检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2011年第12期40卷 1057-1059,1071页

作者：刘彤李洋朱戈李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免... 详细信息

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在*** BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在*** BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。

关键词： PAK6基因激酶活型激酶死型原核表达融合蛋白

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细胞膜表面糖识别芯片的制备及其初步应用

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中国医科大学学报 2008年第5期37卷 577-579页

作者：何群宋春阳张艳潘忠诚王天骄房凯张玉魁赵雨杰中国医科大学生物芯片中心教育部细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳医学院细胞生物学教研室沈阳110034

目的制备可以对细胞膜表面糖链进行识别的凝集素芯片并进行初步应用。方法在芯片上制备 22 种凝集素点阵,提取组织和体液细胞进行荧光标记,利用凝集素与细胞膜表面糖链特异亲和性对细胞进行自动捕获,激光扫描仪和光镜检测。结果根据芯... 详细信息

目的制备可以对细胞膜表面糖链进行识别的凝集素芯片并进行初步应用。方法在芯片上制备 22 种凝集素点阵,提取组织和体液细胞进行荧光标记,利用凝集素与细胞膜表面糖链特异亲和性对细胞进行自动捕获,激光扫描仪和光镜检测。结果根据芯片上各个凝集素位点捕获细胞情况和该点凝集素的特异性获得细胞膜表面糖谱,并在光镜下对细胞数量形态进行观察。芯片的重复性和稳定性较好。结论该凝集素芯片可以对细胞进行自动捕获,对细胞膜表面糖链进行总体、即时的观察,对细胞膜糖链特征有一个总体的认识,建立各种细胞膜表面糖谱,为细胞膜表面糖链特征检测提供一个新的分析方法。

关键词：凝集素糖组学细胞膜

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球孢白僵菌侵染玉米螟的电镜观察

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电子显微学报 2019年第2期38卷 144-149页

作者：刘忱郭志红中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110122 国家林业局森林病虫害防治总站辽宁沈阳110034

为了解球孢白僵菌对玉米螟的致病机理,本研究应用扫描电子显微镜和透射电子显微镜技术,观察了球孢白僵菌sfzz003对玉米螟的侵染过程及其超微结构变化。结果表明,接种后24 h,分生孢子已萌发,并以芽管或菌丝的形式穿透体壁,普遍侵染。接种... 详细信息

为了解球孢白僵菌对玉米螟的致病机理,本研究应用扫描电子显微镜和透射电子显微镜技术,观察了球孢白僵菌sfzz003对玉米螟的侵染过程及其超微结构变化。结果表明,接种后24 h,分生孢子已萌发,并以芽管或菌丝的形式穿透体壁,普遍侵染。接种后48 h,穿透菌丝在虫体内大量繁殖,穿透过程中,菌丝与表皮层片层结构平行或垂直生长,也可侧向出芽。表皮层及皮细胞层因穿透而发生形变,菌丝周围出现组织溶解现象,这是机械压力与酶的联合作用。穿透菌丝周围可见白色絮状物,有的部位表皮层与皮细胞层分离,细胞器溶解。侵入血腔的菌丝以出芽的方式大量繁殖,至腔内充满菌丝。接种后72 h,菌丝已在寄主体表形成大量网状结构。球孢白僵菌发育进入晚期,虫体内大部分形成孢子,少量形成菌丝,可见由于营养耗尽而凋亡的菌体。本研究为更好地了解昆虫病原真菌与寄主的关系提供了理论基础,对应用白僵菌进行生物防治具有重要意义。

关键词：球孢白僵菌玉米螟侵染过程电镜观察

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hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位

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中国医科大学学报 2009年第11期38卷 816-819页

作者：蔡鑫泽顾卉刘彤李丰中国医科大学附属第一医院中心实验室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋... 详细信息

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。

关键词： hLMO1基因质粒构建基因表达与定位

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神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 760-764,803页

作者：李宏图刘晓玉庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室沈阳110031

目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进... 详细信息

目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×108TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%。结论成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。

