检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 1998年第16期43卷 1738-1741页

作者：潘美辉袁建刚杜光伟周彦姚辉强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为了解脑发育和分化的机制 ,利用差异显示技术从 1 3和 33周的胎儿脑中分离到 90个EST .比较GenBank以后发现其中的 74个EST代表新的基因 ,当中的一些与某些脑发育相关的基因同源 .将来自差异显示的 79个EST固定在膜上。

关键词：发育分化胎儿基因差异表达脑分离 EST

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人白细胞介素2受体α链在因第三内含子的克隆与核苷酸序列分析

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基础医学与临床 1998年第5期18卷 51-57页

作者：张晶吴宁华沈 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

应用ＰＣＲ技术扩增了人白细胞介素２受体ａ链（ＩＬ２Ｒα）基因第三内含子２５ｋｂ片段，并成功地克隆到ｐＢＳＳＫ载体中。构建了一系列亚克隆并测定了２５ｋｂ全核苷酸序列，其中２２２８ｂｐ碱基序列为国内外首次测定，其... 详细信息

应用ＰＣＲ技术扩增了人白细胞介素２受体ａ链（ＩＬ２Ｒα）基因第三内含子２５ｋｂ片段，并成功地克隆到ｐＢＳＳＫ载体中。构建了一系列亚克隆并测定了２５ｋｂ全核苷酸序列，其中２２２８ｂｐ碱基序列为国内外首次测定，其数据已被ＧｅｎＢａｎｋ接受，接受号为Ｕ５６３８９。通过计算机分析发现ＩＬ２Ｒα基因第三内含子具有典型的Ｇ↓ＧＵ……Ｐｙｒｉｃｈ（∽１５ｂｐ）ＮＣＡＧ↓Ｇ结构特点，但在３’剪接点５’上游５００ｂｐ范围内未发现分支点结构。

关键词： IL-2Rα基因内含子 PCR 克隆核苷酸序列

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神经酰胺诱导药物敏感型和耐药型细胞凋亡机制的探讨

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第2期14卷 205-211页

作者：金朝晖许彩民陈忠雷潘华珍中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

以药物敏感型细胞株Ｋ５６２／Ｓ和耐药型细胞株Ｋ５６２／Ａ０２为对象．观察原癌基因Ｂｃｌ－２的表达量在两种细胞中的差异，以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力，并利用酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，... 详细信息

以药物敏感型细胞株Ｋ５６２／Ｓ和耐药型细胞株Ｋ５６２／Ａ０２为对象．观察原癌基因Ｂｃｌ－２的表达量在两种细胞中的差异，以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力，并利用酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，酪氨酸磷酸酯酶抑制剂ｖａｎａｄａｔｅ，观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系．结果显示：在Ｋ５６２／Ａ０２中Ｂｃｌ－２的表达量明显高于Ｋ５６２／Ｓ；外源性神经酰胺能成功地诱导Ｋ５６２／Ｓ，Ｋ５６２／Ａ０２细胞凋亡，凋亡细胞具有典型的形态学改变和ＤＮＡ“Ｌａｄｄｅｒ”形成，ＦＣＭ检测出现凋亡细胞峰，但在同样的诱导条件下，Ｋ５６２／Ｓ细胞凋亡明显高于Ｋ５６２／Ａ０２细胞．ＦＣＭ检测ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能显著改变这两种细胞生长周期，但细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期，便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用，ｖａｎａｄａｔｅ单独对细胞地明显作用，但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率．以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Ｂｃｌ－２基因起重要作用，神经酰胺能诱导Ｋ５６２／Ｓ和Ｋ５６２／Ａ０２细胞调亡．

关键词：神经酰胺诱导耐药性细胞凋亡肿瘤药物疗法

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毛细管无胶筛分电泳在苯丙氨酸羟化酶基因短串联重复序列分析及苯丙酮尿症基因诊断中的应用

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中国医学科学院学报 1998年第6期20卷 433-439页

作者：许琪宋昉韩富天林炳承沈岩吴冠芸中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都儿科研究所北京100020 中国科学院化学物理研究所

目的　应用毛细管无胶筛分电泳技术分析苯丙氨酸羟化酶基因内含子 3中四核苷酸 ( TCTA)重复序列的多态性。方法　通过毛细管无胶筛分电泳分离分析特异 PCR产物。结果　在 6 1个正常中国人和 6个苯丙酮尿症家系中共检测到从 2 2 4bp到... 详细信息

