检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖科学进展 2012年第6期18卷 530-533页

作者：刘杏王述森刘琦高锦兰罗阳中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的研究人生长分化因子5基因(GDF5)c.1118T>G(p.L373R)突变对GDF5蛋白在HEK-293细胞系表达及其亚细胞定位的影响。方法构建pDsRed1-N1-GDF5-WT和pDsRed1-N1-GDF5-L373R载体,分别转染HEK-293细胞,细胞培养72h后通过荧光显微镜观察比较野生型和突变型GDF5蛋白荧光分布情况。结果 GDF5蛋白在HEK-293细胞中成功表达,在荧光显微镜下观察到转染野生型和突变型GDF5的细胞胞浆均匀发出红色荧光,而空载体组的红色荧光则弥散于全细胞,荧光强度均匀一致。结论野生型和突变型GDF5蛋白均定位于HEK-293细胞质。

关键词：生长分化因子5 基因突变蛋白表达 HEK-293细胞系

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小鼠肝癌及肝正常组织B4GalT糖基转移酶家族mRNA表达差异及其对细胞膜相关糖链的影响

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生命科学研究 2012年第1期16卷 48-53页

作者：马汝海王冬青潘忠诚王天骄何群赵雨杰中国医科大学基础医学院化学教研室中国辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院教育部细胞生物学重点实验室生物芯片中心中国辽宁沈阳110001

探讨肝癌模型鼠与正常小鼠肝组织B4GalT(β-1,4-半乳糖转移酶)家族mRNA表达差异以及对细胞膜相关糖链的影响.采用RT-PCR方法检测肝癌模型鼠和正常对照小鼠肝癌组织中B4GalT家族7个成员以及唾液酸α-2,3转移酶ST3GalⅢ、ST3GalⅣ、ST3Ga... 详细信息

探讨肝癌模型鼠与正常小鼠肝组织B4GalT(β-1,4-半乳糖转移酶)家族mRNA表达差异以及对细胞膜相关糖链的影响.采用RT-PCR方法检测肝癌模型鼠和正常对照小鼠肝癌组织中B4GalT家族7个成员以及唾液酸α-2,3转移酶ST3GalⅢ、ST3GalⅣ、ST3GalⅥ、α-1,6-岩藻糖转移酶FUT8 mRNA表达差异,应用凝集素芯片检测细胞膜表面半乳糖、岩藻糖、唾液酸表达情况.结果显示:与正常对照组相比,肝癌模型鼠肝组织中B4GalT-1和B4GalT-3、ST3GalⅣ和ST3GalⅥ、FUT8呈现高表达,肝癌细胞膜半乳糖、岩藻糖、唾液酸类型糖链增加,提示B4GalT-1和B4GalT-3与肝癌细胞膜半乳糖链增加相关.由于细胞Galβ-1,4-GlcNAc糖表位在ST3GalⅢ、ST3GalⅣ或ST3GalⅥ催化下与唾液酸α-2,3连接生成s-lewis x抗原前体,本实验中B4GalT-1和B4GalT-3与ST3GalⅣ、ST3GalⅤ、FUT8 mRNA表达具有相关性,提示B4GalT-1和B4GalT-3可能与ST3GalⅣ、ST3GalⅥ以及FUT4协同作用,导致肝癌细胞膜半乳糖、岩藻糖、唾液酸类型糖链增加.

关键词： B4GalT 肝癌细胞膜糖基化

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pGEX-5X-1-hLMO4原核质粒构建及重组蛋白表达

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东南大学学报（医学版） 2012年第2期31卷 139-143页

作者：张红艳李彦姝姚远王春玉王迪李丰中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 辽宁省人民医院消化内科辽宁沈阳110016

目的:构建hLMO4的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法:hLMO4全长编码基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在BL21大肠杆菌中诱导GST-hLMO4融合蛋白表达,利用Glutathione ... 详细信息

目的:构建hLMO4的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达。方法:hLMO4全长编码基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在BL21大肠杆菌中诱导GST-hLMO4融合蛋白表达,利用Glutathione Sepharose 4B纯化诱导的融合蛋白,并经Western blot鉴定结果。结果:hLMO4编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在*** BL21中IPTG诱导融合蛋白的表达,分子质量约为49 000 Da,成功纯化出GST及GST-hLMO4蛋白,Western blot检测到蛋白表达。结论:构建了hLMO4基因原核表达载体,鉴定了GST-hLMO4融合蛋白表达。