关键词：神经元抑制性沉默元件双链RNA 慢病毒载体

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神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 702-706,799页

作者：刘斌李宏图张涛孟凡彪刘晓玉庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室沈阳110001 辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室沈阳110031

目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的D... 详细信息

目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的DMEM培养液和二甲基亚砜诱导大鼠MSCs分化成神经元,再通过实时定量PCR分析NRSF以及NRSF调控的基因在诱导前后表达的变化。结果应用β-巯基乙醇、无血清DMEM培养液和二甲基亚砜的诱导方案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞,诱导后的细胞神经元标记物神经元特异性烯醇化酶呈阳性,实时定量PCR检测NRSF基因表达显著下调,NRSF的靶基因神经营养酪氨酸激酶三型受体、突触相关蛋白25、L1细胞黏附分子、神经元钙结合蛋白受体表达有不同程度的上调。结论MSCs的神经元分化与NRSF下调及其调控的神经元分化相关基因表达上调有关。NRSF很可能是MSCs向神经元方向分化的关键基因,抑制NRSF表达可能是促进MSCs向神经元分化的关键步骤。

关键词：骨髓间充质干细胞神经元限制性沉默因子分化神经元

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人羊膜负载人羊膜间充质干细胞对SD大鼠皮肤创面愈合的影响

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 611-614,I0005-I0009页

作者：霍双枝施萍庞希宁中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室沈阳110001

目的观察人羊膜(HAM)负载人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对SD大鼠皮肤创面愈合的影响。方法采用胰酶消化HAM的上皮细胞,将hAMSCs接种于HAM上培养,然后贴覆于大鼠创面,观察创面大体变化,采用HE染色和免疫组织化学染色法检测创面愈合情况,并... 详细信息

目的观察人羊膜(HAM)负载人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对SD大鼠皮肤创面愈合的影响。方法采用胰酶消化HAM的上皮细胞,将hAMSCs接种于HAM上培养,然后贴覆于大鼠创面,观察创面大体变化,采用HE染色和免疫组织化学染色法检测创面愈合情况,并与单纯羊膜组和对照组进行比较。结果 HAM负载hAMSCs组大鼠创面的平均愈合时间为(18.3±0.9)d,明显快于对照组的(26.4±0.7)d(P<0.01)和单纯羊膜组的(21.5±1.2)d(P<0.05);术后11 d和14 d,HAM负载hAMSCs组大鼠的创面愈合率分别为(81.5±7.2)%和(94.3±3.6)%,明显高于对照组的(48.5±3.2)%和(74.3±4.3)%及单纯羊膜组的(68.5±4.5)%和(86.8±4.8)%(P均<0.01)。皮肤切片HE染色结果证实,HAM负载hAMSCs组大鼠的伤口愈合质量明显优于单纯羊膜组和对照组。免疫组织化学染色结果显示,术后14 d,HAM负载hAMSCs组大鼠皮肤CK19阳性表皮干细胞数为48.2±3.2,明显高于单纯羊膜组的37.7±3.1(P<0.05)和对照组的29.6±2.4(P<0.01);血管内皮生长因子阳性颗粒表达数为64.5±4.5,也明显高于单纯羊膜组的52.6±3.8(P<0.05)和对照组的40.7±3.1(P<0.01)。结论 HAM负载hAMSCs可能是通过促进表皮干细胞和毛细血管再生,促进皮肤损伤修复。

关键词：人羊膜人羊膜间充质干细胞创伤修复角蛋白19 血管内皮生长因子

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应用DHPLC技术检测非缺失型DMD致病基因的新突变

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中华儿科杂志 2007年第6期45卷 413-416页

作者：陈亚男周鑫金春莲徐岩林长坤曹丽华李宁张学罗阳中国医科大学医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学医学遗传学教研室

目的建立检测 Duchenne 型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)致病基因 dystrophin 突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。方法选择经多重 PCR 检测未发现dystrophin 基因大尺度缺失的 DMD 患儿20例,年龄在2～10岁,以其基因... 详细信息

