检索结果-内蒙古大学图书馆

国际生物制品学杂志 2019年第4期42卷 193-197页

作者：张浩然廉亚茹姜莉龙润乡杨蓉苏杰杨二霞艾美康淮生物制药(江苏)有限公司研发部泰州225300 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的验证甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)(甲肝疫苗)生产场地变更后原生产场地制备的ELISA试剂盒对HAV抗原检测的一致性.方法用原生产场地制备的抗HAV多克隆抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗HAV抗体制备ELISA试剂盒,并对该试... 详细信息

目的验证甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)(甲肝疫苗)生产场地变更后原生产场地制备的ELISA试剂盒对HAV抗原检测的一致性.方法用原生产场地制备的抗HAV多克隆抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗HAV抗体制备ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行线性、精密度、准确度、专属性和稳定性验证,同时用该试剂盒检测甲肝疫苗中间品的HAV抗原浓度,考察其适用性.结果在新生产场地中ELISA试剂盒的检测线性范围为0.2~6.4 IU/ml,线性决定系数大于0.99.该试剂盒的精密度良好,检测结果的变异系数均小于15%.不同HAV抗原浓度样品的回收率为84%~104%.该试剂盒可特异性检测HAV,不与非HAV及HAV培养基质发生反应.包被抗体的酶标板于37℃放置7 d对检测结果没有影响.该试剂盒检测结果显示,HAV收获液、HAV纯化液和甲肝疫苗半成品的平均HAV抗原浓度分别为213.25、146.70和48.91 IU/ml,符合在生产过程中HAV抗原含量下降的规律.结论原生产场地制备的ELISA试剂盒可用于检测新生产场地生产的甲肝疫苗.

关键词：肝炎抗原,甲型肝炎疫苗,甲型酶联免疫吸附测定

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MPTP诱导树鼩帕金森疾病模型行为学检测方法研究

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实验动物与比较医学 2019年第1期39卷 9-14页

作者：张志成宋庆凯黎晓慧李娜黄鑫袁圆王璇李明学代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急... 详细信息

目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急性PD模型,对照组注射等体积0.9%氯化钠溶液。结果成功建立树鼩急性PD模型。建模1d后,与对照组树鼩相比,模型组树鼩空间利用指数下降、低运动性出现次数(BLM)指数显著升高(P均<0.001),表明模型组空间利用能力受损、活动度下降;模型组右前爪(RF)、左前爪(LF)最大接触面积减少,RF、LF和右后爪(RH)爪印最大接触面积平均压力,以及RF、RH、LF爪印平均压力及四肢平均力量均下降(P均<0.05),反映了树副肌肉僵硬度升高,可以作为PD步态分析的定量指标;0~15 Hz(TI1)震颤显著增强(P<0.01),能较好模拟PD患者静止性震颤的临床表现。结论MPTP致树鼩急性PD模型能较好模拟PD早期的临床表现。Catwalk、FDA检测系统可提供系统、客观、可靠的PD行为学数据。

关键词：帕金森疾病树鼩 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP) 动物模型行为学 Catwalk步态分析系统 FPA分析系统

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抗树鼩CD3ε单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

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中国生物工程杂志 2018年第4期38卷 54-62页

作者：徐婧雯张雪梅吴忠香朱文兵蒋曦巩蔚严丽蔚宋杰李慧董少忠中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

目的：制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法：以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosor... 详细信息

目的：制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法：以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测,筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株,经过3次亚克隆筛选后,制备小鼠腹水单克隆抗体,并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、Western blot和流式细胞荧光分选技术（fluorescence activated cell sorting,FACS）分析其生物学特性。结果：筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为78I、87I、92D1、75II和35C8,腹水单克隆抗体效价分别为1∶10～6、1∶10～6、1∶10～4、1∶10～6、1∶10～3,亲和力解离常数（Kd）分别为1.8×10^-5、2.9×10^-5、4.9×10^-5、7.3×10^-5、3.6×10^-5。5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位,而92D1和35C8识别另一抗原表位。经Western blot检测,HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应。经FACS检测,PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC。结论：成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体,为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础。

关键词：树鼩 CD3ε 单克隆抗体

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寨卡病毒亚洲型与非洲型基因同源性及重组分析

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中国生物制品学杂志 2018年第12期31卷 1317-1321页

作者：林垚文送娇洪珊王晓丹席珏敏陈俊英潘玥叶超孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省虫媒传染病防控研究重点实验室云南普洱665000

目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)亚洲型与非洲型基因组核苷酸序列同源性及结构蛋白C、前膜蛋白(pre-membrane,pr M)核苷酸和氨基酸序列差异,并探讨了ZIKV亚洲型和非洲型位点突变可能产生的后果。方法在GenBank中登录的ZIKV亚洲型和... 详细信息