关键词： LMO4 蛋白纯化融合蛋白

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骨髓、羊膜和脂肪来源的间充质干细胞治疗皮肤创伤效果的比较

骨髓、羊膜和脂肪来源的间充质干细胞治疗皮肤创伤效果的比较

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：刘晓玉庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的：比较入骨髓间充质干细胞(hBMSC)、羊膜间充质干细胞(hAMSC)和脂肪间充质干细胞(hADSC)皮下移植对小鼠皮肤损伤模型愈合的促进作用,为临床皮肤损伤后功能性修复提供更有效的治疗方法.方法：体外培养扩增hBMSC,hAMSC,hADSC,取36只... 详细信息

目的：比较入骨髓间充质干细胞(hBMSC)、羊膜间充质干细胞(hAMSC)和脂肪间充质干细胞(hADSC)皮下移植对小鼠皮肤损伤模型愈合的促进作用,为临床皮肤损伤后功能性修复提供更有效的治疗方法.方法：体外培养扩增hBMSC,hAMSC,hADSC,取36只小鼠制作皮肤损伤模型,并随机分为hBMSC移植组,hAMSC移植组,hADSC移植组,和盐水移植组.分别于伤后3,7,10,14天采用创面大体观察、组织学检查方法观察创面愈合情况.体外实验通过transwell小室将hBMSC,hAMSC,hADSC分别与人皮肤成纤维细胞(hFB)共培养,检测各组成纤维细胞的增殖,迁移,趋化,胶原合成,和生长因子VEGF,KGF,bFGF,TGF-β的分泌情况,探讨其促进创面愈合的机制.结果：创伤后3d开始,各组创面逐渐缩小,脂肪间充质干细胞治疗组最为明显,差异有显著性意义(P＜0.05),组织学检查显示,脂肪间充质干细胞治疗组重上皮化明显.体外实验,各组成纤维细胞增殖无显著性差异,脂肪间充质干细胞组迁移,趋化,胶原合成,生长因子分泌明显优于其它组,差异有显著性意义(P＜0.05).结论：脂肪间充质干细胞是治疗皮肤损伤更理想的种子细胞.

关键词：间充质干细胞表皮成纤维细胞皮肤损伤修复

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乳腺癌细胞系中雌激素下调E-钙粘蛋白表达水平

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解剖科学进展 2012年第1期18卷 15-17,21页

作者：张红艳李彦姝王春玉王迪柯强李丰中国医科大学细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室辽宁沈阳110001 杭州师范大学临床医学院附属医院检验科

目的观察雌激素(E2)对乳腺癌MCF7细胞中E-钙粘蛋白基因(CDH)的调控。方法使用Western blot、Real Time PCR分别在蛋白和RNA水平上观察雌激素如何影响E-钙粘蛋白。使用双荧光素酶报告系统检测雌激素如何影响E-钙粘蛋白启动子活性。结果... 详细信息

目的观察雌激素(E2)对乳腺癌MCF7细胞中E-钙粘蛋白基因(CDH)的调控。方法使用Western blot、Real Time PCR分别在蛋白和RNA水平上观察雌激素如何影响E-钙粘蛋白。使用双荧光素酶报告系统检测雌激素如何影响E-钙粘蛋白启动子活性。结果雌激素下调乳腺癌MCF7细胞中E-钙粘蛋白的蛋白和RNA水平,并且能够下调E-钙粘蛋白的启动子活性。结论雌激素下调乳腺癌细胞中E-钙粘蛋白基因,为进一步探讨乳腺癌发病机制提供有力证据。

关键词：雌激素 E-钙粘蛋白乳腺癌MCF7细胞

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纳米金检测单核苷酸多态性的应用进展

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医学研究生学报 2012年第1期25卷 85-88页

作者：孙加司陈思娇史记邵义宋今丹中国医科大学中国医科大学第一医院干部医疗工作部沈阳110001 沈阳工业大学材料科学与工程学院沈阳110870 卫生部教育部细胞生物学重点实验室中国医科大学医学分子生物学研究所沈阳110001

