检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2009年第1期38卷 1-4页

作者：何群张艳宋春阳潘忠诚王天骄张玉魁赵雨杰中国医科大学基础医学院生物芯片中心卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳医学院细胞生物学教研室沈阳110034

目的应用凝集素芯片检测兔不同组织细胞膜表面糖链类型。方法分别用不同胶原酶消化兔的脾、肾和肝组织,对消化后得到的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖谱。结果兔不同组织细胞表面... 详细信息

目的应用凝集素芯片检测兔不同组织细胞膜表面糖链类型。方法分别用不同胶原酶消化兔的脾、肾和肝组织,对消化后得到的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖谱。结果兔不同组织细胞表面糖链类型不同:肝细胞特异亲和的凝集素为LTL,脾细胞为SNA和WGA,3种组织细胞共有DSL、MAL、AAL、STL。结论肝细胞膜表面特有糖链为L-岩藻糖,脾细胞特有糖链为唾液酸,使用凝集素芯片检测细胞膜表面的糖链特异性为建立各种细胞膜表面糖谱提供依据。

关键词：凝集素糖组学细胞膜

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hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位

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中国医科大学学报 2009年第11期38卷 816-819页

作者：蔡鑫泽顾卉刘彤李丰中国医科大学附属第一医院中心实验室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋... 详细信息

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。

关键词： hLMO1基因质粒构建基因表达与定位

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Flag标签MORC2-677丝氨酸位点突变载体构建及表达

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生命科学研究 2012年第1期16卷 1-5页

作者：王桂玲王孝会程正国宋艳艳李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部细胞生物学重点实验室中国辽宁沈阳110001

构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体;再以含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的pcDNA3.1A-MOR... 详细信息

构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体;再以含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的pcDNA3.1A-MORC2-WT野生型质粒为模板,在S677突变位点两侧设计重叠突变引物,进行三轮重叠延伸PCR完成定点突变,获得MORC2全长编码序列的S677位点的定点突变体载体(pcDNA3.1A-MORC2-S677A/S677E);再通过KpnⅠ和XhoⅠ酶切把pcDNA3.1A-MORC2-WT/S677A/S677E各载体定向克隆到已构建好的pcDNA3.1-Flag空载体中,酶切鉴定及测序正确后,转染到SGC-7901细胞中,利用Flag–标签抗体,Western blot检测其各突变载体的表达.成功构建了人Flag标签MORC2全长编码序列S677位点突变体真核表达载体并在SGC-7901细胞中获得带Flag标签融合蛋白表达产物,为进一步研究MORC2的功能奠定了基础.

关键词： MORC2 突变体真核表达载体基因表达胃癌细胞

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西咪替丁增强5-氟脲嘧啶对人胃癌细胞的生长抑制作用

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中国医科大学学报 2010年第12期39卷 1021-1023,1027页

作者：刘芙蓉张成宏高建李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学实验技术中心沈阳110001

目的观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响。方法用MTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用... 详细信息

目的观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响。方法用MTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞凋亡率的影响。结果西咪替丁与5-Fu联合应用时,西咪替丁在无毒浓度(5～50μmol/L)即可显著增强低浓度5-Fu对胃癌细胞的生长抑制作用。同时还发现,西咪替丁能增强5-Fu诱导胃癌细胞凋亡。结论西咪替丁可提高人胃癌细胞MGC-803、BGC-823对化疗药物5-Fu的敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

关键词：西咪替丁 5-氟脲嘧啶联合应用胃肿瘤细胞株

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胃癌细胞中p21活化激酶4的表达和定位

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中国医科大学学报 2009年第8期38卷 565-568页

作者：邵阳光李妍王春玉佟宇鑫李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学生物科学与生物技术系沈阳110001

目的构建真核表达载体pEGFP-PAK4,利用它鉴定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌细胞中的定位,并检测外源性和内源性PAK4在胃癌细胞中的表达。方法以pCAN2-MYC-PAK4为模板,采用PCR法进行人PAK4编码序列的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1... 详细信息

