检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2001年第5期23卷 450-454页

作者：吴亚宁张俊武张正馨屈秋明陈等中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的关联。方法利用PCR和限制性内切酶酶解,分析阿尔茨海默病患者及正常老年人载脂蛋白E各等位基因、基因型的频率。结果ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4这三个等位基因出现的次数(和频率)... 详细信息

目的研究中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的关联。方法利用PCR和限制性内切酶酶解,分析阿尔茨海默病患者及正常老年人载脂蛋白E各等位基因、基因型的频率。结果ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4这三个等位基因出现的次数(和频率)在56例散发性阿尔茨海默病(AD)患者中分别为3(2.7%)、8475.0%、2522.3%,而在67例健康对照中分别为96.7%、11585.8%、107.5%。ApoEε4等位基因在AD患者中出现的频率明显高于对照组,统计学处理说明其差异有显著性(χ2=10.99P<0.01OR=3.5995%CI=1.54-8.41)ApoEε3等位基因在AD组中出现的频率低于对照组,两组中的差异也有统计学意义(P<0.05)。结论ApoEε4等位基因是AD的危险因素,ApoEε3等位基因在AD的发生中可能具有一定保护作用。

关键词：阿尔茨海默病载脂蛋白E 等位基因型相关性分析

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人类疾病基因定位常用的统计学分析方法

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中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 86-88,96页

作者：孙红霞杜玮南方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

人类疾病，特别是多基因遗传病相关基因的定位，是目前医学遗传学和基因研究中的难点和热点。本文简要介绍疾病基因定位的几种常用分析方法，包括连锁分析法（参数法和非参数法）、关联分析和传递不平衡分析的基本原理和应用范围。

关键词：人类疾病基因定位统计学分析方法连锁分析法

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G_β,G_(βγ)与腺苷酸环化酶Ⅱ在酵母双杂交和三杂交系统中的相互作用

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 115-118页

作者：李旌军鲁宁黄秉仁中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨 G蛋白β和γ亚基在 G_(βγ)与效应器相互作用中的地位 ,特别是γ亚基在此相互关系中的作用。方法利用酵母双杂交和自行构建的酵母三杂交系统分别研究 G_(β 1)和 G_(β 1)γ 2与腺苷酸环化酶Ⅱ (ACⅡ )的相互作用。结果 ... 详细信息

目的探讨 G蛋白β和γ亚基在 G_(βγ)与效应器相互作用中的地位 ,特别是γ亚基在此相互关系中的作用。方法利用酵母双杂交和自行构建的酵母三杂交系统分别研究 G_(β 1)和 G_(β 1)γ 2与腺苷酸环化酶Ⅱ (ACⅡ )的相互作用。结果发现酵母三杂交系统中 AD-β 1，γ 2和 BD-ACⅡ间的相互作用明显强于双杂交系统中 AD-β 1和 BD-ACⅡ的相互作用。对 BD-ACⅡ Q和 AD-β 1在酵母双杂交系统和三杂交系统中的表达进行免疫印迹杂交分析 ,发现其表达水平与β-半乳糖苷酶活力大小无关 ,即酵母三杂交系统和双杂交系统中相互作用的显著差别不是由 BD-ACⅡ Q和 AD-β 1蛋白表达水平的差异所造成。结论 β亚基对维持 G_(βγ)与 ACⅡ的相互作用十分重要 ,而γ亚基的存在显著增强了β亚基与 ACⅡ的相互作用 ,对维持 G_(βγ)与 ACⅡ的高亲和性很重要。

关键词： Gβγ 腺苷酸环化酶Ⅱ 酵母三杂交系统酵母双杂交系统

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人B淋巴细胞活化相关新基因的克隆

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中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 27-31页

作者：芦兴武殷际义崔莲仙中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

分离新的与 B细胞活化相关基因。方法采用差异显示反转录 PCR（ DDRT－ PCR）技术对人扁桃体活化和静止 B细胞 mRNA的差异表达进行分析，差异显示的片段经过 Northern杂交验证后，作为探针进行人活化 B细胞 cDNA文库的筛选。结果差异显... 详细信息

