检索结果-内蒙古大学图书馆

ECHO20病毒株KM／EV20／2010的分离鉴定及其VP1基因序列特征分析

中国病原生物学杂志 2014年第2期9卷 97-100,134页

作者：潘玥邵聪文吉玛朱艳菊张云昆马忠飞刘建生马绍辉中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20（Echovirus20，ECHO20）KM／EV20／2010病毒株，分析其VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离；采用微量细胞病变法，经WHO肠道病毒组合血清... 详细信息

目的分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20（Echovirus20，ECHO20）KM／EV20／2010病毒株，分析其VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离；采用微量细胞病变法，经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对该分离株进行鉴定；采用RT—PCR法扩增病毒VP1基因并进行序列测定，并运用Mega4．0等软件进行分析处理。结果分离毒株经微量中和试验鉴定为ECH020血清型，编号为KM／EV20／2010；经RT—PCR法扩增获得为867bp的VP1基因，与国内分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79．5％～91．7％和98．9％～99．6％，与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为80．2％～83．2％和96．4％～99．6％；在进化树上云南分离株与GenBank中登录的中国国内2001年山东分离株01352和1998年法国分离株94CF1666形成一个进化分支。结论KM／EV20／2010分离株为肠道病毒ECH020型病毒，可用KMB17人二倍体胚肺成纤维细胞分离增殖。

关键词： ECHO 20病毒 VP1基因序列分析

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人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及小鼠血清免疫学评价

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中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 6-10页

作者：贾琴妹吴晋元易山张光明郜岩杨星赵晓南孙茂盛李鸿钧中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、... 详细信息

目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、超滤、分子筛纯化,甲醛灭活,抗原定量检测Al(OH)3吸附制备的实验性疫苗。使用不同剂量(8EU、32EU、128EU、256EU)经肌内注射免疫小鼠,共免疫三次,免疫间隔2周。采用间接ELISA法检测血清特异性抗体效价。结果:通过蚀斑纯化,筛选得到一株纯化的病毒株ZTR-5纯-1,在Vero细胞上适应性后感染性滴度达7.35logCCID50/ml;大量培养收获的病毒原液滴度为7.57logCCID50/ml,制备获得轮状病毒样品抗原含量为2 560EU/ml;经肌内注射,初次免疫后,所有剂量组动物均获得抗体阳转,阳转率为100%;第一次加强免疫后,各组血清特异性抗体水平均明显增高,免疫剂量为128EU和256EU的两组小鼠血清抗体效价均达1∶10 240;第二次加强免疫后,各剂量组(8EU、32EU、128EU、256EU)血清抗体效价依次达1∶5 120,1∶7 456,1∶14 481.54,1∶14 481.54。结论:人轮状病毒ZTR-5株可在Vero细胞上稳定增殖,所制备的疫苗具良好免疫原性,用128EU/2次免疫即可获得良好的免疫效果。

关键词：人轮状病毒 Vero细胞灭活疫苗免疫试验

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联合疫苗的研究进展

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中国疫苗和免疫 2016年第6期22卷 697-701页

作者：牟大超孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

联合疫苗是指由两种或两种以上不同的生物体或提纯抗原,加以佐剂、防腐剂、稳定剂等联合配制而成。联合疫苗可预防多种病原体或同一病原体的不同抗原所引发的疾病,包括多疾病联合疫苗和单疾病多价联合疫苗。随着中国国家免疫规划(Nation... 详细信息

联合疫苗是指由两种或两种以上不同的生物体或提纯抗原,加以佐剂、防腐剂、稳定剂等联合配制而成。联合疫苗可预防多种病原体或同一病原体的不同抗原所引发的疾病,包括多疾病联合疫苗和单疾病多价联合疫苗。随着中国国家免疫规划(National Immunization Program,NIP)的推进,儿童所需接种的第一类疫苗数量逐渐增加,联合疫苗的开发不仅可以减少接种次数、改善依从性、提高疫苗接种率;还能降低疫苗中佐剂和防腐剂的剂量,减少疫苗不良反应。因此,联合疫苗的开发势在必行。本文就国内外联合疫苗的研究进展作一综述。