目的　应用毛细管无胶筛分电泳技术分析苯丙氨酸羟化酶基因内含子 3中四核苷酸 ( TCTA)重复序列的多态性。方法　通过毛细管无胶筛分电泳分离分析特异 PCR产物。结果　在 6 1个正常中国人和 6个苯丙酮尿症家系中共检测到从 2 2 4bp到 2 6 0 bp连续分布的 1 0种等位基因片段 ,多态信息量为 0 .738。其中 2 6 0 bp等位片段是第 1次在中国人群中被检测到。用这一检测方法对 6个苯丙酮尿症家系进行基因型分析 ,并完成了 1例产前基因诊断。结论　与聚丙烯酰胺变性凝胶电泳相比 ,毛细管电泳具有准确、快速、自动化和高分辨等优点。毛细管电泳技术与 PCR技术的结合在遗传病基因诊断方面具有广泛的应用前景。

关键词：毛细管电泳苯丙酮尿症基因诊断产前诊断

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CD3ε胞浆区2个酪氨酸共同介导T淋巴细胞凋亡

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科学通报 1998年第12期43卷 1299-1304页

作者：何亦平刘彦信郑勇刘音杨桂珍刘士廉郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

CD3ε是T细胞抗原受体复合物 (TCR/CD3)的一个成员 ,在此复合物的组装和介导细胞激活信号的传递中起重要作用 ,其信号传递的功能与其胞内区称之为免疫受体酪氨酸依赖的激活基序 (ITAM )有关 .已有报道人CD8分子的膜外区_跨膜区和CD3ε... 详细信息

CD3ε是T细胞抗原受体复合物 (TCR/CD3)的一个成员 ,在此复合物的组装和介导细胞激活信号的传递中起重要作用 ,其信号传递的功能与其胞内区称之为免疫受体酪氨酸依赖的激活基序 (ITAM )有关 .已有报道人CD8分子的膜外区_跨膜区和CD3ε分子的胞内区组成的融合分子 (CD8_ε)能介导T淋巴细胞激活后凋亡 ,表明单独的CD3分子的ITAM可传递细胞凋亡信号 .进一步以CD8_ε为模板和点突变PCR技术制备了其ITAM中酪氨酸 170 ,181分别和同时突变为苯丙氨酸的突变体 ,克隆入真核表达载体 pcDNA3后 ,转染CD8阴性的人白血病TJurkat淋巴细胞 ,获得了分别表达野生型和各突变型CD8_ε融合分子的细胞株 .以抗CD8单抗分别处理这些细胞株 ,发现抗CD8单抗只能诱导表达野生型CD8_ε分子的细胞激活后凋亡 ,而不能诱导任何表达突变型融合分子的细胞凋亡 ,证明CD3ε_ITAM中的 2个酪氨酸对T淋巴细胞激活和凋亡是缺一不可的 .

关键词：细胞凋亡 CD3ε 酪氨酸 T淋巴细胞白血病

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利用DDRT-PCR技术分析神经生长因子低亲和力受体诱导的细胞凋亡过程中基因表达的差异

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第5期14卷 610-616页

作者：顾继杰黄秉仁蔡良琬中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２神经细胞系Ｒ２Ｌ１在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生．此凋亡可以被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制．利用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术比较了去血清培养的发生凋亡的Ｒ２Ｌ１... 详细信息

转染了Ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２神经细胞系Ｒ２Ｌ１在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生．此凋亡可以被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制．利用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术比较了去血清培养的发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞与有血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｌ１细胞以及去血清培养的不发生凋亡的Ｒ２Ｐ细胞基因表达的差异．克隆了数个特异或差异表达的短ｃＤＮＡ片段，经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实其中两个片段ＬＩＡＲＥＳＴ－１和ＬＩＡＲＥＳＴ－２表达量在凋亡细胞中显著高于不发生凋亡的细胞中，ＧｅｎＢａｎｋ检索表明此二片段为新的ｃＤＮＡ序列并给予登录号Ｕ４７３１５和Ｕ４７３１６．另有一个ｃＤＮＡ片段ＬＩＡＲＣＤ－３在凋亡细胞中受到了明显的抑制，经检索为一已知的与前强啡肽原上游调控区结合的ＤＮＡ结合蛋白ｃＤＮＡ编码区的一部分。

关键词：神经生长因子低亲和力受体细胞凋亡差示PCR

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人工合成表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中的高效表达

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第5期14卷 512-517页

作者：黄秉仁蔡良琬廖洪涛唐申秀周海涛中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

选用酵母菌偏爱密码子人工合成了编码５１个氨基酸的人表皮生长因子（ｈＥＧＦ）基因．将合成基因与编码酵母α因子前导肽８５个氨基酸的ＤＮＡ片段融合后克隆到醇氧化酶基因启动子下游，并构建出多拷贝表达载体．此载体转化甲基营养型... 详细信息