分离新的与 B细胞活化相关基因。方法采用差异显示反转录 PCR（ DDRT－ PCR）技术对人扁桃体活化和静止 B细胞 mRNA的差异表达进行分析，差异显示的片段经过 Northern杂交验证后，作为探针进行人活化 B细胞 cDNA文库的筛选。结果差异显示分析共获得明显的差异表达的标签序列（ expressed sequence tag, EST） 62条，其中主要在静止 B细胞表达的有 32条，在活化 B细胞表达的有 30条。经 Northern杂交验证，共获得阳性的片段 25条。以在活化 B细胞中高表达的 EST30为探针，经 3轮筛选人活化 B细胞文库后获得 1个新的全长为 2 048 bp的 cDNA克隆。该克隆含有 1个 630 bp的开放读码框。其推断的氨基酸序列 N端与酵母的动力蛋白 KAR3部分同源。结论克隆了 1条可能与 B细胞活化相关的新基因。

关键词：差异显示 B淋巴细胞酵母KAR3蛋白

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脆性X智力低下蛋白与NDK/Nm23-H2的相互作用

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中国医学科学院学报 2001年第6期23卷 580-584页

作者：楼蓉梅品超贡金英朱宁寇朝辉吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对... 详细信息

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位。结果(1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆。序列分析表明:该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合。结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子。Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控。这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能。

关键词：酵母双杂交体系脆性X智力低下蛋白人胚海马文库脆性X综合征遗传性疾病

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树胆固醇酯转运蛋白的cDNA和蛋白质结构分析

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中华医学杂志 2001年第21期81卷 1316-1320页

作者：曾武威张坚陈保生吴钢薛红中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的... 详细信息

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的cDNA序列 ,并推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较。结果　获得的树CETPcDNA(在GenBank中的注册号为AF334 0 33)长 16 36bp ,编码 485个氨基酸 ,其成熟蛋白由 477个氨基酸组成 ,比人多一个氨基酸 (Gly318) ,该蛋白与人、家兔的同源性分别为 88%和 82 %。序列中与CETP结合和转运中性脂质功能相关的区域均非常保守 ,但在Asn34 2位的N 糖基化位点缺失 ,可能使其转运胆固醇酯的活性增加 ,利于外周组织和血浆中的胆固醇及其酯的清除。通过对不同种属蛋白序列的比较 ,初步分析了树CETP蛋白与功能相关的结构特点。

关键词：树Qu 动脉硬化胆固醇酯类序列分析 DNA 转运蛋白蛋白质结构分析

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睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopher in beta2)结合区域的确定以及体外结合的证明

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中国医学科学院学报 2001年第5期23卷 462-466页

作者：才迎缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的确定睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopherinbeta2)的结合区域,体外验证BS-63与transportin的结合作用。方法将BS-63C端分成不同长度的片段,采用酵母双杂交技术确定与transportin阳性克隆的结合区域。分别于大肠杆菌中表... 详细信息

目的确定睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopherinbeta2)的结合区域,体外验证BS-63与transportin的结合作用。方法将BS-63C端分成不同长度的片段,采用酵母双杂交技术确定与transportin阳性克隆的结合区域。分别于大肠杆菌中表达上述相互作用片段,并进一步运用pulldown实验在体外验证BS-63与transportin的结合作用。结果BS-63C端与transportin相结合的区域从起始的1.6kb确定至包括一个Ranbindingdomain(RanBD)在内0.6kb的范围内。Pulldown以及Westernblot证实此区域在体外可与transportin相结合。结论在生精细胞中,位于胞质侧的睾丸特异的核孔蛋白BS-63将被转运物向核内的转运过程可能是由transportin协助完成的。

