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α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞活性氧产生及其激活信号通路的影响

中华医学杂志 2009年第4期89卷 266-270页

作者：于晓红王小明斯琴郭恒怡吴其夏大连医科大学附属第一医院心内科 116011 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理生理系

目的探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧（ROS）产生及其对激活信号通路的影响。方法用小分子RNA干扰（siRNA）技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47^phox亚基；用分子探针2，7-DCF测定... 详细信息

目的探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧（ROS）产生及其对激活信号通路的影响。方法用小分子RNA干扰（siRNA）技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47^phox亚基；用分子探针2，7-DCF测定细胞内ROS的产生量；用RT-PCR测定p47^phox mRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定p47^phox蛋白的表达；用Western印迹测定ERK2及核因子（NF）-κB、应激蛋白（SP-1）和活化因子蛋白的表达。结果TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组高155，4％；α-玉米赤霉醇预处理能够剂量依赖地抑制TNF—α对ROS的诱导效应。TNF-α作用细胞24h后，p47^phox的mRNA表达水平较对照组高212．8％，蛋白的表达也明显高；α-玉米赤霉醇预处理使TNF-α诱导的p47^phox mRNA表达水平低63．0％，蛋白表达水平也明显下降。p47^phox的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生。α-玉米赤霉醇预处理和p47^phox的siRNA均阻断TNF-α对细胞外信号调控激酶的激活和转录因子SP-1的核转位，明显地抑制了NF—κB的核转位。结论α-玉米赤霉醇能够抑制内皮细胞中TNF—α诱导的ROS的产生及由ROS激活的信号转导通路，主要机制是通过抑制NADPH氧化酶p47^phox亚基的表达。

关键词：活性氧肿瘤坏死因子α 内皮细胞 α-玉米赤霉醇

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北京地区流行性腮腺炎野病毒与疫苗病毒基因特征比较

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中华流行病学杂志 2009年第11期30卷 1184-1188页

作者：陈萌张铁钢陈丽娟吴疆杨洁张伟北京市疾病预防控制中心 100013 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

目的比较北京地区流行性腮腺炎病毒流行株和疫苗株的基因特征，初步分析疫苗效果不佳的原因。方法通过病例免疫史分析、病毒分离鉴定、SH基因序列分析，与其他基因型参考株进行同源性比较及血凝素-神经氨酸酶（HN）基因氨基酸关键位点... 详细信息

目的比较北京地区流行性腮腺炎病毒流行株和疫苗株的基因特征，初步分析疫苗效果不佳的原因。方法通过病例免疫史分析、病毒分离鉴定、SH基因序列分析，与其他基因型参考株进行同源性比较及血凝素-神经氨酸酶（HN）基因氨基酸关键位点变异分析。结果病毒分离阳性病例共38例，其中IgM阴性7例。在2007和2008年，病毒分离率、RT-PCR阳性率、IgM抗体阳性率都有明显下降，同时有免疫史的病例增多。实验证明无免疫史的病例病毒分离和IgM抗体阳性率更高。38株病毒均属于F基因型，疫苗株属于A基因型。SH基因流行株之间核苷酸最大差异为5．6％，与疫苗株的差异为16．0％-18．1％。部分北京株SH蛋白中保守的疏水性氨基酸发生变化，如第8位：6株L→F。各流行株之间HN蛋白氨基酸序列最大差异为2．3％，与疫苗株差异为4．2％-5．3％。在HN上决定交叉中和能力的氨基酸位点，北京株与疫苗株存在差异，如在354位和356位，所有北京株与疫苗株都不同。北京株在HN上的N-糖基化位点也和疫苗株存在差异，如在464—466位置上为NCS，疫苗株为NCR。另有18个未知功能的氨基酸位点，所有北京株与疫苗株不同。结论近年北京地区流行的腮腺炎病毒优势株为F基因型，未发现基因型间变异，已存在较大型内差异。北京株和疫苗株在SH和HN蛋白上都存在较大差异。

关键词：流行性腮腺炎病毒疫苗基因型

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内源性脑啡肽与加巴喷丁的脑皮层镇痛机制无关

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中国科学（C辑） 2009年第10期39卷 986-990页

作者：陈绍辉赵晶黄宇光罗爱伦左萍萍杨楠郝文宇中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院麻醉科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005