目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)亚洲型与非洲型基因组核苷酸序列同源性及结构蛋白C、前膜蛋白(pre-membrane,pr M)核苷酸和氨基酸序列差异,并探讨了ZIKV亚洲型和非洲型位点突变可能产生的后果。方法在GenBank中登录的ZIKV亚洲型和非洲型序列中,分别选择5个不同的全长基因组序列,并获得其相应的氨基酸序列,采用BIOEDIT软件进行比对,分析相似度,统计不同型别间结构蛋白C、prM的核苷酸突变和氨基酸替代位点,并采用SimPlot软件分析两个型别间的同源重组。结果 ZIKV亚洲型与非洲型的核苷酸相似性在88. 00%~89. 00%之间;不同型别的结构蛋白C和prM碱基的突变比较显示,C基因共有19个碱基突变,prM基因共有48个碱基突变;氨基酸翻译比对显示,这67个碱基突变均为有效突变。两个型别结构蛋白C和prM编码的289个氨基酸中,占组成比例最多的均为亮氨酸(L),同源重组分析亚洲型与非洲型一致性较高,无重组信号。结论通过对ZIKV亚洲型与非洲型的结构蛋白C、pr M核苷酸序列、氨基酸的比较分析及同源重组分析,为研究ZIKV不同基因型间的生物学和致病性差异提供参考。

关键词：寨卡病毒亚洲型非洲型 C蛋白前膜蛋白氨基酸序列

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氯仿抽提纯化CA 16病毒最优条件的筛选

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中国生物制品学杂志 2018年第3期31卷 282-286页

作者：张也李华杨婷岳磊谢天宏龙润乡罗芳宇杨蓉何鑫谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的筛选氯仿抽提纯化柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CA16)的最优条件。方法根据《中国药典》三部(2015版)的相关要求,选择病毒感染性滴度、残余蛋白、残余牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、残余卡那霉素及残余氯仿含... 详细信息

目的筛选氯仿抽提纯化柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CA16)的最优条件。方法根据《中国药典》三部(2015版)的相关要求,选择病毒感染性滴度、残余蛋白、残余牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、残余卡那霉素及残余氯仿含量等指标,分析氯仿抽提的不同条件及超滤浓缩对纯化产物质量指标的影响。将CA16浓缩病毒液与氯仿按不同体积比进行一抽多洗纯化,分析不同比例氯仿对纯化效果的影响;将CA16超滤浓缩病毒液分别用不同浓度的PBS洗涤,以评价不同离子浓度的PBS洗涤对纯化病毒纯化液质量指标的影响。结果不同浓度的PBS洗涤液、病毒液与氯仿体积比对纯化液病毒感染性滴度均无明显影响,病毒回收率平均为81.7%;随着PBS洗涤次数的增多,洗液中的杂蛋白逐渐减少,氯仿比例及PBS离子浓度对蛋白去除率影响不明显,蛋白去除率均大于82%(82.69%~93.6%),平均去除率88.37%;不同氯仿比例、不同PBS浓度及不同洗涤次数对残余卡那霉素含量无明显影响,结果均低于30 ng/mL,经超滤浓缩后,其含量低于3.0 ng/mL;氯仿抽提纯化残余BSA的去除率可达68.87%,若结合超滤浓缩工艺,残余BSA的去除率可达94.74%;超滤浓缩后纯化病毒液残余氯仿去除率可达98%以上,最终纯化液残余氯仿含量小于6μg/mL。结论氯仿抽提方法结合超滤浓缩可得到符合要求的CA16病毒实验性疫苗。

关键词：柯萨奇病毒A组16型氯仿抽提疫苗质量控制

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肠道病毒71型灭活疫苗灭活验证超速离心条件的优化

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中国生物制品学杂志 2018年第2期31卷 192-194,199页

作者：赵恒袁梅严皎王云飞杨佳蒋国润史磊冯凯杨晓蕾洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71... 详细信息

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71收获液进行超速离心,检测离心前和离心后病毒液的滴度,计算回收率,比较不同条件下离心前后病毒回收效果。结果在转速相同或离心时间相同的条件下,EV71的沉淀效果与离心时间或离心转速呈正相关(R^2从0.77和0.88分别增大到0.99),其中,当离心转速超过40 000 r/min时,不同离心时间下病毒的回收率均在90%以上,当离心时间为120 min,离心转速为45 000 r/min时,病毒的沉淀效果最好,回收率最高,达98%。综合离心时间因素,选择离心条件为45 000 r/min-60 min较适宜(回收率为97%),与45 000 r/min-120 min相比,差异无统计学意义(P>0.05);如将时间减为45 000 r/min-30 min,与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EV71的沉淀效果与离心转速和离心时间呈正相关,即随着离心转速增大和离心时间的延长,病毒的沉淀效果越好、回收率越高。

