检索结果-内蒙古大学图书馆

吉林大学学报（医学版） 2016年第6期42卷 1054-1058,I0011页

作者：霍云龙王春玉赵越中国医科大学盛京医院病理科辽宁沈阳110003 中国医科大学基础医学院染色质生物学研究室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

目的:采用果蝇S2细胞表达FLAG-Mu2蛋白,观察其亚细胞结构定位并纯化鉴定FLAG-Mu2质粒蛋白复合物,为Mu2蛋白的研究提供依据。方法:FLAG-Mu2转染果蝇S2细胞后表达FLAG-Mu2融合蛋白,共聚焦激光扫描显微镜下观察FLAG-Mu2蛋白的亚细胞定位,... 详细信息

目的:采用果蝇S2细胞表达FLAG-Mu2蛋白,观察其亚细胞结构定位并纯化鉴定FLAG-Mu2质粒蛋白复合物,为Mu2蛋白的研究提供依据。方法:FLAG-Mu2转染果蝇S2细胞后表达FLAG-Mu2融合蛋白,共聚焦激光扫描显微镜下观察FLAG-Mu2蛋白的亚细胞定位,并通过核浆分离蛋白提取实验观察细胞核提取物中FLAG-Mu2蛋白的表达情况;采用免疫沉淀技术沉淀FLAG-Mu2复合物,并对其进行纯化及质谱测序以确定蛋白复合物的组分。结果:共聚焦激光显微镜下观察,FLAG-Mu2蛋白主要表达于细胞核中。核浆分离蛋白提取检测,融合蛋白相对分子质量约为140 000,主要存在于细胞核提取物中。纯化FLAG-Mu2蛋白复合物并进行蛋白质质谱分析,FLAG-Mu2复合物中可能含有pif1A、CG31782、mip120、CG31690和G protein-sa60A。结论:FLAG-Mu2蛋白在果蝇S2细胞中主要定位于细胞核,FLAG-Mu2蛋白复合物中有5种可能的蛋白组分。

关键词： Mu2蛋白融合蛋白亚细胞结构定位相互作用蛋白筛选

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CCR5介导6T-CEM细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层能力分析

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基础医学与临床 2008年第7期28卷 702-706页

作者：马怡然尚德淑赵伟东方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室发育生物学教研室

目的为进一步研究T细胞在阿尔茨海默病(AD)患者脑内发挥的作用,探讨CCR5在6T-CEM穿过人脑微血管内皮细胞(HBMECs)过程中所发挥的生物学功能。方法应用免疫荧光和Western blot等技术,集中探讨了HBMECs膜受体CCR5在6T-CEM细胞穿过HBMECs... 详细信息

目的为进一步研究T细胞在阿尔茨海默病(AD)患者脑内发挥的作用,探讨CCR5在6T-CEM穿过人脑微血管内皮细胞(HBMECs)过程中所发挥的生物学功能。方法应用免疫荧光和Western blot等技术,集中探讨了HBMECs膜受体CCR5在6T-CEM细胞穿过HBMECs过程中作用。结果在6T-CEM细胞与HBMECs单层单独孵育过程中,引起HBMECs膜受体CCR5表达变化;HBMECs膜受体CCR5的高表达使6T-CEM细胞穿过HBMECs单层能力增强。结论HBMECs膜受体CCR5参与了6T-CEM细胞穿过HBMECs单层过程。

关键词：趋化因子受体5 人T淋巴细胞白血病细胞系人脑微血管内皮细胞

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基于核酸适配体和量子点的胃癌靶向成像研究

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中国医科大学学报 2023年第6期52卷 499-504页

作者：孙诗涵马一诺王群李鑫巴微李婉明中国医科大学卫生健康委员会细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室生命科学学院分子细胞生物学教研室沈阳110122

目的构建一种基于适配体W3和量子点(QD)的探针W3-QD,实现胃癌细胞系和临床胃癌组织的靶向成像。方法通过流式细胞术检测核酸适配体W3与SGC-7901细胞的结合情况;采用生物素-链霉亲和素的交联方法,将核酸适配体W3与QD偶联形成W3-QD,利用... 详细信息

