病毒或细菌引起的呼吸道感染症状极为相似,对肺炎支原体感染易误诊进而失去最佳治疗时间,并且由于出现大范围的大环内酯类药物的耐药现象,因此开发快速、灵敏、高效的诊断方法极为重要。本文对目前肺炎支原体的检测诊断方法的相关文献进行综述,为诊断肺炎支原体感染提供参考。

关键词：肺炎支原体检测血清学分子生物学

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恒河猴自发性脂肪瘤的病例分析

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实验动物科学 2020年第4期37卷 59-63页

作者：杨凤梅李艳艳刘权陈丽雄王俊斌赵远马进徐鸿界禹文海和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

在人工饲养猴场中发现一只雄性恒河猴腹部有一隆起肿块,采食、饮水、排便等皆正常。对其进行保定触诊,肿块皮肤完整,肿块组织边界清楚,质地硬,实质感较强,不规则形,直径约10 cm,触诊无明显痛感;用针管刺入肿块组织抽取无液体样内容物。... 详细信息

在人工饲养猴场中发现一只雄性恒河猴腹部有一隆起肿块,采食、饮水、排便等皆正常。对其进行保定触诊,肿块皮肤完整,肿块组织边界清楚,质地硬,实质感较强,不规则形,直径约10 cm,触诊无明显痛感;用针管刺入肿块组织抽取无液体样内容物。经B超检测该肿块内组织形状规则,边界清晰,包膜回声及少许血流信号,呈纤维素样变;检查体温正常;血液生理及生化指标检测,结果与正常猴比较:ALP升高,TP、ALB、TC、RBC、HCT降低;实施肿块切除手术,取肿块组织切片镜检,确诊为脂肪瘤。经手术后经过术后护理,该恒河猴预后良好。

关键词：恒河猴脂肪瘤检测

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云南德宏地区Hb WS异常血红蛋白突变的血液学和基因型分析

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中国妇幼保健 2020年第8期35卷 1467-1471页

作者：徐龙江易薇葛世军杨必清番云华黄小琴褚嘉祐杨昭庆中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室云南昆明650118 德宏州人民医院检验科云南德宏678400

目的分析云南德宏地区Hb WS异常血红蛋白突变的血液学和基因型。方法获取云南德宏地区6 043例外周静脉血样本,采用突变阻滞扩增系统ARMS-PCR进行Hb WS基因突变的筛查,突变携带者的样本采用血细胞分析仪进行血常规检测,采用毛细管电泳法... 详细信息

目的分析云南德宏地区Hb WS异常血红蛋白突变的血液学和基因型。方法获取云南德宏地区6 043例外周静脉血样本,采用突变阻滞扩增系统ARMS-PCR进行Hb WS基因突变的筛查,突变携带者的样本采用血细胞分析仪进行血常规检测,采用毛细管电泳法进行血红蛋白电泳,采用Gap-PCR检测缺失型α珠蛋白基因突变,采用反向点杂交法检测常见非缺失型α珠蛋白基因突变和β地中海贫血基因突变。结果在6 043例样本中,共检出Hb WS突变携带者38例(携带率0. 63%),包含4种地中海贫血基因突变组合。单纯携带Hb WS突变患者中,2例表现为轻度贫血,2例表现为中重度贫血,21例无贫血症状。Hb WS复合3. 7缺失型α地中海贫血的患者平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)均低于正常参考值,2例表现为小细胞低色素性贫血,2例表现为轻中度贫血;Hb WS复合β地中海贫血突变的患者中,57%表现为轻中度贫血;1例同时复合3. 7缺失型和β地中海贫血的Hb WS突变携带者表现为小细胞低色素性贫血。结论 Hb WS突变复合α地中海贫血和β地中海贫血突变可出现不同的基因型和血液学表型,杂合子未发现有规律的血液学表征,可表现为正常、轻中重度贫血及小细胞低色素性贫血,应通过血液学和基因分析来进行临床诊断。

关键词：地中海贫血 Hb WS异常血红蛋白突变基因型

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体外研究脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应系统的作用及其免疫学意义

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病毒学报 2019年第2期35卷 225-232页

作者：吴化叶牟唐维王建斌柳蕾程继帅冯敏王丽春张莹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

尽管针对脊髓灰质炎病毒已经有长达数百年的研究并成功研制出了预防性疫苗,但是对于该病毒如何启动机体天然免疫反应,进而激活获得性免疫反应这一过程的具体分子机理仍有诸多空白。本研究通过体外分析脊髓灰质炎病毒Sabin减毒株Ⅰ型的... 详细信息

