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中华血液学杂志 2014年第4期35卷 332-336页

作者：黄文阳邹德慧隋伟薇王婷玉付明伟李增军徐燕赵耀中冯四洲韩明哲邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究自体造血干细胞移植（AscT）一线治疗高危淋巴母细胞淋巴瘤（LBL）患者的疗效及不同诱导治疗方案对其预后的影响。方法纳入1996年至2012年于完全缓解期接受ASCT治疗的30例ujL患者，对其进行回顾性分析。结果①30例患者中男23例... 详细信息

目的研究自体造血干细胞移植（AscT）一线治疗高危淋巴母细胞淋巴瘤（LBL）患者的疗效及不同诱导治疗方案对其预后的影响。方法纳入1996年至2012年于完全缓解期接受ASCT治疗的30例ujL患者，对其进行回顾性分析。结果①30例患者中男23例，女7例，发病中位年龄19（7～53）岁。T-LBL25例，B—LBL5例，其中合并巨大纵隔肿物者14例（46．7％），合并骨髓受累者15例（50．0％）；临床分期Ⅱ期2例，Ⅲ期5例，Ⅳ期23例；年龄调整的国际预后指数（aalPI）积分1分5例，2分14例，3分11例。②中位随访32（10～171）个月，13例患者移植后出现复发和死亡。5年无病生存（DFS）率和5年总生存（OS）率分别为（50．4＋10．7）％和（53．9-4-10．2）％。③根据ASCT前诱导方案的不同分为急性淋巴细胞白血病（ALL）样治疗组和非霍奇金淋巴瘤（NHL）样治疗组。NHL样治疗组12例患者中复发死亡9例，中位DFS和OS时间分别为24和36个月，5年预期DFS和OS率分别为（22．2土12．8）％和（33．3~13．6）％；ALL样治疗组18例患者中复发死亡4例，中位DFS和OS时间未达到，5年预期DFS和OS率分别为（77．84-9．8）％和（77．84-9．8）％；两组间DFS和OS率差异有统计学意义（P值分别为0．022和0．049）。结论对于高危LBL患者，诱导治疗阶段采用较为强烈的ALL样治疗方案获得完全缓解，后续ASCT强化巩固治疗，可以明显提高患者的生存。

关键词：前体细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤造血干细胞移植无病生存总生存

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贴壁法和密度梯度离心法分离经血源性子宫内膜间充质干细胞的比较研究

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天津医科大学学报 2015年第6期21卷 525-529页

作者：袁晴杜雪袁碧波屈野周园石慧天津医科大学总医院妇产科天津300052 武警后勤学院病原生物与免疫学教研室天津300309 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室干细胞医学中心天津300020

目的：比较贴壁法和密度梯度离心法对经血源性子宫内膜间充质干细胞（MB-MSCs）的分离效果。方法：选择25～35岁月经周期正常的健康女性的月经血，分别采用贴壁法和密度梯度离心法分离MB-MSCs并进行传代。镜下观察原代细胞形态变化；对... 详细信息

目的：比较贴壁法和密度梯度离心法对经血源性子宫内膜间充质干细胞（MB-MSCs）的分离效果。方法：选择25～35岁月经周期正常的健康女性的月经血，分别采用贴壁法和密度梯度离心法分离MB-MSCs并进行传代。镜下观察原代细胞形态变化；对比原代及第2、3代细胞传代时间；流式细胞仪检测表面标志物；阿尔辛兰染色检测其成软骨能力。结果：贴壁法分离的原代细胞呈聚集样生长，密度梯度离心法分离的原代细胞6 d后也呈聚集样生长。贴壁法分离原代细胞的传代时间（14.58±1.31）d明显快于密度梯度离心法（19.17±1.34）d，差异有显著意义（P〈0.05）；第2、3代细胞的传代时间两种分离方法差异无统计学意义（P〉0.05）。经流式细胞仪检测，两种方法分离的MB-MSCs阳性表面标志物CD44、CD29、CD105、CD73含量和阴性表面标志物CD31、CD45含量比较差异无统计学意义（P〉0.05），两种方法分离的第3代细胞经成软骨诱导后比较无显著差别。结论：采用贴壁法与密度梯度离心法分离MB-MSCs效果相似，但贴壁法更适用于早期快速获得纯度较高的细胞。

关键词：间充质干细胞子宫内膜经血贴壁法密度梯度离心法

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iPS细胞技术在血液系统疾病中的研究进展及应用

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中国细胞生物学学报 2014年第11期36卷 1567-1572页

作者：汪文君邢文周圆杨逢春中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PS细胞)是指将一些特定的转录因子转入已分化的成体细胞,使其重编程为形态及功能上类似于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)的一类细胞。因此,i PS细胞技术避免了传统ES细胞... 详细信息

诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PS细胞)是指将一些特定的转录因子转入已分化的成体细胞,使其重编程为形态及功能上类似于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)的一类细胞。因此,i PS细胞技术避免了传统ES细胞在临床应用方面的道德伦理问题,使其在再生医学、疾病建模、新药筛选等方面具有巨大优势。近年来,i PS细胞技术在血液系统疾病中的研究及应用取得较大突破,包括体外诱导生成造血干/祖细胞、疾病模型的建立及耐药机制的研究、基因治疗单基因遗传病等。该文对i PS细胞诱导重编程技术在血液系统疾病中的最新研究进展进行了综述。

关键词：诱导性多能干细胞疾病模型基因治疗重编程

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p18^INK4C 调控小鼠T细胞的发育及功能

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中国科学：生命科学 2014年第9期44卷 879-888页

作者：郝莎董芳王娅婕程辉袁卫平程涛中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

p18INK4C属于细胞周期蛋白激酶抑制剂,其突变或缺失与某些肿瘤的发生密切相关,如T细胞白血病,但目前关于p18调控T细胞发育及功能的研究还鲜有报道,其调控机制仍不明确.本研究利用p18基因敲除(p18KO)小鼠,系统地研究了胸腺中T细胞的早期... 详细信息

p18INK4C属于细胞周期蛋白激酶抑制剂,其突变或缺失与某些肿瘤的发生密切相关,如T细胞白血病,但目前关于p18调控T细胞发育及功能的研究还鲜有报道,其调控机制仍不明确.本研究利用p18基因敲除(p18KO)小鼠,系统地研究了胸腺中T细胞的早期发育及成熟T细胞的增殖和活化功能,并利用逆转录病毒的方法在Lin?造血干祖细胞上过表达p18,移植4个月后检测其对T细胞的影响.结果表明,p18的缺失对胸腺T细胞的早期发育影响不明显,但随着p18KO小鼠周龄的增加会促进CD4+CD8+双阳性T细胞的数量,此外,p18还通过影响CD3+成熟T细胞的细胞周期进程及IFN-?,GATA3,Tbx21和Foxp3等的表达增强脾脏T细胞的增殖和活化;进一步在造血干祖细胞上过表达p18后会影响T细胞的发育和成熟,进而纠正T细胞在数量上的异常.本研究阐释了p18在T细胞早期发育及后期活化中的调控机制,并证实可通过在干祖细胞水平改变p18的表达进而影响T细胞的分化,这对p18调控T细胞功能异常及参与T细胞白血病的发生提供了新的理论依据和重要的研究价值.

关键词：细胞周期蛋白激酶抑制剂 p18^INK4C T细胞细胞周期

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胎儿肺组织来源间充质干细胞的分离、培养、鉴定及重编程初探

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中国细胞生物学学报 2014年第5期36卷 570-577页

作者：池颖杨少光徐方运王有为韩之波赵钦军马凤霞陈芳卢士红韩忠朝中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

该文主要研究将进行胎儿肺部组织来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived from fetal lung,FL-MSCs)转变成为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)。首先使用酶消化法对胎儿肺部组织进行分离,然后采用... 详细信息

该文主要研究将进行胎儿肺部组织来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived from fetal lung,FL-MSCs)转变成为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)。首先使用酶消化法对胎儿肺部组织进行分离,然后采用常规方法进行培养并成功获得成纤维细胞样细胞。使用共聚焦技术检测获得的细胞,发现角蛋白表达呈阴性;共聚焦技术检测c-Myc、Oct4、Nanog以及Nestin四个干性相关因子,发现它们呈阳性;检测成纤维细胞样细胞的免疫表型,符合间充质干细胞的表型判断标准;然后进行诱导分化实验,发现这些细胞可以向成脂、成骨细胞分化,经过以上实验鉴定获得的成纤维细胞为FL-MSCs。使用Yamanaka四因子体系对FL-MSCs进行诱导,可以形成类似人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hES细胞)的克隆,采用核型分析、STR检测分析以及畸胎瘤形成实验初步验证获得的克隆为iPS。

关键词：胎儿肺组织来源间充质干细胞 Yamanaka四因子诱导多能干细胞

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Puma在肿瘤和干细胞中作用的研究进展

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中国细胞生物学学报 2014年第10期36卷 1450-1454页

作者：赵蕾袁卫平程涛中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

Puma(p53 upregulated modulator of apoptosis)是2001年发现的Bcl-2家族BH3-only亚家族的一个新成员,参与各种应激刺激诱导的p53依赖和非依赖细胞凋亡过程并扮演一个关键的介导者。Puma参与生命过程内环境稳态的调节,并与一些疾病的发... 详细信息