目的构建一种基于适配体W3和量子点(QD)的探针W3-QD,实现胃癌细胞系和临床胃癌组织的靶向成像。方法通过流式细胞术检测核酸适配体W3与SGC-7901细胞的结合情况;采用生物素-链霉亲和素的交联方法,将核酸适配体W3与QD偶联形成W3-QD,利用荧光染色观察W3-QD探针对胃癌细胞SGC-7901以及混合细胞中SGC-7901的成像情况;分别采用FAM-W3和QD-W3对SGC-7901细胞进行成像,结果显示QD探针具有更高的灵敏度和光稳定性;构建荷瘤裸鼠模型探究W3-QD探针对体内肿瘤细胞的靶向成像情况;收集临床胃癌组织样本,通过组织石蜡切片及荧光染色证明W3-QD探针对胃癌组织具有特异性识别能力。结果W3-QD探针能够对胃癌细胞SGC-7901进行特异性成像,且在人类正常胃黏膜上皮细胞GES-1存在的情况下,仍然能够在混合细胞中特异性识别胃癌细胞SGC-7901。与FAM-W3探针相比,W3-QD探针表现出良好的抗漂白性、稳定性和灵敏性。W3-QD对胃癌细胞和组织有良好的特异性。结论将核酸适配体W3与QD结合能够实现胃癌的靶向成像,可作为一种胃癌早期诊断的工具。

关键词：适配体量子点胃癌靶向成像诊断

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ERα的辅调节因子与乳腺癌关系的研究进展

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生命科学 2011年第8期23卷 817-823页

作者：李丹妮赵越中国医科大学沈阳110001 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室沈阳110001

雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件(estrogen response element,ERE),进而诱导靶基因转录。ERα招募... 详细信息

雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件(estrogen response element,ERE),进而诱导靶基因转录。ERα招募辅调节因子(共激活子和共抑制子)参与ERα介导的基因转录调控。辅调节因子主要通过乙酰化、磷酸化、甲基化等表观遗传机制参与转录调控,影响靶蛋白表达水平。ΕRα介导的基因转录调控在乳腺癌的增殖、分化、侵袭转移等过程中发挥重要作用。综述在ERα介导的基因转录调控中几类辅调节因子对乳腺癌发生发展的影响。

关键词： ERα 辅调节因子转录调控表观遗传学乳腺癌

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野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达

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吉林大学学报（医学版） 2014年第1期40卷 27-30页

作者：刘彤李丹妮李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段... 详细信息

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG。将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达。结果:PCR扩增出约200bp大小的野生型和失活型PAK1AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000。结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1AID的融合蛋白。

关键词： p21活化激酶1 自我抑制域失活型(L107F) 真核表达 GST标签

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针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体的构建及功能鉴定

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中国医科大学学报 2016年第11期45卷 968-972,976页

作者：蔡莹刘柳连博文陈澄中国医科大学基础医学院发育细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122

目的设计构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,以用于制备相关转基因小鼠,并在体外验证其有效性。方法剔除pc DNA3.1载体的CMV启动子以及多克隆位点,然后接入带有LacZ-fLoxP插入失活的小鼠U6启动子并引入适当的酶切位点... 详细信息

目的设计构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,以用于制备相关转基因小鼠,并在体外验证其有效性。方法剔除pc DNA3.1载体的CMV启动子以及多克隆位点,然后接入带有LacZ-fLoxP插入失活的小鼠U6启动子并引入适当的酶切位点,装入设计好的shRNA片段,测试shRNA抑制Chmp1b表达的效率与专一性,检查Cre重组酶介导位点特异性重组去除LoxP位点之间的lac基因后U6启动子活性恢复情况。结果设计的shRNA片段可明显降低Chmp1b的表达,抑制效率达90%以上;成功构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,插入U6启动子中的LacZ-fLoxP片段既可以控制U6启动子活性又可以起到报告基因的作用。结论针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体可以用于制备相关转基因小鼠。

关键词： shRNA Chmp1b Cre/LoxP 转基因载体构建

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基于核酸适配子W3量子点探针的转移性大肠癌靶向成像

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中国组织化学与细胞化学杂志 2016年第3期25卷 205-210页

作者：李婉明王蒴周琳琳方瑾中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室沈阳110001 沈阳农业大学分析测试中心沈阳110001

目的核酸适配子W3偶联量子点QD605制备特异性探针(W3-QD),并对大肠癌细胞以及临床大肠癌组织石蜡切片标本进行靶向成像。方法荧光显微镜分析W3-QD对混合培养细胞中靶细胞LoVo的特异性识别能力;利用W3-QD对不同种类细胞进行特异性成像并... 详细信息

