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现代肿瘤医学 2018年第17期26卷 2653-2656页

作者：何妍彦孙舟彤张红艳中国医科大学七年制临床医学系辽宁沈阳110122 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

目的:研究Jagged1蛋白和m RNA在人乳腺癌细胞系中的表达。方法:分别使用蛋白印迹法及实时定量聚合酶链式反应检测Jagged1蛋白和基因在人乳腺癌细胞系中的表达情况。结果:Jagged1在不同的人乳腺肿瘤细胞系中蛋白和基因的表达水平不同。结... 详细信息

目的:研究Jagged1蛋白和m RNA在人乳腺癌细胞系中的表达。方法:分别使用蛋白印迹法及实时定量聚合酶链式反应检测Jagged1蛋白和基因在人乳腺癌细胞系中的表达情况。结果:Jagged1在不同的人乳腺肿瘤细胞系中蛋白和基因的表达水平不同。结论:Jagged1蛋白在人乳腺癌细胞系ZR-75-30和MDAMB-231中高表达,Jagged1基因在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,HCC 1937中高表达,Jagged1可能是在人乳腺癌的发展进程中发挥着重要的作用。

关键词： Jagged1 乳腺癌免疫印迹分析

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hLMO3基因全长及截短序列原核表达载体的构建及蛋白诱导表达

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解剖科学进展 2012年第1期18卷 8-11页

作者：刘彤顾卉李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院中心实验室沈阳110001

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达... 详细信息

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hLMO3全长及5个截短基因序列克隆到了原核表达载体pGEX-5X-2中,并经测序鉴定正确。Westernblot在*** Bl21中检测到了相应融合蛋白的表达。结论成功构建hLMO3全长及5个截短基因序列原核表达载体,在*** BL21中诱导表达出GST-LMO3全长及截短融合蛋白。

关键词： hLMO3 工具细胞HEK293 原核表达截短蛋白

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不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王哲施萍刘晓玉王喜良张殿宝庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情...

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情同意，医院伦理委员会批准。分别用两步消化法和组织块法分离培养胎儿皮肤角质形成细胞和成人真皮成纤维细胞。将角质形成细胞按胎龄分为小于28周组和大于28周。在倒置相差显微镜观察两种细胞形态，应用免疫荧光检测角蛋白和波形蛋白在细胞内的表达，划痕实验观察两组角质形成细胞的迁移能力及两组角质形成细胞作用下成纤维细胞迁移能力。

关键词：

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聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞和导入siRNA的研究

聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞...

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王瑞施萍张殿宝刘晓玉庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRN... 详细信息

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRNA干扰目的基因.方法：1.颗粒来源：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒购买于东纳生物科技有限公司.2.实验方法：原代分离人羊膜间充质干细胞(hAMSCs),向人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)中加入10％胎牛血清,含20ug/L碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12培养基,置于37℃,体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱培养,待细胞达到80％-90％融合时用胰酶消化传代.取传至第三代的细胞放入含DMEM/F12培养基的六孔板中.设立2个实验组和1个对照组,分别向两个实验组培养基中加入终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH,对照组仅加入DMEM/F12培养基.3.实验评估：实验组于标记24h后,分别用普鲁士蓝染色和Western-blot方法检测PEI-siGAPDH进入细胞和siGAPDH干扰情况.结果：光镜下观察,发现终浓度为8ug/L的聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒普鲁士蓝染色几乎为100％.Western-blot方法检测,发现终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH干扰组较对照组GAPDH表达减低.结论：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒能标记人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)和导入小干扰RNA.为进一步应用人羊膜间充质干细胞移植治疗提供活体示踪方法奠定实验基础.

关键词：人羊膜间充质干细胞聚乙烯亚胺四氧化三铁磁性纳米颗粒标记转染

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hβ-arrestin2基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

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现代肿瘤医学 2015年第9期23卷 1198-1200页

作者：刘彩红毛琪郭文东朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞病理生物学研究室细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 哈尔滨医科大学大庆校区医学检验与技术学院免疫教研室黑龙江大庆163319

目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测... 详细信息

目的:构建p EGFP-C1-β-arrestin2融合蛋白表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:以p GEX-5X-1-β-arrestin2为模板,PCR法扩增hβ-arrestin2编码序列,亚克隆至p EGFP-C1中,p EGFP-C1-β-arrestin2经双酶切初步鉴定再送测序公司检测正确后瞬时转染人胚肾细胞HEK293,Western blot检测融合蛋白表达。激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白在HEK293细胞中的分布。结果:hβ-arrestin2编码序列被成功克隆至p EGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为77k Da,p EGFP-C1-β-arrestin2定位于HEK293细胞的细胞质中。结论:成功构建hβ-arrestin2基因真核表达载体,证实了融合蛋白定位在HEK293的细胞质中。

关键词： hβ-arrestin2基因蛋白质印记绿色荧光蛋白

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高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：张殿宝施萍庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2...