单核苷酸多态性(single nucleoride polymorphism,SNP)与疾病发生的关系的重要性日益受到重视,探讨SNP与各种疾病发生的相关性研究已见于大量报道。传统的检测SNP的方法操作复杂,费时费力,假阳性高,新的SNP检测方法不断出现并应用。纳... 详细信息

单核苷酸多态性(single nucleoride polymorphism,SNP)与疾病发生的关系的重要性日益受到重视,探讨SNP与各种疾病发生的相关性研究已见于大量报道。传统的检测SNP的方法操作复杂,费时费力,假阳性高,新的SNP检测方法不断出现并应用。纳米金法是目前较为成熟的检测技术,文中介绍几种常见的SNP检测方法。

关键词：纳米金单核苷酸多态性

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hLMO3基因全长及截短序列原核表达载体的构建及蛋白诱导表达

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解剖科学进展 2012年第1期18卷 8-11页

作者：刘彤顾卉李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院中心实验室沈阳110001

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达... 详细信息

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hLMO3全长及5个截短基因序列克隆到了原核表达载体pGEX-5X-2中,并经测序鉴定正确。Westernblot在*** Bl21中检测到了相应融合蛋白的表达。结论成功构建hLMO3全长及5个截短基因序列原核表达载体,在*** BL21中诱导表达出GST-LMO3全长及截短融合蛋白。

关键词： hLMO3 工具细胞HEK293 原核表达截短蛋白

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不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王哲施萍刘晓玉王喜良张殿宝庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情...

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情同意，医院伦理委员会批准。分别用两步消化法和组织块法分离培养胎儿皮肤角质形成细胞和成人真皮成纤维细胞。将角质形成细胞按胎龄分为小于28周组和大于28周。在倒置相差显微镜观察两种细胞形态，应用免疫荧光检测角蛋白和波形蛋白在细胞内的表达，划痕实验观察两组角质形成细胞的迁移能力及两组角质形成细胞作用下成纤维细胞迁移能力。

关键词：

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聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞和导入siRNA的研究

聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞...

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王瑞施萍张殿宝刘晓玉庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRN... 详细信息

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRNA干扰目的基因.方法：1.颗粒来源：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒购买于东纳生物科技有限公司.2.实验方法：原代分离人羊膜间充质干细胞(hAMSCs),向人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)中加入10％胎牛血清,含20ug/L碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12培养基,置于37℃,体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱培养,待细胞达到80％-90％融合时用胰酶消化传代.取传至第三代的细胞放入含DMEM/F12培养基的六孔板中.设立2个实验组和1个对照组,分别向两个实验组培养基中加入终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH,对照组仅加入DMEM/F12培养基.3.实验评估：实验组于标记24h后,分别用普鲁士蓝染色和Western-blot方法检测PEI-siGAPDH进入细胞和siGAPDH干扰情况.结果：光镜下观察,发现终浓度为8ug/L的聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒普鲁士蓝染色几乎为100％.Western-blot方法检测,发现终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH干扰组较对照组GAPDH表达减低.结论：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒能标记人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)和导入小干扰RNA.为进一步应用人羊膜间充质干细胞移植治疗提供活体示踪方法奠定实验基础.

关键词：人羊膜间充质干细胞聚乙烯亚胺四氧化三铁磁性纳米颗粒标记转染

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高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：张殿宝施萍庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2...

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2和105/cm2接种于六孔板,使用2ng/mL的TGF-β1作用48h,观察细胞形态变化,应用Realtime PCR和western blot分别检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和ZO-1的转录水平和表达水平：免疫荧光检测E-Cadherin和Vimentin表达。结果：低密度组的HaCaT细胞在TGF-β1处理48h后细胞间隙变大,细胞形态由多角形变为长梭形,高密度组的细胞间隙变大,但形态变化不明显;Realtime PCR和westem blot显示两组上皮细胞标志物E-Cadherin和ZO-1的转录及表达均下调,但高密度组下调比例低于低密度组,间充质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin的转录及表达均上调,上调比例无显著差异;免疫荧光结果发现,高密度组表达E-Cadherin的细胞比率明显高于低密度组,Vimentin的表达无显著差异。结论：高接种密度降低TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的效率。

关键词：

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