本研究为探讨加巴喷丁的脑皮层镇痛机制是否与内源性脑啡肽相关.90只小鼠随机分为对照组(C)、假手术组(S)和模型组(M),各组再按不同给药分为生理盐水(P)和加巴喷丁(G)两个亚组(最终分为C+P,C+G,S+P,S+G,M+P,M+G6组).部分坐骨神经结扎2... 详细信息

本研究为探讨加巴喷丁的脑皮层镇痛机制是否与内源性脑啡肽相关.90只小鼠随机分为对照组(C)、假手术组(S)和模型组(M),各组再按不同给药分为生理盐水(P)和加巴喷丁(G)两个亚组(最终分为C+P,C+G,S+P,S+G,M+P,M+G6组).部分坐骨神经结扎2周后开始腹腔给药,给药4周后留取大脑皮层.通过手术侧足机械痛阈和热痛敏的改变来确认神经病理性疼痛模型成功及观察加巴喷丁的疗效.选择S+P,M+P和M+G3组做前脑啡肽原(ppENK)基因表达差异检测,并用Real-TimePCR验证,同时ELISA法测定脑皮层组织脑啡肽含量.M+P与S+P相比较、M+G和M+P相比较,均未见ppENK基因表达有显著性差异;S+P,S+G,M+P和M+G组间脑皮层组织中脑啡肽含量也无显著性差异.研究表明,内源性脑啡肽可能与加巴喷丁的脑皮层镇痛机制无关.

关键词：神经病理性疼痛加巴喷丁脑啡肽脑皮层

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通过核质转运调节细胞凋亡的蛋白质

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第10期25卷 883-888页

作者：李竹石许彩民中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

凋亡,也称Ⅰ型程序性细胞死亡,是细胞在面临严重威胁时发起的保护性主动死亡机制.凋亡对于个体的生长发育及各种生理功能具有不可或缺的作用.作为涉及整个细胞的复杂过程,凋亡的顺利进行有赖于众多凋亡相关因子的协调合作与精确调控.细... 详细信息

凋亡,也称Ⅰ型程序性细胞死亡,是细胞在面临严重威胁时发起的保护性主动死亡机制.凋亡对于个体的生长发育及各种生理功能具有不可或缺的作用.作为涉及整个细胞的复杂过程,凋亡的顺利进行有赖于众多凋亡相关因子的协调合作与精确调控.细胞受到凋亡刺激后,核内的某些蛋白质转运出核,将凋亡信号传递到核外,胞质内的多种蛋白质则转运入核,在细胞核这一信息整合的大本营直接发挥作用.这种双向交流机制在胞核与胞质间建立起密切的联系,同时使得相关蛋白质在特定场所发挥促进或抑制凋亡的作用,确保凋亡信号及时、通畅、有序地传递.因此,蛋白质的核质转运作为介导胞核与胞质物质交换、信号交流的关键机制,在凋亡过程中就显得尤为重要.本文主要就核质转运的机制、通过核质转运调节凋亡的蛋白质及其作用机理作一综述.

关键词：凋亡核质转运核孔复合体

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人羊膜来源成体干细胞的多向分化潜能

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生物工程学报 2009年第5期25卷 754-760页

作者：史明霞李维佳李炳宗李静赵春华昆明医学院第一附属医院血液科昆明650032 苏州大学附属第二医院血液科苏州215004 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程中心北京100005

干细胞治疗被认为是一种非常有潜力的治疗手段,其中成体干细胞由于不存在伦理问题,更为广大学者所青睐。本研究成功从人羊膜间质细胞中分离纯化出具有自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞。首先从羊膜间质细胞中通过极限稀释法进一... 详细信息

干细胞治疗被认为是一种非常有潜力的治疗手段,其中成体干细胞由于不存在伦理问题,更为广大学者所青睐。本研究成功从人羊膜间质细胞中分离纯化出具有自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞。首先从羊膜间质细胞中通过极限稀释法进一步分离得到羊膜来源成体干细胞(Amnion-derived stemcells,ADSC),分析其形态、生长方式及主要的免疫表型,并在体外分别将其向脂肪、成骨、内皮、肝细胞及神经细胞诱导分化。结果发现,ADSC在适宜条件下能够向3个胚层的细胞分化,经连续传代30次,其形态及表型稳定,并仍保持多向分化潜能。证实了ADSC的干细胞特性,可能为细胞治疗及干细胞工程提供种子细胞的新来源。