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2和105/cm2接种于六孔板,使用2ng/mL的TGF-β1作用48h,观察细胞形态变化,应用Realtime PCR和western blot分别检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和ZO-1的转录水平和表达水平：免疫荧光检测E-Cadherin和Vimentin表达。结果：低密度组的HaCaT细胞在TGF-β1处理48h后细胞间隙变大,细胞形态由多角形变为长梭形,高密度组的细胞间隙变大,但形态变化不明显;Realtime PCR和westem blot显示两组上皮细胞标志物E-Cadherin和ZO-1的转录及表达均下调,但高密度组下调比例低于低密度组,间充质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin的转录及表达均上调,上调比例无显著差异;免疫荧光结果发现,高密度组表达E-Cadherin的细胞比率明显高于低密度组,Vimentin的表达无显著差异。结论：高接种密度降低TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的效率。

关键词：

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人RNF6基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的表达

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解剖科学进展 2011年第5期17卷 461-463,467页

作者：刘彤李洋李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学 94期临床医学辽宁沈阳110001

目的构建人hRNF6基因的原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法提取前列腺癌细胞CWR22Rv1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导GST-hRNF6融合蛋白表达,并经免... 详细信息

目的构建人hRNF6基因的原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法提取前列腺癌细胞CWR22Rv1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导GST-hRNF6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hRNF6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在*** BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量为104KD,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建基因原核表达载体,诱导表达出GST-RNF6融合蛋白。

关键词：人hRNF6基因原核表达融合蛋白 E.coli BL21

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EGF激活PAK1对人羊膜间充质干细胞体外迁移的重要作用

EGF激活PAK1对人羊膜间充质干细胞体外迁移的重要作用

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：李彩虹施萍庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)能否促进人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cell,hAMSC)增殖和定向迁移及其机理.方法：酶消化法体外分离hAMSCs,37℃,5％的CO2培养箱中培养.免疫细胞化学方法检...

目的：研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)能否促进人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cell,hAMSC)增殖和定向迁移及其机理.方法：酶消化法体外分离hAMSCs,37℃,5％的CO2培养箱中培养.免疫细胞化学方法检测干细胞表面标志波形蛋白、CD44、*** chamber法观察EGF浓度梯度对hAMSCs定向迁移的影响.Transwell小室测定EGF对hAMSCs迁移的作用,及EGFR抑制剂AG1478、PI3K抑制剂LY294002、ERK抑制剂U0126对EGF作用的影响.蛋白免疫印迹法检测EGF处理后EGFR、AKT、ERK的磷酸化水平的变化,分析其与细胞迁移的关系.结果：使用Dunn chemotaxis chamber对EGF刺激后的hAMSC进行超过两小时的细胞运动研究,发现经线性浓度梯度的EGF刺激hAMSC后,其表现为特异性的定向迁移,平均迁移率为6.45μm/h.同时EGF还能增加表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白酶B(AKT)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK)的磷酸化水平.EGF诱导的ERK活性能被EGFR阻滞剂AG1478和PI3K阻滞剂LY-294002所抑制.我们还发现EGF调节PAK1信号通路很可能与hAMSC的定向迁移相关.此外,AG1478、LY-294002、U0126(ERK阻滞剂)能够减弱EGF促进的hAMSC定向迁移.结论：我们的研究表明EGF诱导的hAMSC增殖和迁移受EGFR调控—EGFR激活下游PI3K/AKT和ERK信号通路,并且hAMSC的迁移与PAK1相关.

关键词：

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EGF作用人羊膜间充质干细胞创伤修复相关蛋白的Seq-RNA表达

EGF作用人羊膜间充质干细胞创伤修复相关蛋白的Seq-RNA表达

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：李彩虹施萍张殿宝刘晓玉张涛庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8;转化因子1,β的表达水平.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞用免疫...

目的检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8;转化因子1,β的表达水平.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞用免疫细胞化学法和流式细胞术检测细胞表面抗原;用骨软骨脂肪表皮诱导分化培养基进行诱导分化.EGF100ng/ml作用hAMSC,分别提取hAMSC和EGF作用hAMSC总RNA,进行RNA-Seq分析.用qRT-PCR检测验证.结果培养的人羊膜间充质干细胞呈梭形,旋涡样生长.通过流式细胞术检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD44,CD90,CD105;免疫细胞化学法检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD90,CD73,***在骨,软骨,脂肪,表皮诱导分化培养基中可向成骨细胞、软骨和脂肪细胞及表皮细胞分化.Seq-RNA表达谱测序涉及创伤修复12个相关的表达基因,其中,上调基因9个(BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2);下调基因3个(C3、NGF、OLR1).并经qRT-PCR检测验证得到证实.结论人羊膜间充质干细胞具有多向分化的潜能和干细胞的生物学特性,并能在一定诱导条件下分化为表皮细胞;表达伤口愈合相关蛋白BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2.这一结果支持了人羊膜间充质干细胞在创伤修复中的应用.

关键词：

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RGS5在乳腺癌组织和细胞系中的表达和定位

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现代肿瘤医学 2018年第23期26卷 3713-3716页

作者：孙舟彤何妍彦张红艳中国医科大学七年制临床医学系辽宁沈阳110122 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

目的:探讨G蛋白信号转导调节蛋白5(RGS5)在人乳腺癌细胞系中的表达。方法:提取人正常乳腺上皮细胞HBL100,人乳腺癌细胞系MCF-7,ZR-75-1,ZR-75-30,MDA-MB-231,HCC1937的总蛋白和总RNA,提取细胞的总蛋白和总RNA进行蛋白免疫印迹和实时定量... 详细信息

目的:探讨G蛋白信号转导调节蛋白5(RGS5)在人乳腺癌细胞系中的表达。方法:提取人正常乳腺上皮细胞HBL100,人乳腺癌细胞系MCF-7,ZR-75-1,ZR-75-30,MDA-MB-231,HCC1937的总蛋白和总RNA,提取细胞的总蛋白和总RNA进行蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测RGS5的表达。共聚焦激光扫描显微镜观察RGS5胞内定位;免疫组化检测RGS5在乳腺肿瘤组织中表达情况。结果:MDA-MB-231细胞系中RGS5基因表达上调,MCF7和ZR-75-1细胞系中RGS5蛋白表达提高。结论:RGS5在乳腺癌细胞的高表达可能参与其生长和转移,揭示RGS5可能是人乳腺肿瘤的治疗靶点。

关键词： RGS5 乳腺癌蛋白表达

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