Puma(p53 upregulated modulator of apoptosis)是2001年发现的Bcl-2家族BH3-only亚家族的一个新成员,参与各种应激刺激诱导的p53依赖和非依赖细胞凋亡过程并扮演一个关键的介导者。Puma参与生命过程内环境稳态的调节,并与一些疾病的发生发展密切相关。近年来,Puma在人类恶性肿瘤发生发展以及干细胞损伤保护等方面的作用越来越受到人们的重视,因此熟悉并掌握Puma诱导细胞凋亡及其在肿瘤形成和干细胞调控方面的作用机制,对以Puma为靶点开发治疗相关疾病的新方法有重要的指导意义。该文就Puma的分子特性、对细胞凋亡的调控及其在肿瘤和干细胞中的作用等方面作一简要综述。

关键词： Puma p53 凋亡肿瘤干细胞

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ABCB5和MDR1对急性髓系白血病耐药的影响

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中国药理学通报 2014年第9期30卷 1214-1219页

作者：李真真张晓龙杨雨琪张晴袁向飞范冬梅中国医学科学院·北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学药学院天津300070

目的探讨ABCB5和MDR1在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)干祖细胞系KG1a和来源于AML病人标本中的表达及对白血病耐药的影响。方法 FACS和Western blot的方法检测KG1a细胞表面ABCB5及MDR1蛋白表达产物P-gp的表达水平;利用lipo... 详细信息

目的探讨ABCB5和MDR1在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)干祖细胞系KG1a和来源于AML病人标本中的表达及对白血病耐药的影响。方法 FACS和Western blot的方法检测KG1a细胞表面ABCB5及MDR1蛋白表达产物P-gp的表达水平;利用lipo2000转染siRNA的方法瞬时干扰ABCB5的表达;FACS检测细胞内Rhodamine123的蓄积;MTT法确定维拉帕米(verapamil,Vera)对KG1a的无毒剂量,并检测KG1a、siABCB5-KG1a及联用无毒剂量维拉帕米的KG1a对阿霉素(adriamycin,ADR)的敏感性;Real time-PCR的方法检测AML病人标本中ABCB5及MDR1的表达水平。结果 KG1a高表达ABCB5和P-gp,Pgp表达量高于ABCB5;siABCB5瞬时干扰可以降低KG1a中ABCB5的表达水平,进而增加KG1a细胞中Rhodamine123的蓄积;siABCB5-KG1a对阿霉素的敏感性提高8.6倍;而联用无毒剂量维拉帕米使KG1a对阿霉素的敏感性提高67.4倍。ABCB5在71例AML临床标本中的表达水平明显高于健康组,其中在38例复发或难治型病例中的表达水平明显高于其余33例化疗敏感型病例(P<0.01),且ABCB5的mRNA表达水平与MDR1呈正相关。结论 ABCB5与已知的P-gp相同,也参与介导AML的多药耐药,这为复发及难治的AML病例的临床治疗提供新的潜在靶点。

关键词： ABCB5 P-gp 急性髓系白血病 siABCB5 多药耐药复发难治

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慢性中性粒细胞白血病CSF3R、ASXL1、SETBP1、JAK2 V617F和CALR基因突变研究

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中华血液学杂志 2014年第12期35卷 1069-1073页

作者：崔亚娟李冰江倩徐泽锋秦铁军张培红张悦肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 北京大学人民医院

目的探讨中性粒细胞白血病（CNL）患者CSF3R、ASXL1、SETBP1、JAK2 V617F和CALR基因突变情况.方法依据2008年WHO造血组织和淋巴组织肿瘤分类标准对12例临床疑诊“CNL”患者进行回顾性诊断.采用直接测序法检测CSF3R、ASXL1、SETBP1和C... 详细信息

目的探讨中性粒细胞白血病（CNL）患者CSF3R、ASXL1、SETBP1、JAK2 V617F和CALR基因突变情况.方法依据2008年WHO造血组织和淋巴组织肿瘤分类标准对12例临床疑诊“CNL”患者进行回顾性诊断.采用直接测序法检测CSF3R、ASXL1、SETBP1和CALR基因突变,采用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）检测JAK2 V617F突变.结果 6例确诊为CNL,2例诊断为意义未明的单克隆免疫球蛋白病（MGUS）伴CNL表现,4例诊断为感染、炎症或肿瘤继发的反应性中性粒细胞增多.6例CNL患者均伴有CSF3R T618I突变,其中1例为CSF3R单独突变,4例合并ASXL1及SETBP1突变,1例合并CALR突变（c.1154-1155insTTGTC）.2例MGUS伴CNL表现及4例反应性中性粒细胞增多患者均不伴有CSF3R、ASXL1、SETBP1或CALR基因突变.所有患者均无JAK2 V617F突变.结论 CSF3R、ASXL1和SETBP1基因突变是CNL患者常见的基因突变,以CSF3R T618I最为常见.将CSF3R、ASXL1和SETBP1基因突变的检测纳入CNL诊断标准可以提高诊断的准确性.