关键词：羊膜成体干细胞分化

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大鼠心肌细胞培养方法的改良及PE诱导心肌肥大

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中国药理通讯 2009年第2期26卷 76-77页

作者：许家林中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学研究院北京100005

心肌肥大是指心室体积和重量的增加，是心肌细胞对外界环境改变的一种适应性反应，可在短时问内增加心输量、提高泵血功能，使机体适应外界环境的变化。但心肌细胞持续肥大，会导致心肌收缩力下降，最终引起心力衰竭。心肌肥大作为心血... 详细信息

心肌肥大是指心室体积和重量的增加，是心肌细胞对外界环境改变的一种适应性反应，可在短时问内增加心输量、提高泵血功能，使机体适应外界环境的变化。但心肌细胞持续肥大，会导致心肌收缩力下降，最终引起心力衰竭。心肌肥大作为心血管疾病中危害人类健康的主要因素之一，探讨其发病机制，对于预防和治疗心肌肥大具有重要意义。大鼠心肌细胞对于研究心肌肥大非常重要，可使某种单个影响因素只作用于相互分离的心肌细胞，简化研究系统的复杂性。这对于研究治疗心肌肥大药物的药理学作用极其重要，有利于深入研究其药理学方面的分子机制，为今后的临床应用提供有力证据。现今研究者多数是使用胰酶消化液多次反复消化来分离心肌细胞。该方法由于胰酶对心肌细胞有很大损伤，影响了心肌细胞的生长。使用胶原酶替代胰酶进行大鼠心肌细胞消化提取，可获得具有较高细胞活力的心肌细胞。

关键词：心肌肥大大鼠心肌细胞培养方法心肌细胞药理学作用 PE 改良适应性反应

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胎儿骨髓源Flk1^+间充质干细胞的归巢机制

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第14期13卷 2673-2679页

作者：史明霞李静廖联明陈斌李炳宗陈磊赵春华昆明医学院第一附属医院血液科云南省昆明市650032 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程中心北京市100005

背景:间充质干细胞移植后是否成功,依赖于经静脉输注后能否定居于靶器官并长期存活,这个过程被称为归巢。然而,调节和控制间充质干细胞归巢的分子机制目前尚不十分清楚。目的:探讨胎儿骨髓源Flk1+间充质干细胞向骨髓归巢的机制,观察基... 详细信息

背景:间充质干细胞移植后是否成功,依赖于经静脉输注后能否定居于靶器官并长期存活,这个过程被称为归巢。然而,调节和控制间充质干细胞归巢的分子机制目前尚不十分清楚。目的:探讨胎儿骨髓源Flk1+间充质干细胞向骨髓归巢的机制,观察基质细胞衍生生长因子1及其受体CXCR4对干细胞归巢效率的影响,摸索提高其归巢和长期植入效率的方法。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2005-09/2006-07在中国医学科学院、中国协和医科大学组织工程中心完成。材料:Flk1+骨髓间充质干细胞来源于流产胎儿,由天津医科大学第二附属医院妇产科提供。6～8周龄NOD/SCID小鼠购自中国医学科学院实验动物研究所。方法:采用流式细胞仪、实时定量PCR等方法检测特定细胞因子刺激前后Flk1+间充质干细胞CXCR4表达和体外迁移能力的变化。NOD/SCID小鼠预先经全身亚致死量照射后,从尾静脉输入经或未经细胞因子刺激的Flk1+间充质干细胞,对照组注射等体积生理盐水。移植后24h,应用流式细胞仪分析骨髓中供体细胞的含量,或在移植后定期从小鼠的尾静脉取血,分析外周血中白细胞、红细胞及血小板的数量变化。移植后6个月,实时定量PCR法检测小鼠骨髓中的人特异性DNA含量,了解人源细胞的植入情况。结果:Flk1+间充质干细胞的胞浆中有CXCR4表达,在适当细胞因子刺激下,能够在短时间内被诱导至细胞表面表达。通过24h短时间细胞因子刺激,不仅能够上调细胞表面及内部的CXCR4,而且可以增加细胞在体外沿基质细胞衍生生长因子1浓度梯度迁移的活性,促进细胞植入经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠体内后向骨髓的归巢及长期存活,同时也加快了受体小鼠的造血恢复;用CXCR4中和抗体处理的Flk1+间充质干细胞,则明显减少其移植后在受体小鼠中的归巢和植入。结论:基质细胞衍生生长因子1及其受体CXCR4在Flk1+间充质干细胞迁移和归巢中发挥着重要作用,增加细胞表面CXCR4的表达,有助于促进Flk1+间充质干细胞向骨髓归巢和加快受体造血恢复。