选用酵母菌偏爱密码子人工合成了编码５１个氨基酸的人表皮生长因子（ｈＥＧＦ）基因．将合成基因与编码酵母α因子前导肽８５个氨基酸的ＤＮＡ片段融合后克隆到醇氧化酶基因启动子下游，并构建出多拷贝表达载体．此载体转化甲基营养型酵母株ＧＳ１１５后筛选出整合型ＭｕｔＳＨｉｓ＋基因型菌株．高密度培养及诱导表达后该株可分泌具完好生物活性和正确物理化学性质的人表皮生长因子，产量达１００ｍｇ／Ｌ，经３次柱层析纯度达９５％以上。

关键词：人表皮生长因子甲基营养型酵母高效表达

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓中正常及异常造血干/祖细胞含量分析

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中华血液学杂志 1998年第10期19卷 518-521页

作者：李强张之南刘尔坤沈悌武永吉许彩民中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血液科华西医科大学附属第二医院儿科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：根据阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓造血干／祖细胞的含量，探讨异常细胞获得造血优势的可能原因。方法：骨髓有核细胞以ＣＤ３４ＦＩＴＣ及ＣＤ５９ＰＥ免疫荧光双标记，经流式细胞仪测定不同细胞群内ＣＤ３４... 详细信息

目的：根据阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓造血干／祖细胞的含量，探讨异常细胞获得造血优势的可能原因。方法：骨髓有核细胞以ＣＤ３４ＦＩＴＣ及ＣＤ５９ＰＥ免疫荧光双标记，经流式细胞仪测定不同细胞群内ＣＤ３４＋细胞含量。结果：①正常对照及ＰＮＨ患者骨髓中的ＣＤ３４＋细胞均分布在“淋巴细胞窗”（Ａ窗）及“原始细胞窗”（Ｄ窗）内。②正常对照Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞数分别为（３７０１±８９６）／１０５个细胞、（１１３７３±１５７４）／１０５个细胞；ＰＮＨ患者Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞分别为（１２１５±７４９）／１０５个细胞及（６４２０±２３３７）／１０５个细胞，均较正常对照显著减少（Ｐ＜０．０１）。③患者ＣＤ５９＋细胞群中ＣＤ３４＋细胞的减少比ＣＤ５９－细胞群更为显著，Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ５９－细胞群中ＣＤ３４＋细胞分别相当于ＣＤ５９＋细胞群的５．６２倍、１．８５倍。④正常对照Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞几乎均为ＣＤ５９＋表型（分别为９９．２％±１．０％、９８．７％±０．８％），而ＰＮＨ患者Ａ窗及Ｄ窗内则都以ＣＤ３４＋ＣＤ５９－细胞占据数量优势（分别为７９．３％±１５．５％、８５．９％±７．８％）。结论：ＰＮ?

关键词：血红蛋白尿症 PNH 骨髓造血干细胞流式细胞术

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脊椎动物中枢神经系统发育相关基因的级联调控

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基础医学与临床 1998年第5期18卷 77-80页

作者：金虎林袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

脊椎动物的中枢神经系统是一系列在组成上高度复杂的细胞构成的。它的形成经历了一个极其复杂的发育分化过程。这一过程受到了多种基因的级联调控（ＣａｓｃａｄｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ）。参与这一级联调控网络的基因不仅包括了同源... 详细信息

脊椎动物的中枢神经系统是一系列在组成上高度复杂的细胞构成的。它的形成经历了一个极其复杂的发育分化过程。这一过程受到了多种基因的级联调控（ＣａｓｃａｄｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ）。参与这一级联调控网络的基因不仅包括了同源盒基因等编码转录因子的基因，其它一...

关键词：脊椎动物中枢神经系统发育相关基因级联调控

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混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

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中华医学检验杂志 1998年第2期21卷 92-95页

作者：许琪韩富天范钰林秉承沈岩吴冠芸中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国科学院化学物理研究所

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结... 详细信息

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结果毛细管电泳可检测到２０ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于３～４个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／６００，琼脂糖凝胶电泳可检测到７４ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于１３个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／３。毛细管电泳检测微量目的基因扩增产物的综合灵敏度是琼脂糖凝胶电泳的７５０倍。结论毛细管电泳灵敏度高、重现性好，与ＰＣＲ技术结合可广泛用于各种混合样品中微量核酸分子的检测。

关键词：聚合酶链反庆 SRY基因毛细管电泳基因诊断

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