关键词：联合疫苗免疫原性

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人乳头瘤病毒16型L1基因在毕赤酵母中表达的影响因素分析

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中国生物工程杂志 2017年第10期37卷 1-7页

作者：杨旭黄惟巍姚宇峰刘存宝孙文佳白红妹马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心昆明650118

目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密... 详细信息

目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密码子优化,P16为哺乳动物细胞密码子优化,而W16为野生型序列)分别克隆于毕赤酵母表达质粒p PinkTM-HC(高基因拷贝菌落筛选)和p PinkTM-LC(低基因拷贝菌落筛选),并转化不同蛋白酶缺陷的宿主菌。甲醇诱导24小时后,取菌体样品经Western blot分析L1蛋白的表达。结果:M16显示了最高的表达水平,其次是Y16与P16,而W16几乎无表达。基因序列密码子应用特征分析显示,4个基因的密码子适应指数从高到低依次为Y16、M16、W16和P16。通过自由能和GC含量分析4个序列的mRNA二级结构,Y16为-409.40 kcal/mol和43.85%;M16为-451.50 kcal/mol和47.83%;P 16为-606.50kcal/mol and 64.10%;W16为-384.70 kcal/mol and 38.01%。蛋白酶缺陷菌株L1表达高于野生型菌株,质粒p PinkTM-HC与p PinkTM-LC介导的表达无明显区别。结论:密码子优化操作显著改善了HPV16L1在毕赤酵母中的表达,但表达水平与密码子利用优劣并不完全对应,提示密码子优化仅是部分原因,而mRNA结构与稳定性变化值得探讨。蛋白酶缺陷菌株提高了HPV16L1蛋白的稳定性,显著影响了表达水平。研究证明基因剂量对HPV16L1的表达未产生明显影响。

关键词：表达重组人乳头瘤病毒16主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母

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人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2018年第5期31卷 543-546,551页

作者：钱兴丽任芳芳宋彩花段男李娅娴陈巍赵勇袁梅李亚东俞建昆杨晓蕾洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(KC447455)和PCV2(AY578327)序列,全基因组合成PCV1和PCV2基因序列,以合成的PCV1和PCV2全基因组序列DNA为模板,进行PCR扩增,对PCR反应中的退火温度进行优化。对优化后的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测疫苗生产用细胞KMB_(17)、Vero工作种子批、脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral poliomyelitis vaccine,OPV)收获液、冻干甲型肝炎减毒活疫苗(freeze-dried hepatitis A vaccine,f HAV)成品、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗收获液及成品、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine prepared with Sabin strain,SIPV)收获液及成品的PCV1和PCV2。结果优化后的退火温度为63℃,建立的PCR方法最低可检测出10^(-1)fg/μL的目的基因,仅对PCV基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测生产用细胞KMB_(17)及Vero工作种子批、OPV收获液、f HAV成品、EV71灭活疫苗收获液及成品、SIPV收获液及成品,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,能够用于本所生物制品生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV污染的检测,从而提高生物制品的安全性。

关键词：疫苗细胞猪圆环病毒聚合酶链式反应

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3种ELISA方法与微量细胞中和试验检测SARS-CoV-2抗体滴度的相关性分析

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 719-723页

作者：蒋国润赵恒廖芸范胜涛李丹丹张莹于丽王丽春李琦涵徐兴丽中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白... 详细信息