关键词：间充质干细胞归巢骨髓基质细胞衍生生长因子1 CXCR4

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B7-H4,一个新发现的T细胞免疫负调节分子

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生命的化学 2009年第6期29卷 794-798页

作者：刘长征杨克恭陈松森中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

抗原提呈细胞调控T细胞免疫是通过B7家族中的一类共激活分子完成的,B7-H4是B7家族中一个新成员。人B7-H4基因位于1号染色体,由六个外显子和五个内含子组成,其中的第六个外显子可用于选择性剪接,最终得到两个不同的产物。B7-H4是T细胞免... 详细信息

抗原提呈细胞调控T细胞免疫是通过B7家族中的一类共激活分子完成的,B7-H4是B7家族中一个新成员。人B7-H4基因位于1号染色体,由六个外显子和五个内含子组成,其中的第六个外显子可用于选择性剪接,最终得到两个不同的产物。B7-H4是T细胞免疫的强弱化子,抑制T细胞增殖和细胞因子分泌。近来研究发现B7-H4蛋白在多种肿瘤组织中大量表达,使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的攻击。以B7-H4分子为肿瘤治疗靶标,为肿瘤免疫治疗提供了一种新方法。

关键词： B7-H4 T细胞免疫肿瘤免疫治疗

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放射损伤对小鼠骨髓间充质干细胞成骨潜能及造血干细胞龛位的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2009年第3期30卷 295-300页

作者：马杰史明霞李炳宗李静房佰俊孙慧赵春华郑州大学第一附属医院血液科河南郑州450052 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院组织工程研究中心北京100005 河南省肿瘤医院血液科河南郑州450008

目的观察放射对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs)体外成骨潜能及体内骨髓造血干细胞(hematologic stemcells,HSCs)龛位的影响。方法分离、培养正常及接受4 Gy放射后不同时间点小鼠BMMSCs,用碱性磷酸酶(a... 详细信息

目的观察放射对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs)体外成骨潜能及体内骨髓造血干细胞(hematologic stemcells,HSCs)龛位的影响。方法分离、培养正常及接受4 Gy放射后不同时间点小鼠BMMSCs,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和实时定量RT-PCR检测成骨分化相关基因,鉴定BMMSCs体外成骨分化潜能的改变,并通过骨组织形态学和免疫组织化学的方法检测放射后小鼠体内成骨细胞及纺锤形的、表达神经钙黏附分子的成骨细胞(spindle-shaped N-cadherin-expressing osteoblasts,SNOs)数量的变化。结果全身照射(total body irradiation,TBI)后早期小鼠BMMSCs的成骨潜能增强,但随后迅速降低;TBI后28 d小鼠骨髓中成骨细胞和SNOs的数量均显著减少。结论4 Gy放射损伤后远期小鼠BMMSCs的成骨潜能显著降低,体内HSCs龛位也明显缩小。

关键词：放射损伤骨髓间充质干细胞成骨潜能骨髓造血干细胞

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大鼠心肌细胞培养方法的改良及PE诱导心肌肥大

大鼠心肌细胞培养方法的改良及PE诱导心肌肥大

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全国第十一届生化与分子药理学学术会议

作者：许家林中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学研究院

心肌肥大是指心室体积和重量的增加,是心肌细胞对外界环境改变的一种适应性反应,可在短时间内增加心输量、提高泵血功能,使机体适应外界环境的变化。但心肌细胞持续肥大,会导致心肌收缩力下降,最终引起心力衰竭。心肌肥大作为心血管疾... 详细信息

心肌肥大是指心室体积和重量的增加,是心肌细胞对外界环境改变的一种适应性反应,可在短时间内增加心输量、提高泵血功能,使机体适应外界环境的变化。但心肌细胞持续肥大,会导致心肌收缩力下降,最终引起心力衰竭。心肌肥大作为心血管疾病中危害人类健康的主要因素之一,探讨其发病机制,对于预防和治疗心肌肥大具有重要意义。

关键词：心肌肥大大鼠心肌细胞

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