关键词：肠道病毒71型超速离心回收率

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树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：贾杰代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入,啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状,在生... 详细信息

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入,啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状,在生命科学研究中的局限性日益突出。灵长类动物在进化上与人类更为接近,其生物学特性与人类非常相似,在生命科学研究中有着不可替代的作用,但目前灵长类动物遗传操作困难、研究周期长、成本高。树鼩是一种在进化上比啮齿类更为接近灵长类的小型哺乳动物,其神经功能障碍和感染性疾病等多个系统的关键因子和信号通路与人有保守和独特的特征,同时与灵长类动物比较,具有易饲养、繁殖快、研究成本低等优点,目前已越来越多地应用于生物医学研究领域。本文基于树鼩在生理代谢过程和组织解剖结构方面特点,分析其在生物医学研究中的优势与面临的问题。

关键词：树鼩动物模型生物医学

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CA16感染树鼩肺成纤维细胞模型的建立及其受体SCARB2的表达

CA16感染树鼩肺成纤维细胞模型的建立及其受体SCARB2的表达

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：王文广匡德宣李娜陆彩霞罕园园仝品芬孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

目的探讨建立CA16感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB2... 详细信息

目的探讨建立CA16感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB2蛋白的表达情况,探针法实时荧光定量PCR检测病毒载量,以β-Actin作内参染料法实时荧光定量PCR检测受体SCARB2基因的相对表达量,结合基因序列比对,分析其与感染的相关性。结果 CA16感染TSLF,可引起明显的细胞病变,免疫荧光实验可见病毒和受体SCARB2蛋白,以100TCID50/105 cells的比例感染TSLF可在48 h左右病毒载量达到最高,SCARB2基因有与感染相关的高表达,而其基因序列也与人有较高同源性。结论 CA16可感染TSLF,树鼩SCARB2可参与感染。

关键词： CA16 树鼩肺成纤维细胞感染 SCARB2

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树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：贾杰代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入，啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状，在...

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入，啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状，在生命科学研究中的局限性日益突出。灵长类动物在进化上与人类更为接近，其生物学特性与人类非常相似，在生命科学研究中有着不可替代的作用，但目前灵长类动物遗传操作困难、研究周期长、成本高。树鼩是一种在进化上比啮齿类更为接近灵长类的小型哺乳动物，其神经功能障碍和感染性疾病等多个系统的关键因子和信号通路与人有保守和独特的特征，同时与灵长类动物比较，具有易饲养、繁殖快、研究成本低等优点，目前已越来越多地应用于生物医学研究领域。本文基于树鼩在生理代谢过程和组织解剖结构方面特点，分析其在生物医学研究中的优势与面临的问题。

关键词：

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甲型肝炎病毒疫苗株H2株的连续传代及其基因稳定性

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中华实验和临床病毒学杂志 2018年第1期32卷 80-84页

作者：王东宝曹晗郑勇史小军马忠飞段颖融邓燕孙明波北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析甲型肝炎减毒活疫苗H2株（hepatitis A virus H2 live attenuated vaccine strain）毒种H2M20K7（K7）经连续传代后病毒基因的遗传稳定性.方法将H2株毒种K7用细胞工厂在人二倍体细胞KMB17中进行连续传代后,收获不同代次的病毒... 详细信息

目的分析甲型肝炎减毒活疫苗H2株（hepatitis A virus H2 live attenuated vaccine strain）毒种H2M20K7（K7）经连续传代后病毒基因的遗传稳定性.方法将H2株毒种K7用细胞工厂在人二倍体细胞KMB17中进行连续传代后,收获不同代次的病毒,提取病毒RNA,用二代高通量深度测序方法,测定不同代次病毒（K7,K10,Kll,K13,K15,K18）的全基因序列,对比分析病毒的基因变异率,同时对病毒的感染性滴度进行检测和对比.结果 H2M20K7主代毒种经连续传代后,不同代次病毒的全基因序列总体变异率较低,非同义突变率小于0.58％,基因结构稳定;在5＇NCR非编码区域的基因突变率＜0.1％;在VP1/2 A、2C毒力位点区域突变率小于0.01％;不同代次病毒的感染性滴度维持在7.76～ 8.50 lgCCID50/ml之间,P值为0.981差异无统计学意义.结论 H2M20K7主代毒种、工作毒种、疫苗批病毒及经过连续传代后的各代次病毒基因结构稳定;在5＇NCR非编码区未发生明显突变,毒力相关位点VP1/2 A、2B、2C等关键位点的基因均为减毒特征,变异率极低,未引起病毒毒力特征改变.病毒感染性稳定且符合要求,具有较好的遗传稳定性.

关键词：甲肝病毒H2株基因稳定性二代高通量全基因测序核苷酸序列

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