尽管针对脊髓灰质炎病毒已经有长达数百年的研究并成功研制出了预防性疫苗,但是对于该病毒如何启动机体天然免疫反应,进而激活获得性免疫反应这一过程的具体分子机理仍有诸多空白。本研究通过体外分析脊髓灰质炎病毒Sabin减毒株Ⅰ型的结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应信号分子的影响,了解脊髓灰质炎病毒在上皮细胞中启动免疫信号的具体分子机制。采用PCR方法扩增脊髓灰质炎病毒四种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4,经酶切纯化后与pcDNA3.1+真核表达载体连接,分别构建含目的基因的四种重组质粒。将重组质粒分别转染至人呼吸道上皮细胞16HBE中,48h后收集培养上清、细胞。提取细胞的总RNA,利用Q-PCR法分别检测四种结构蛋白表达所诱导的天然免疫信号分子的mRNA表达量。同时,上清、细胞裂解物分别与人T细胞共培养,检测其对T细胞增殖的影响。体外在16HBE细胞中分别表达SabinⅠ病毒VP1～VP4四种结构蛋白均可刺激如LTα3、NIK等NF-κB天然免疫信号通路相关分子的表达,并且表达这四种蛋白的细胞裂解物与T细胞共培养后均表现出刺激T细胞非特异性增殖的效应。但是,仅有VP1、VP2表达所诱导分泌相关因子的培养上清才表现出间接刺激T细胞增殖的能力。SabinⅠ毒株的四种结构蛋白可激活NF-κB信号通路,促进T细胞的非特异性增殖,从而激活适应性免疫应答。

关键词：脊髓灰质炎脊髓灰质炎病毒(PV) 结构蛋白信号通路 NF-κB

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树鼩原代小胶质细胞的分离培养、纯化与鉴定

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动物学杂志 2019年第3期54卷 445-450页

作者：黎晓慧李明学黄鑫张志成袁圆代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学中国医学科学院医学生物学研究所昆明650500

本文旨在建立树鼩(Tupaia belangeri)小胶质细胞原代培养及纯化的方法,为利用新型实验动物树鼩进行相关研究工作提供实验材料。将新生树鼩大脑皮质机械分离,皮质组织块用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液;培养9～10 d后,分别采用直立手拍法... 详细信息

本文旨在建立树鼩(Tupaia belangeri)小胶质细胞原代培养及纯化的方法,为利用新型实验动物树鼩进行相关研究工作提供实验材料。将新生树鼩大脑皮质机械分离,皮质组织块用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液;培养9～10 d后,分别采用直立手拍法、温和胰酶消化法以及恒温振荡法分离纯化树鼩小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化。荧光显微镜下,利用小胶质细胞的特异性标记物CD11b抗体进行鉴定。结果显示,小胶质细胞分离培养第3天时呈静息状态,表现为梭形、杆状、分支状等不规则形态。细胞免疫荧光CD11b呈阳性。不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示,直立手拍法所获得的细胞产量明显高于恒温振荡法(P <0.05),细胞阳性率(> 96%)明显高于温和胰酶消化法(> 90%,P <0.05)。直立手拍法可获得产量及纯度高的树鼩原代小胶质细胞。

关键词：树鼩原代小胶质细胞直立手拍法温和胰酶消化法恒温振荡法

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一株柯萨奇病毒A组6型毒株RYN-A1205的分子特征及其在KMB17细胞上的遗传稳定性研究

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中国病毒病杂志 2020年第2期10卷 102-108页

作者：刘红波张捷许丹菡丛山日黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的研究1株手足口病相关柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CV-A6)毒株RYN-A1205的分子特征及其在KMB17细胞中连续传代的遗传稳定性。方法利用MEGA7.0软件并采用neighborjoining法对RYN-A1205株及65株CV-A6代表株基于全长VP1序列进... 详细信息