目的建立检测 Duchenne 型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)致病基因 dystrophin 突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。方法选择经多重 PCR 检测未发现dystrophin 基因大尺度缺失的 DMD 患儿20例,年龄在2～10岁,以其基因组 DNA 为模板,通过 PCR反应,分别扩增 dystrophin 基因外显子及侧翼序列,采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术进行突变筛查,对 DHPLC 峰形变异的外显子片段行 PCR 产物直接测序,确定突变的具体位点和类型。结果筛查了包括2个缺失热点区 dystrophin 基因的68个外显子和3′UTR 部分片段,分别在4例患儿中检测出该基因的4种致病突变:c.6808_6811delTTAA,c.4959_4960insA,c.8656C>T 和 c.8608C>T。前两例引起移码突变分别导致 ***2270MeffsX9和 ***1654LysfsX5,后两例为无义突变分别导致 p.R2886X 和 p.R2870X。其中 c.6808_6811delTTAA,c.4959_4960insA 和 c.8656C>T 为文献未曾报道的新突变。结论 DHPLC 可以作为有效地筛查 DMD 微小突变的检测方法。

关键词：肌营养不良,杜氏色谱法,高效液相突变

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PAK4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

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吉林大学学报（医学版） 2012年第1期38卷 11-14,F0002页

作者：代炜张红艳李彦姝李妍孙长伏中国医科大学口腔医学院口腔颌面外科口腔颌面-头颈肿瘤外科辽宁沈阳110002 中国医科大学细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室辽宁沈阳110001

目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定。方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒... 详细信息

目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定。方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用shPAK4i-LV载体、pHelper1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了PAK4-shRNA慢病毒载体shPAK4i-LV。包装并浓缩慢病毒,滴度为2E+***-1。将病毒感染SACC-83细胞,real-time PCR检测PAK4的mRNA表达下调70%以上。结论:成功构建了shPAK4i-LV病毒载体并建立了SACC-83-shPAK4i细胞模型,为PAK4在肿瘤信号转导通路中的研究提供工作基础。

关键词： RNA干扰 PAK4基因质粒构建慢病毒癌,腺样囊性

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大鼠海马内注射β淀粉样蛋白对脑内小胶质细胞活化和神经元凋亡的影响

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中华老年医学杂志 2007年第1期26卷 43-46页

作者：郭大文马怡然方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳市110001

目的观察脑内β淀粉样蛋白（β-amyloid，Aβ）沉积早期对脑内胶质活化和细胞凋亡的影响。方法通过立体定位技术将Aβ1-42注射至大鼠双侧海马，对照组注射反序列Aβ42-1或PBS。分别于注射后3、7、14d，用免疫组织化学和免疫荧光法检测... 详细信息

目的观察脑内β淀粉样蛋白（β-amyloid，Aβ）沉积早期对脑内胶质活化和细胞凋亡的影响。方法通过立体定位技术将Aβ1-42注射至大鼠双侧海马，对照组注射反序列Aβ42-1或PBS。分别于注射后3、7、14d，用免疫组织化学和免疫荧光法检测CD11b、MHCⅡ及活化caspase-3的表达。结果海马内注射Aβ1-42后3d，大鼠脑内CD11b和MHCⅡ阳性小胶质细胞数量[分别为（345．22±75．86）和（200．22±42．88）]，较PBS组[分别为（98．61±20．79）和（35．43±12．46）]和Aβ42-1组[分别为（103．44±22．13）和（43．41±15．63）3明显升高（P〈0．01），7d达到高峰[分别为（486．22±81．51）和（223．62±66．99）]，表现为明显的激活状态。注射后3d，大脑皮质、海马的活化caspase-3阳性细胞数量（132．42±31．80）比PBS组（4．41±3．13）和AB㈨组（4．85±3．70）明显升高（P〈0．01），7d后更明显（165．24±33．95），以海马更为显著。结论海马内注射A？可以诱导小胶质活化和神经细胞凋亡，有可能作为研究阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）发病早期的动物模型。

关键词：淀粉样β蛋白小神经胶质细胞细胞凋亡阿尔茨海默病

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