目的构建真核表达载体pEGFP-PAK4,利用它鉴定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌细胞中的定位,并检测外源性和内源性PAK4在胃癌细胞中的表达。方法以pCAN2-MYC-PAK4为模板,采用PCR法进行人PAK4编码序列的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。将pCAN2-MYC-PAK4质粒瞬时转染到胃癌BGC-823细胞中,用Western blot方法检测MYC-PAK4融合蛋白的表达;并用Western blot方法检测不同胃癌细胞系中内源性PAK4的表达;瞬时转染pEGFP-PAK4到胃癌BGC-823细胞中,用激光扫描共聚焦显微镜观察PAK4的定位。结果(1)hPAK4编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP-C1中;(2)证实了MYC-PAK4融合蛋白及内源性PAK4在胃癌细胞中的表达;(3)转染pEGFP-PAK4后,在胃癌BGC-823细胞胞质内可见明亮的绿色荧光。结论成功地构建了pEGFP-PAK4载体,证实了外源性和内源性PAK4的表达,证明在胃癌BGC-823细胞中PAK4主要定位于细胞质,为进一步研究PAK4的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础。

关键词： p21活化激酶4 绿色荧光蛋白融合蛋白转染胃癌

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利用酵母双杂交系统筛选Pak4相互作用蛋白质

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中国医科大学学报 2009年第1期38卷 8-10,14页

作者：李彦姝李晓东吴怡李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 沈阳医学院病原生物学教研室沈阳110034 中国医科大学临床医学系沈阳110001

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化... 详细信息

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化诱饵质粒的AH109酵母进行交配实验。交配子在SD/-Leu/-Trp/-His和SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-gal平板上筛选,阳性克隆质粒酶切鉴定。结果成功构建了pGBKT7-Pak4 KD诱饵质粒,Western blot证实其在酵母菌AH109和Y187中表达,筛选了多个与Pak4相互作用的阳性转化子。结论利用酵母双杂交系统筛选出Pak4相互作用蛋白质。

关键词： Pak4 酵母双杂交信号转导

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hRNF6基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

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中国医科大学学报 2010年第12期39卷 995-997页

作者：李洋刘彤李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学沈阳110001

目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并... 详细信息

目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到工具细胞HEK-293中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-RNF6在工具细胞CV-1和胃癌SGC-7901细胞内的定位。结果 hRNF6全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-his A和pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2058bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为78kDa。pEGFP-RNF6在CV-1细胞和胃癌SGC-7901细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功的构建了hRNF6全长基因真核表达载体,pEGFP-RNF6蛋白主要定位于胃癌细胞核内。

关键词：环指蛋白6 基因克隆融合蛋白转染胃癌

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骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第3期28卷 237-239页

作者：沈涛李妍杨礼庆梁爽巴根付勤中国医科大学附属盛京医院骨科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室辽宁沈阳110001 明尼苏达大学实验病理系美国艾波利斯55455

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉... 详细信息

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。

关键词： ArgBP2 Western blot 免疫沉淀

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hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达

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中国医科大学学报 2010年第2期39卷 84-86,94页

作者：张红艳李彦姝王春玉苏楠李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001

目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转... 详细信息

目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时进行GST-pulldown实验。结果hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1800bp。Westernblot检测到融合蛋白GST-hPAK4的表达,分子量约为94kDa,融合蛋白能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。结论成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。

关键词： PAK4基因蛋白质印迹融合蛋白

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细胞周期相关蛋白DCT1染色体及细胞定位与其组织表达的研究

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中国医科大学学报 2010年第2期39卷 105-107,111页

作者：刘琦王述森高锦兰曹丽华罗阳中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的对候选抑癌基因DOC-1R((Deleted in oral cancer-1 related,CDK2AP2)相关基因DCT1(DOC-1Rterminal1)进行染色体定位分析并观察其细胞内定位,检测该基因在人类组织中的表达。方法通过辐射杂交细胞系对其进行染色体定位分析,同时构建E... 详细信息

目的对候选抑癌基因DOC-1R((Deleted in oral cancer-1 related,CDK2AP2)相关基因DCT1(DOC-1Rterminal1)进行染色体定位分析并观察其细胞内定位,检测该基因在人类组织中的表达。方法通过辐射杂交细胞系对其进行染色体定位分析,同时构建EGFP-DCT1质粒并转染HeLa细胞,荧光显微镜观察DCT1蛋白在细胞内的定位。此外,应用荧光定量PCR的方法检测该基因在16个正常人类组织中的表达。结果DCT1基因定位于5q31,其编码产物在HeLa细胞中定位于核膜,该基因在正常人类的16个组织中均有表达,其中在脾中表达水平较高。结论DCT1可能为细胞周期调控相关基因,在人类组织中普遍表达。

关键词： DCT1基因 DOC-1R基因染色体定位细胞定位基因表达

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