目的研究1株手足口病相关柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CV-A6)毒株RYN-A1205的分子特征及其在KMB17细胞中连续传代的遗传稳定性。方法利用MEGA7.0软件并采用neighborjoining法对RYN-A1205株及65株CV-A6代表株基于全长VP1序列进行种系进化分析。另外,将RYNA1205株以MOI=1接种至KMB17细胞中于37℃连续传代培养,提取适应前及适应后第1、5、10、15代毒株的RNA,以其为模板,RT-PCR分段扩增全基因组序列并进行测序分析。结果RYN-A1205株属于D3基因亚型中的D3a分支,能较好地适应KMB17细胞。与适应前毒株相比,适应后毒株共发生15个碱基突变,造成12个氨基酸替换。适应后各代次病毒全基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为99.97%~100%和99.90%~100%,其中,P10代在VP2和3D编码区各发生1个氨基酸的替换,P15代氨基酸突变情况与P10代一致。结论RYN-A1205株与我国近几年的CV-A6内地流行株在进化树中属于同一分支,在KMB17细胞上适应后保持良好的遗传稳定性,这为后续CV-A6疫苗的研发提供参考。

关键词：柯萨奇病毒A组6型分子特征 KMB17细胞遗传稳定性

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细胞工厂中F基因型腮腺炎病毒SP-A株在人二倍体细胞上的增殖研究

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微生物学免疫学进展 2020年第1期48卷 63-68页

作者：王微邱恒杨振清丁开云樊会青李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含... 详细信息

目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含血清培养基条件下,按照不同接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)接种细胞,确定病毒增殖峰值后,进一步观察不同吸附条件对病毒增殖的影响;同时进行荧光实时定量PCR,验证病毒增殖变化。结果在体积分数为5%的血清条件下,细胞可生长成致密单层;高MOI(0.500)感染细胞后,在4~5 d内进入增殖高峰,中MOI(0.050)、低MOI(0.005)感染细胞后,在5~6 d进入增殖高峰,维持48 h后,呈现缓慢下降趋势;在比较37℃吸附试验中,非吸附组病毒增殖高峰明显迟于吸附组,荧光实时定量PCR检测结果显示在病毒感染细胞6 d时病毒载量达到峰值。结论5%新生牛血清即可获得生长状态良好的细胞,MOI对腮腺炎病毒在KMB17细胞株中的增殖有较大的影响,当使用适宜范围的MOI(0.01~0.02),在非吸附的条件下,腮腺炎病毒SP-A株在KMB17株中能够良好地增殖,在病毒培养至7~9 d可获得高滴度的病毒收获液。

关键词：腮腺炎病毒 F基因型病毒增殖人二倍体细胞细胞工厂

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东南亚地区寨卡病毒的流行及结构蛋白分子进化特征分析

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中国生物制品学杂志 2019年第9期32卷 958-964页

作者：林垚洪珊蓝青萍孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)在东南亚地区的感染传播情况,探讨其分子水平上的进化特征。方法用关键词和主题词检索ZIKV在东南亚地区暴发感染流行情况。在GenBank中获取ZIKV东南亚病毒株全基因序列,采用BIOEDIT软件进行比对;利用M... 详细信息

目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)在东南亚地区的感染传播情况,探讨其分子水平上的进化特征。方法用关键词和主题词检索ZIKV在东南亚地区暴发感染流行情况。在GenBank中获取ZIKV东南亚病毒株全基因序列,采用BIOEDIT软件进行比对;利用MEGA 7. 0软件绘制系统进化树;将结构蛋白核苷酸翻译获得其相应的氨基酸序列,分析突变情况;统计不同株型间结构蛋白核苷酸突变和氨基酸替代位点;预测包膜蛋白第三结构域(envelop domainⅢ,ED-Ⅲ)的二级结构。结果 ZIKV在东南亚国家均有血清学感染或回顾性检测阳性报道,其中越南、泰国和新加坡ZIKV感染病例较多,疾病负担较为严重。系统进化树表明,东南亚ZIKV株均属于亚洲型,2016年新加坡株(序列号:KY241788)与2015年巴西株亲缘关系最近,1966年分离的马来西亚株与其他东南亚株亲缘关系较远。东南亚ZIKV各株型间衣壳蛋白(capsid protein,C)的碱基突变点为22处,突变率为6. 36%,造成非同义氨基酸突变点为19处,突变率为16. 52%。前膜蛋白(pre-membrane protein,prM)的碱基突变点为51处,突变率为10. 12%,造成非同义氨基酸突变点为37处,突变率为22. 02%。包膜蛋白(envelope protein,E)的碱基突变点为141处,突变率为9. 33%,造成非同义氨基酸突变点为101处,突变率为20. 04%。ED-Ⅲ二级结构预测结果显示,在该区域2株代表株有相同数量的蛋白结合位点,代表株2(1966 Malaysia KX377336)存在1个蛋白结合位点富集区(ED-Ⅲ:55-63),而代表株1(2014 Thailand KU681081)蛋白结合位点分布较均匀,代表株2的ED-Ⅲ存在1个二硫键,而代表株1不存在,代表株1(ED-Ⅲ:79-80)存在1个解螺旋,而代表株2不存在。结论通过病例统计分析、系统发育分析、蛋白质核苷酸及氨基酸序列比较分析、ED-Ⅲ二级结构预测,为研究东南亚地区ZIKV不同株型间的生物学和流行致病性差异提供参考。

