检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2022年第6期17卷 481-487页

作者：曹筠嵩杨燕刘忞之王伟中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

目的利用大肠杆菌表达系统对溶酶体代谢酶甘露糖-6-磷酸(M6P)糖基化修饰的关键酶N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸二酯α-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶(UCE)进行异源表达和功能鉴定。方法通过UCE的氨基酸序列分析,分别截去UCE的信号肽、前体肽、跨膜区... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达系统对溶酶体代谢酶甘露糖-6-磷酸(M6P)糖基化修饰的关键酶N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸二酯α-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶(UCE)进行异源表达和功能鉴定。方法通过UCE的氨基酸序列分析,分别截去UCE的信号肽、前体肽、跨膜区、胞浆尾肽等结构域,形成不同形式的截短型UCE。利用促溶标签麦芽糖结合蛋白(MBP)的载体和大肠杆菌表达系统,对不同的截短型UCE进行表达。将表达的可溶性融合蛋白利用Ni离子琼脂糖凝胶进行亲和层析纯化,并利用UDP-Glo试剂盒测定融合蛋白的活性。结果截短型的UCE-MBP融合蛋白能够被可溶性地融合表达,并且能够利用Ni离子琼脂糖凝胶进行亲和层析纯化。去掉其前体肽和仅保留核心区的UCE融合蛋白能够展现出较高的活性。结论利用促溶标签蛋白能够实现UCE在大肠杆菌中可溶性地融合表达,从而能够快速制备大量的UCE,该酶可用于对溶酶体代谢酶体外糖基化的生物催化修饰。

关键词：溶酶体代谢酶 N-糖基化 N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸二酯α-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶异源表达

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基于外泌蛋白质组的酿酒酵母信号肽元件的分析及鉴定

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中国医药生物技术 2018年第4期13卷 319-327页

作者：田雷瑜曹筠嵩刘忞之杨燕王伟中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室

目的分析鉴定酿酒酵母细胞内源性地促进重组蛋白外泌表达的信号肽元件,并应用于重组蛋白的高效合成。方法利用生物信息学软件SignalP4.1、Phobius、Wolf Psort0.2和ProP1.0对已报道的酿酒酵母外泌蛋白质组所对应的信号肽进行计算分析,... 详细信息

目的分析鉴定酿酒酵母细胞内源性地促进重组蛋白外泌表达的信号肽元件,并应用于重组蛋白的高效合成。方法利用生物信息学软件SignalP4.1、Phobius、Wolf Psort0.2和ProP1.0对已报道的酿酒酵母外泌蛋白质组所对应的信号肽进行计算分析,确定目标信号肽功能元件;再构建融合表达载体,转化酵母细胞,对获得的阳性克隆在摇瓶培养条件下外泌蛋白的表达进行测定验证。结果通过生物信息学分析,从酿酒酵母外泌蛋白质组中确定了16个含有prepro区的信号肽功能元件,以敲除外切β-(1,3)-葡聚糖酶1(EXG1)基因的酿酒酵母W303-1b/(35)ES为宿主菌,采用酵母α-交配因子的信号肽功能元件作为对照,由EXG1的信号肽功能元件引导外泌的融合蛋白活性是α-交配因子的3倍。结论组合外泌蛋白质组和生物信息学分析的研究策略可以快速准确地分离鉴定促进异源蛋白分泌表达的信号肽功能元件,可应用于生物活性蛋白的高效表达。

关键词：酿酒酵母菌蛋白分选信号外泌蛋白信号肽元件生物信息学分析 β-(1,3)-葡聚糖酶

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CRISPR/Cas9介导的高产谷胱甘肽原养型酵母工程菌的构建

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生物工程学报 2017年第12期33卷 1999-2008页

作者：周文龙唐亮成凯刘忞之杨燕王伟中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

谷胱甘肽(Glutathione,GSH)是具有多种生理功能的非蛋白质类巯基化合物,已广泛应用于药品、食品等行业,且市场需求量逐年增加。遗传工程育种是提高细胞内GSH含量的重要策略,但在遗传操作过程中使用到的营养缺陷型遗传标记可能会影响菌... 详细信息

谷胱甘肽(Glutathione,GSH)是具有多种生理功能的非蛋白质类巯基化合物,已广泛应用于药品、食品等行业,且市场需求量逐年增加。遗传工程育种是提高细胞内GSH含量的重要策略,但在遗传操作过程中使用到的营养缺陷型遗传标记可能会影响菌株的正常生长,且不利于高密度发酵的进行。为回复工程菌株的营养缺陷型,利用g RNA转录表达框和靶基因同源DNA片段直接共转化酵母细胞,由细胞内表达的Ⅱ型CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)-Cas9)介导的基因组编辑技术将营养缺陷型GSH工程菌株W303-1b/FGP回复为原养型菌株。结果显示,与营养缺陷型菌株相比,原养型菌株生长周期缩短,且可以利用简单的合成培养基进行培养,方便菌株的大规模培养。

关键词： CRISPR/Cas9 谷胱甘肽酿酒酵母营养缺陷型

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海洋链霉菌LS298次级代谢产物研究

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中国科技论文在线精品论文 2017年第5期10卷 534-539页