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)检测SARS-CoV-2灭活疫苗临床试验血清样品的IgG抗体阳转率及中和抗体滴度,并进行微量细胞中和试验与3种ELISA方法的相关性分析。结果中和抗体、S抗体、N抗体和全病毒抗体检测所得抗体阳转率分别为84.3%、91.3%、65.2%和46.6%,抗体几何平均滴度分别为16.6、945.9、72.7和18.8。3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)与微量细胞中和试验检测结果的相关系数(r)分别为0.494、0.371和0.181。结论检测SARS-CoV-2 S抗体水平能在很大程度上反映以抗体水平升高为特征的体液免疫反应的激活情况。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 中和抗体 S抗体 N抗体全病毒抗体

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Sabin株和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗在恒河猴体内不同免疫方案的比较

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中国生物制品学杂志 2013年第6期26卷 750-753页

作者：杨卉娟陈俊英和占龙李华杨耀云叶君岳俊孙强明施海晶马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大疾病传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(Wild strain inactivated poliovirus vaccine,wIPV)在恒河猴体内不同免疫方案的免疫原性。方法将25只恒河猴随机分为5组:sIPV组(免疫3剂sIPV)、sIPV/口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral attenuated poliovirus vaccine,OPV)组(免疫2剂sIPV后,再免疫2剂OPV)、wIPV组(免疫3剂wIPV)、wIPV/OPV组(免疫2剂wIPV后,再免疫2剂OPV)和对照组(免疫3次稀释液M199),每组5只。OPV口服接种,IPV和M199经上臂三角肌处肌肉注射,2剂间免疫间隔时间为1个月。首次免疫前和每剂免疫后1个月采血,分离血清,采用微量中和试验法测定血清中抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体效价。结果除对照组外的4个试验组全程免疫结束后,恒河猴血清中均可检出较高水平的中和抗体,且所有恒河猴血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体全部阳转。Ⅰ型和Ⅲ型抗体免疫应答中,接种sIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种wIPV的2个试验组(P<0.05);Ⅱ型免疫应答中,接种wIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种sIPV的2个试验组(P<0.05)。采用wIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体免疫应答均可获得与单独接种wIPV同样的效果;而采用sIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ型抗体免疫应答效果低于单独接种sIPV,Ⅱ型抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),Ⅲ型抗体第4剂免疫后水平也有所上升。结论 sIPV和wIPV在恒河猴体内均可诱导良好的免疫应答,初步证实了IPV/OPV序贯免疫的可行性,为今后免疫策略的制定提供了一定的实验依据。

关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗 Sabin株野毒株序贯免疫中和抗体

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人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1在大肠埃希菌中的表达

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中国生物制品学杂志 2015年第3期28卷 245-250,256页

作者：杨旭夏烨李亚东金晓媚龙琼孙文佳黄惟巍刘存宝姚宇峰马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子免疫研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心云南昆明650118

目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同... 详细信息

目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同序列特征等构建HPV L1非融合及融合表达重组质粒及HPV L1谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合表达质粒,转化不同宿主菌(大肠埃希菌DH5α、BL21),在不同的温度下(37、20℃)进行IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE分析融合蛋白的表达及其可溶性,Western blot鉴定表达的融合蛋白。结果 HPV 16 L1蛋白在GST融合蛋白形式下获得了高效表达,而非融合表达或硫氧还蛋白融合表达未见明显目的条带;不同的宿主菌未对GST融合蛋白表达水平产生明显影响;在37℃培养条件下,表达的GST融合蛋白以包涵体形式存在,而在20℃培养条件下,部分表达的蛋白以可溶性形式存在;HPV 16 L1基因不同序列获得了类似的表达水平;经酵母密码子优化的HPV 18 L1与HPV 58 L1基因均能以GST融合表达形式获得与HPV 16 L1相似的高效表达。结论在大肠埃希菌中以GST融合形式可获得多基因型别HPV L1蛋白的高效可溶性表达,为病毒样颗粒体外折叠制备奠定了基础,也为其他外源基因在大肠埃希菌中的高效表达提供了参考。

关键词：乳头瘤病毒衣壳蛋白大肠埃希菌表达

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肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）免疫儿童血清中抗脊髓灰质炎病毒及抗甲肝病毒抗体的动态观察