关键词：寨卡病毒东南亚流行结构蛋白分子特征

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云南地区人乳头瘤病毒16型L1基因变异与宫颈癌的关系研究

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中华肿瘤防治杂志 2020年第15期27卷 1189-1194页

作者：戴书颖周紫云杨宏英肖云姚月婷王侠许金美赵凌锋严志凌昆明医科大学基础医学院云南昆明650500 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室云南昆明650500 中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 昆明医科大学第三附属医院妇科云南昆明650118 昆明医科大学第三附属医院重症医学科云南昆明650118

目的人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV16)是引起宫颈癌的主要型别,HPV16主要衣壳蛋白L1具有激活宿主免疫细胞,诱导中和抗体产生的功能。本研究旨在探讨HPV16L1基因变异与宫颈癌发生的关系。方法共纳入2015-09-30-2017-03-3... 详细信息

目的人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV16)是引起宫颈癌的主要型别,HPV16主要衣壳蛋白L1具有激活宿主免疫细胞,诱导中和抗体产生的功能。本研究旨在探讨HPV16L1基因变异与宫颈癌发生的关系。方法共纳入2015-09-30-2017-03-31昆明医科大学第三附属医院妇科89例感染HPV16的宫颈癌患者(病例组)和132名感染HPV16无宫颈病变的感染者(对照组)作为研究对象。采集研究对象宫颈样本扩增HPV16L1序列并测序,分析病例组和对照组中HPV16各亚型的分布情况以及HPV16L1基因突变的分布情况,探讨HPV16L1基因变异与宫颈癌之间的关系。结果发现存在2种HPV16亚型分布,分别为亚洲型(As)和欧洲型(EUR),病例组中发现84例As亚型(94.4%),5例EUR亚型(5.6%),对照组发现122例As亚型(92.4%),10例EUR亚型(7.6%),经分析各亚型在病例组和对照组之间的分布差异无统计学意义,P=0.570。2个核苷酸的突变引起A6178C(N207T)和A7036C(K493T)氨基酸的改变,其中A6178C(N207T)突变仅发生在As亚型中,而A7036C(K493T)仅发生在EUR亚型中。结论通过HPV16L1基因的序列比对分析后发现,HPV16L1基因在宫颈癌和无宫颈病变的感染者中均存在变异,本研究结果可为基于HPV L1疫苗的研发设计提供参考数据。

关键词：宫颈癌 HPV16 L1基因突变云南

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罕见儿童Ⅱ型Loeys-Dietz综合征1例

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心脏杂志 2021年第1期33卷 115-116,F0003,F0004页

作者：段丽芬刘红仙王惠萍闵杰青张志丹褚嘉祐孙浩杨昭庆昆明市儿童医院神经内科云南昆明650228 中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 昆明市儿童医院心功能科云南昆明650228 云南省儿童重大疾病研究重点实验室云南昆明650228

Loeys-Dietz综合征(Loeys-Dietz syndrome,LDS,OMIM:190 182)由Bart Loeys及Harry Dietz等于2005年首次报道[1],LDS是一种常染色体显性遗传性结缔组织病。转化生长因子β受体1(TGFBR1)和TGFBR2基因突变是其主要的致病原因[2]。LDS和马凡综合征(Marfan’s syndrome,MFS)是最常见的遗传性结缔组织疾病,LDS临床罕见,因其心血管、骨骼系统病变与MFS类似[3],所以极易被误诊为MFS[4, 5]。

关键词： Loeys-Dietz综合征颅内压增高全外显子测序 TGFBR2基因

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