作者：甄心巩婷朱平中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京 100050

目的:对海洋链霉菌LS298的微量次级代谢产物进行研究.方法:采用Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法对LS298发酵产物进行分离纯化;通过核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)、电喷雾电离质谱(electrospay ionization mass spectrometer,ESI-MS)等波谱分析手段对分离得到的化合物进行结构鉴定.结果:分离得到6个化合物,包括3个星孢霉素类化合物,4'-N-甲基星孢霉素(1)、7-羟基星孢霉素(2)和7-去氢星孢霉素(3);3个其他类化合物,光黄素(4)、N-乙酰基-β-酮-色胺(5)和尼克酰胺(6).结论:LS298菌株的次级代谢产物表现出结构类型的多样性,这也是本菌株的特点.

关键词：药物化学链霉菌次级代谢产物星孢霉素结构鉴定

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转肽酶A在蛋白质和多肽修饰中的应用

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中国医药生物技术 2017年第2期12卷 157-161页

作者：马颖刘忞之王伟中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验实验室/国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

在20世纪90年代末,Navarre和Schneewind首次在金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）中发现了转肽酶A（sortase A）,它催化了表面蛋白与多种革兰阳性菌的肽聚糖骨架的共价结合,从而开启了转肽酶A对蛋白质或多肽作用的研究。

关键词：转肽酶金黄色葡萄球菌共价结合表面蛋白环化反应环肽钙离子浓度炭疽芽胞杆菌细胞因子特异性

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担子菌类真菌新产物研究进展

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菌物研究 2017年第2期15卷 89-111页

作者：巩婷温艳华陈尔东朱平天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室中国医学科学院北京协和医学院药物研究所北京100050 哈尔滨商业大学药学院哈尔滨150076

许多大型药用担子菌被发现具有抗癌、杀菌、降糖、降血脂等活性,成为药物开发的新潜在资源,深受人们青睐。文中对2010年以来的担子菌新结构活性产物根据活性类型进行综述,特别关注了2014年至今中国作者的研究,重点描述次级代谢产物的结... 详细信息

许多大型药用担子菌被发现具有抗癌、杀菌、降糖、降血脂等活性,成为药物开发的新潜在资源,深受人们青睐。文中对2010年以来的担子菌新结构活性产物根据活性类型进行综述,特别关注了2014年至今中国作者的研究,重点描述次级代谢产物的结构及生物活性。

关键词：担子菌次级代谢产物新结构活性

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丰肉结海绵相关青霉菌HLS-216次级代谢产物研究

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药学研究 2017年第2期36卷 67-71页

作者：江蔚新陈尔东巩婷朱平哈尔滨商业大学药学院黑龙江哈尔滨150076 北京协和医学科学院&中国医学科学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

目的研究我国南海水域丰肉结海绵相关青霉菌Penicillium ***-216的次级代谢产物的提取分离方法、结构鉴定及其抗肿瘤、抗炎活性。方法采用大米固体发酵培养,乙酸乙酯提取后,经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高级液相色谱等手... 详细信息

目的研究我国南海水域丰肉结海绵相关青霉菌Penicillium ***-216的次级代谢产物的提取分离方法、结构鉴定及其抗肿瘤、抗炎活性。方法采用大米固体发酵培养,乙酸乙酯提取后,经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高级液相色谱等手段进行分离,并对分离得到的单体化合物应用质谱、核磁共振等技术进行结构鉴定;采用噻唑蓝(MTT)法和Griess法对分离得到的单体化合物进行抗肿瘤、抗炎活性筛选。结果分离得到7个化合物,分别鉴定为:黑麦酮酸F(secalonic acid F,1)、黑麦酮酸D(secalonic acid D,2)、meleagrin(3)、oxaline(4)、对羟基肉桂酰胺(4-hydroxycinnamamide,5)、对羟基苯乙酸甲酯(methyl 4-hydroxyphenylacetate,6)、对羟基苯乙醛(4-hydroxyphenylacetonitrile,7)。结论化合物5和7为首次从青霉菌中分离得到;化合物1和2显示出较强的抗肿瘤活性,化合物4表现出一定的抑制小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成的作用。

关键词：丰肉结海绵青霉菌黑麦酮酸抗肿瘤抗炎

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酵母UDP-葡萄糖合成途径的优化及黄酮葡萄糖苷的合成

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中国医药生物技术 2016年第3期11卷 229-235页

作者：王惠敏杨燕田雷瑜周文龙王伟中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

目的研究在酿酒酵母细胞内高表达大肠杆菌UDP-葡萄糖合成途径的2个关键酶对工程酵母细胞的葡萄糖苷化反应活性的影响。方法利用PCR方法获得大肠杆菌磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(Gal U)基因,构建整合型表达载体,转化酵... 详细信息