关键词：白血病,中性粒细胞,慢性基因,ASXL1 基因,SETBP1 Gene,ASXL1 Gene,SETBP1

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小剂量沙利度胺和泼尼松联合或不联合达那唑治疗原发性骨髓纤维化患者贫血的疗效比较

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中华血液学杂志 2014年第8期35卷 698-702页

作者：徐俊卿徐泽锋秦铁军李冰方力维张宏丽胡耐博潘丽娟曲士强张悦肖志坚青岛大学附属烟台毓璜顶医院血液科 264000 中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的观察小剂量沙利度胺和泼尼松联合或不联合达那唑对原发性骨髓纤维化（PMF）患者贫血的治疗效果.方法以58例HGB＜100 g/L的PMF患者为研究对象.28例患者接受小剂量沙利度胺和泼尼松治疗（沙利度胺＋泼尼松组）,30例接受小剂量沙利... 详细信息

目的观察小剂量沙利度胺和泼尼松联合或不联合达那唑对原发性骨髓纤维化（PMF）患者贫血的治疗效果.方法以58例HGB＜100 g/L的PMF患者为研究对象.28例患者接受小剂量沙利度胺和泼尼松治疗（沙利度胺＋泼尼松组）,30例接受小剂量沙利度胺和泼尼松联合达那唑治疗（沙利度胺＋泼尼松＋达那唑组）.按照2006年骨髓纤维化研究和治疗国际工作组疗效判断标准评价疗效.治疗后3、12个月检测患者骨髓纤维化程度.结果 58例患者总有效率56.9％（33/58）,其中部分缓解（PR） 1.7％（1/58）,临床改善（CI） 55.2％（32/58）.沙利度胺＋泼尼松组、沙利度胺＋泼尼松＋达那唑组总有效率差异无统计学意义（50.0％对63.3％,P=0.306）,但后者中位有效持续时间和红系临床改善（CI-E）中位有效持续时间优于前者[75（8～206）周对30（8～86）周,P=0.007;61.5（8～194）周对22（8～86）周,P=0.015].两组患者治疗3个月和12个月时骨髓骨髓纤维化程度较治疗前均有显著改善（P值分别为0.000和0.005）.两组不良反应均为1～2级.结论小剂量沙利度胺和泼尼松为PMF患者贫血的有效治疗方案,联合应用达那唑可显著延长疗效持续时间.

关键词：骨髓纤维化,原发性贫血治疗沙利度胺泼尼松达那唑

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一个遗传性铁粒幼细胞贫血家系ALAS2基因K156E突变报道并文献复习

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中华血液学杂志 2014年第2期35卷 142-146页

作者：崔蕊徐泽锋秦铁军张悦肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市第一中心医院

目的报告一个遗传性铁粒幼细胞贫血（CSA）家系并进行文献复习，以提高对CSA发病机制及其治疗的认识。方法检测先证者及其家族成员外周血血常规及铁代谢相关指标；应用基因组-DNAPCR技术扩增先证者及其家族成员6-氨基v酮戊酸合成酶2（AL... 详细信息

目的报告一个遗传性铁粒幼细胞贫血（CSA）家系并进行文献复习，以提高对CSA发病机制及其治疗的认识。方法检测先证者及其家族成员外周血血常规及铁代谢相关指标；应用基因组-DNAPCR技术扩增先证者及其家族成员6-氨基v酮戊酸合成酶2（ALAS2）基因第1-11号外显子，应用直接测序法检测外显子突变状态，采用T载体连接测序鉴定其突变类型。结果先证者血常规检查示小细胞低色素性贫血（血红蛋白84g／L、红细胞平均体积64fl、红细胞平均血红蛋白含量16．5Pg），血清铁44．7μmol／L、血清铁蛋白3123μg／L，转铁蛋白饱和度O．84。基因分析显示先证者与先证者母亲、胞妹及侄女ALAS2基因第5号外显子466碱基A〉G杂合突变，引起156位氨基酸由赖氨酸转变为谷氨酸。家系成员分析示该家系为x-连锁铁粒幼细胞贫血（XLSA），男性ALAS2基因突变半合子发病，女性该基因突变携带者均无贫血表现，仅有红细胞分布宽度的异常。先证者接受持续1年的维生素B。联合去铁治疗，血红蛋白升至98g／L，血清铁蛋白降至1580μg／L。结论该家系为中国一新发现的XLSA家系，ALAS2基因K156E突变为其致病基因；CSA的诊断有赖于相关基因突变分析，维生素B。是CSA的首选治疗药物。

关键词：贫血铁粒幼细胞性 5-氨基酮戊酸合成酶突变治疗

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