目的核酸适配子W3偶联量子点QD605制备特异性探针(W3-QD),并对大肠癌细胞以及临床大肠癌组织石蜡切片标本进行靶向成像。方法荧光显微镜分析W3-QD对混合培养细胞中靶细胞LoVo的特异性识别能力;利用W3-QD对不同种类细胞进行特异性成像并扫描定量,同时利用流式细胞术对其进行验证;进一步利用W3-QD对临床大肠癌患者组织标本进行特异性成像。结果 W3-QD能够特异性识别混合细胞培养中的LoVo细胞,并能够对不同种类的细胞进行定量成像,与流式细胞术的结果一致;将W3-QD进一步用于临床患者组织标本上,能对转移性大肠癌患者的癌组织进行靶向成像作用。结论核酸适配子-量子点(W3-QD)探针荧光检测技术可应用于转移性大肠癌患者癌组织的靶向成像。

关键词：核酸适配子转移性大肠癌量子点靶向成像

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经ibeB基因转染的鼠胚胎干细胞分化的研究

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科学通报 2005年第4期50卷 340-343页

作者：尚德淑方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

ibeB 是一个致脑膜炎大肠杆菌 K1 株中参与大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞的基因. 以 ibeB基因转染鼠胚胎干细胞, 结果表明, 大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭蛋白IbeB不但具有“侵袭”功能, 而且可诱导真核细胞向神经样细胞分化, 经 ibeB... 详细信息

ibeB 是一个致脑膜炎大肠杆菌 K1 株中参与大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞的基因. 以 ibeB基因转染鼠胚胎干细胞, 结果表明, 大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭蛋白IbeB不但具有“侵袭”功能, 而且可诱导真核细胞向神经样细胞分化, 经 ibeB 基因稳定转染的鼠胚胎干细胞能特异性表达神经前体细胞标志分子——nestin. GFP 标记的活细胞观察显示外源性 IbeB 蛋白定位于细胞核. 上述结果提示 ibeB基因可能在调控 nestin 表达过程中发挥功能, 这为研究 nestin 基因的表达调控提供了资料.

关键词： B基因鼠胚转染胚胎干细胞脑微血管内皮细胞侵袭分化表达调控活细胞蛋白定位

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GST-HDAC4融合蛋白载体的构建及其蛋白表达

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中国医科大学学报 2013年第2期42卷 149-151页

作者：邵阳光刘姣李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达和纯化。方法用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转... 详细信息

目的构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达和纯化。方法用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌BL21,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并纯化获得目的蛋白。Western blot检测重组质粒的表达。结果酶切鉴定和测序结果显示,GST-HDAC4融合蛋白原核表达载体构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot结果显示,成功获得有生物活性的GST-HDAC4融合蛋白。结论成功构建了HDAC4原核表达载体,获得有生物活性的GST-HDAC4蛋白。

关键词： GST—HDAC4 原核表达融合蛋白

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雌激素受体ERα的功能调控及相关疾病的研究进展

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中国细胞生物学学报 2011年第1期33卷 65-71页

作者：刘晓霞翟曜耀赵越中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室染色质生物学研究室沈阳110001

雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)是依赖配体活化转录因子的核受体家族成员之一,参与靶细胞的增殖和分化。ERα活化的经典途径是与雌激素结合后直接作用于靶基因上游的雌激素受体反应元件(ERE),从而诱导靶基因转录。雌激素受体的... 详细信息

雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)是依赖配体活化转录因子的核受体家族成员之一,参与靶细胞的增殖和分化。ERα活化的经典途径是与雌激素结合后直接作用于靶基因上游的雌激素受体反应元件(ERE),从而诱导靶基因转录。雌激素受体的功能受许多因子调节,包括与之结合的配体、DNA上的顺式元件、募集的辅助调节因子及细胞环境等。在雌激素受体相关疾病中,除乳腺癌和子宫内膜癌外,近年研究表明心血管疾病、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病等疾病也与雌激素受体密切相关。雌激素的生物效应与多种疾病的发生、转归和预后密切相关。本文将综述几类辅助调节因子对雌激素受体介导的基因转录的调控,雌激素受体相关疾病,及环境有害物质对ERα功能的影响。

关键词：雌激素受体辅助调节因子雌激素受体相关疾病环境有害物质

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