目的研究在酿酒酵母细胞内高表达大肠杆菌UDP-葡萄糖合成途径的2个关键酶对工程酵母细胞的葡萄糖苷化反应活性的影响。方法利用PCR方法获得大肠杆菌磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(Gal U)基因,构建整合型表达载体,转化酵母;同时共表达具有催化黄酮葡萄糖苷化的UDP-葡萄糖转移酶,研究摇瓶培养条件下PGM和Gal U基因的表达对工程细胞生物催化黄酮类化合物葡萄糖苷化的影响。结果在酵母细胞内表达大肠杆菌UDP-葡萄糖合成途径的2个关键酶PGM和Gal U,提高了组合表达UDP-葡萄糖转移酶的工程菌生物催化合成野黄芩素-7-O-葡萄糖苷的效率,表明PGM和Gal U基因的高表达能促进UDP-葡萄糖的合成;所构建的工程菌也能催化木犀草素、柚皮素、白杨素、汉黄芩素、木蝴蝶素A、黄芩素、槲皮素以及大豆黄酮等黄酮类化合物的葡萄糖苷化。结论组合表达大肠杆菌PGM和Gal U基因能促进酵母细胞内UDP-葡萄糖的合成,进而提高了工程细胞催化合成黄酮葡萄糖苷的效率。

关键词：黄酮类尿苷二磷酸葡糖酿酒酵母菌葡糖磷酸变位酶葡糖转移酶类

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生物发光共振能量转移技术在蛋白酶活性检测中的应用

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中国医药生物技术 2016年第1期11卷 47-51页

作者：陈成娟王伟中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验实验室/国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京100050

生物发光共振能量转移（BRET）是20世纪中叶在海洋生物,例如维多利亚水母和软体珊瑚虫海肾中发现的一种自然现象[1],能量从生物发光蛋白如荧光素酶（供体）转移到荧光物质（受体）。在软体珊瑚虫海肾中海肾荧光素酶将腔肠素氧化,发出波... 详细信息

生物发光共振能量转移（BRET）是20世纪中叶在海洋生物,例如维多利亚水母和软体珊瑚虫海肾中发现的一种自然现象[1],能量从生物发光蛋白如荧光素酶（供体）转移到荧光物质（受体）。在软体珊瑚虫海肾中海肾荧光素酶将腔肠素氧化,发出波长为480 nm的光,与近距离的海肾绿色荧光蛋白之间发生一个非辐射的能量转移,发出509 nm的光。

关键词：能量转移生物发光转移技术发光蛋白酶活性检测共振应用绿色荧光蛋白

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海洋链霉菌LS298新结构活性物质及其NMR谱学研究

海洋链霉菌LS298新结构活性物质及其NMR谱学研究

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中国菌物学会2016年学术年会

作者：甄心巩婷朱平天然药物活性物质与功能国家重点实验室＆国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室北京协和医学院＆中国医学科学院药物研究所

本文对我国丰肉结海绵相关链霉菌LS298菌株的活性代谢产物进行了研究,从中分离鉴定了2个新化合物Quinomycin G（1）和Cyclo-（L-Pro-4-OH-L-Leu）（2）,同时分离得到两个已知化合物Tirandamycin A（3,1-烯醇-4’-酮式）,Tirandamycin B... 详细信息

本文对我国丰肉结海绵相关链霉菌LS298菌株的活性代谢产物进行了研究,从中分离鉴定了2个新化合物Quinomycin G（1）和Cyclo-（L-Pro-4-OH-L-Leu）（2）,同时分离得到两个已知化合物Tirandamycin A（3,1-烯醇-4’-酮式）,Tirandamycin B（4,1-酮式-4’-烯醇式）。通过MS,NMR和Marfey’s法确定了化合物1和2的平面结构和绝对构型。测定了化合物1对15株药物敏感和耐药菌株的抗菌活性和其对12株肿瘤细胞系的抗肿瘤活性。化合物1对表皮葡萄球菌（Staphylococcuse epidermidis）、金黄色葡萄球菌（***）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）、和粪肠球菌（***）表现出中等的抗菌活性,MIC值为16-64μg/m L;化合物1亦表现出显著的抗肿瘤活性,其中对Jurkat细胞系（人T-细胞白血病细胞系）的活性最高,IC50为0.414μM。同时,我们首次明确提出Tirandamycin B的1-酮式-4’-烯醇式构型,且讨论了替达霉素类化合物1-酮式-4’-烯醇式和1-烯醇-4’-酮式的核磁数据的差异,在13C NMR图谱中,当δC:173.5（C-1）,116.2（C-2）,147.9（C-3）和143.7（C-5）,其结构为1-烯醇-4’-酮式;当δC:181.0（C-1）,124.8（C-2）,143.2（C-3）和137.9（C-5）,其结构为1-酮式-4’-烯醇式。在1H NMR图谱中,当三个烯键质子的化学位移为δH:7.05（H-2）,7.47（H-3）和6.19（H-5）,其结构为1-烯醇-4’-酮式;当δH:7.55（H-2）,7.14（H-3）和5.81（H-5）,其结构为1-酮式-4’-烯醇式。此外,当δH-5＞6.00,其结构为1-烯醇-4’-酮式,反之为另一种构型。

关键词：链霉菌次级代谢产物替达霉素抗菌抗肿瘤

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