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第4期37卷 290-296页

作者：李菁梁燕林鸿呜张兆勇车艳春廖芸盛吉富赵志梅崔萍芳龙润乡李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 内蒙古阿荣旗疾病预防控制中心阿荣旗162750

目的观察适龄健康婴幼儿接种肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）后血清中抗EV71中和抗体、抗脊髓灰质炎病毒中和抗体及抗甲肝病毒IgG抗体的动态变化。方法收集接种EV71灭活疫苗后受试者的血清进行中和试验检测抗EV71、抗脊髓灰质炎... 详细信息

目的观察适龄健康婴幼儿接种肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）后血清中抗EV71中和抗体、抗脊髓灰质炎病毒中和抗体及抗甲肝病毒IgG抗体的动态变化。方法收集接种EV71灭活疫苗后受试者的血清进行中和试验检测抗EV71、抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体滴度：用ELISA方法检测抗甲肝病毒IgG抗体浓度。结果首剂接种EV7l灭活疫苗后引起儿童血清中抗EV71中和抗体平均几何滴度（GMTs）上升至4．85，第2剂免疫28d后GMTs明显上升至64．37。对这些受试儿童血清内抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体及抗甲肝病毒IgG抗体动态观察发现，0d（EV71疫苗接种前）相比，3个型别的抗脊髓灰质炎病毒中和抗体在28d（第1剂疫苗接种后28d）出现了轻微波动（P〈0．05），在56d（第2剂接种后28d）时I、Ⅲ型抗脊髓灰质炎病毒抗体也有轻微差异，但Ⅱ型已恢复至0d水平（P〉0．05）；抗甲肝病毒IgG抗体水平保持稳定，在观察期间内的波动差异无统计学意义（P〉O．05）。结论EV71灭活疫苗在两剂全程免疫并诱导特异性抗EV71中和抗体的过程中，对儿童体内原先存在的抗甲肝病毒IgG抗体无影响但对3个型别抗脊髓质炎病毒中和抗体有轻微干扰，总体来说抗体变化均不影响免疫应答的临床有效性。

关键词：肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞) 接种儿童抗体动态观察

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1株柯萨奇病毒A组10型毒株在KMB17细胞上的遗传稳定性分析

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中国生物制品学杂志 2022年第7期35卷 813-817页

作者：许丹菡张捷丛山日张名冯昌增黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析柯萨奇病毒A组10型毒株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上增殖的遗传稳定性。方法将V6-19/XY/CHN/2017毒株适应于KMB17细胞,并连续传代培养至15代。分别提取适应前及适应后第5、10、15代病毒RNA,分段对全基因组序列进行RT-PCR扩增、... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒A组10型毒株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上增殖的遗传稳定性。方法将V6-19/XY/CHN/2017毒株适应于KMB17细胞,并连续传代培养至15代。分别提取适应前及适应后第5、10、15代病毒RNA,分段对全基因组序列进行RT-PCR扩增、测序及拼接,利用Maga 7.0、Geneious 6.1.4等软件进行系统进化及同源性分析。结果命名该KMB17细胞适应株为K6-19/XY/CHN/2017,各子代病毒感染性滴度为7.25~7.75 lgCCID_(50)/mL。适应前后4个子代病毒的全基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.99%~100%和99.95%~100%。适应前与适应后第5、10代毒株均无核苷酸和氨基酸序列突变,第15代毒株VP4区域发生1个核苷酸突变(VP4172 A→G)及1个氨基酸突变(VP458 Ile→Val)。结论CV-A10能较好地适应KMB17细胞,K6-19/XY/CHN/2017在KMB17细胞上适应后可保持较高的病毒滴度和遗传稳定性,为后续疫苗研发奠定了实验基础。

关键词：柯萨奇病毒A组10型 KMB17细胞分子特征遗传稳定性

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