关键词：核孔蛋白 BS-63 transportin 结合区域确定体外结合

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STAT1对hsp90α基因表达的负调控作用

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 356-360页

作者：陈雪松吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α 基因表达的调控作用。方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞，利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α 基因mRNA水平。共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转... 详细信息

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α 基因表达的调控作用。方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞，利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α 基因mRNA水平。共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因质粒，利用定量RT-PCR检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析方法检测42℃ 1 h热激前后Jurkat细胞中STAT1酪氨酸磷酸化状态，用电泳迁移率变更分析（EMSA）检测STAT1与hsp90α 5′基因上游调控区中含有STAT1特异结合元件的双链寡核苷酸片段特异性结合程度。结果 STAT1既可抑制Jurkat细胞hsp90α基因的表达，又能抑制hsp90α基因5′上游调控区驱动的CAT报告基因活性。热激以前Jurkat细胞中的STAT1 701位酪氨酸已有一定程度的磷酸化，热激以后其磷酸化程度明显升高，而且STAT1与hsp90α基因 5′上游调控区中的STAT1结合元件呈特异性结合。结论 STAT1对hsp90α基因的表达具有负调控作用。

关键词： STA1 hsp90∝ 基因表达调控

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热休克诱导基因表达谱的变化

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 361-364页

作者：王太宇吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究细胞在热应激时的基因表达谱变化。方法提取热休克前后Jurkat细胞的总RNA，经逆转录合成cDNA探针后分别与人cDNA表达点阵杂交，再用ESTblot软件进行分析，并用Northern印迹证明基因表达的改变。结果经42℃ 1h热休克的细胞中... 详细信息

目的研究细胞在热应激时的基因表达谱变化。方法提取热休克前后Jurkat细胞的总RNA，经逆转录合成cDNA探针后分别与人cDNA表达点阵杂交，再用ESTblot软件进行分析，并用Northern印迹证明基因表达的改变。结果经42℃ 1h热休克的细胞中有40个基因的mRNA表达升高，16个基因的mRNA表达降低。其中除热休克基因表达显著增加外，原癌基因c-Jun、cdc 样激酶CLK-1基因表达明显增加。整合素integrin α-4基因，转化生长因子TGF-β基因表达显著降低。Northern 印迹证明c-Jun及hsp90α基因表达升高。结论在热应激条件下Jurkat细胞热休克基因、c-Jun、CLK-1基因表达增加，integrin α-4基因、TGF-β基因表达减少。

关键词：人cDNA表达点阵热休克基因表达

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人血管生成素-1的天然反义RNA,Gna-1的克隆及鉴定

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中国科学（C辑） 2001年第2期31卷 125-130页

作者：张可满陈保生吴刚薛红曾武威张坚白玲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

用差异显示－ＰＣＲ方法，从血管内皮细胞中获得一新的ｃＤＮＡ片段，以该片段为探针，从人主动脉ｃＤＮＡ文库中筛选到一个长２１９８ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆，经ＤＮＡ测序及同源性分析，发现该序列中含有与血管生成素－１ＦＤ编码区及３... 详细信息

用差异显示－ＰＣＲ方法，从血管内皮细胞中获得一新的ｃＤＮＡ片段，以该片段为探针，从人主动脉ｃＤＮＡ文库中筛选到一个长２１９８ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆，经ＤＮＡ测序及同源性分析，发现该序列中含有与血管生成素－１ＦＤ编码区及３’端部分非翻译区完全互补的碱基，推测该克隆为体内血管生成素－１的天然反义ＲＮＡ，命名为Ｇｎａ－１，它不编码蛋白质．ＲＴ－ＰＣＲ方法证实，Ｇｎａ－１在人脐静脉内皮细胞及ＥＣＶ３０４中有转录，推测Ｇｎａ－１可能具有调控血管生成素－１的作用，参与血管再造过程．

关键词：差异显示-PCR 血管生成素-1 反义RNA cDNA文库 Gna-1 克隆内皮细胞鉴定

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