检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2009年第11期38卷 816-819页

作者：蔡鑫泽顾卉刘彤李丰中国医科大学附属第一医院中心实验室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋... 详细信息

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。

关键词： hLMO1基因质粒构建基因表达与定位

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利用酵母双杂交系统筛选Pak4相互作用蛋白质

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中国医科大学学报 2009年第1期38卷 8-10,14页

作者：李彦姝李晓东吴怡李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 沈阳医学院病原生物学教研室沈阳110034 中国医科大学临床医学系沈阳110001

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化... 详细信息

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化诱饵质粒的AH109酵母进行交配实验。交配子在SD/-Leu/-Trp/-His和SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-gal平板上筛选,阳性克隆质粒酶切鉴定。结果成功构建了pGBKT7-Pak4 KD诱饵质粒,Western blot证实其在酵母菌AH109和Y187中表达,筛选了多个与Pak4相互作用的阳性转化子。结论利用酵母双杂交系统筛选出Pak4相互作用蛋白质。

关键词： Pak4 酵母双杂交信号转导

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细胞膜表面糖识别芯片的制备及其初步应用

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中国医科大学学报 2008年第5期37卷 577-579页

作者：何群宋春阳张艳潘忠诚王天骄房凯张玉魁赵雨杰中国医科大学生物芯片中心教育部细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳医学院细胞生物学教研室沈阳110034

目的制备可以对细胞膜表面糖链进行识别的凝集素芯片并进行初步应用。方法在芯片上制备 22 种凝集素点阵,提取组织和体液细胞进行荧光标记,利用凝集素与细胞膜表面糖链特异亲和性对细胞进行自动捕获,激光扫描仪和光镜检测。结果根据芯... 详细信息

目的制备可以对细胞膜表面糖链进行识别的凝集素芯片并进行初步应用。方法在芯片上制备 22 种凝集素点阵,提取组织和体液细胞进行荧光标记,利用凝集素与细胞膜表面糖链特异亲和性对细胞进行自动捕获,激光扫描仪和光镜检测。结果根据芯片上各个凝集素位点捕获细胞情况和该点凝集素的特异性获得细胞膜表面糖谱,并在光镜下对细胞数量形态进行观察。芯片的重复性和稳定性较好。结论该凝集素芯片可以对细胞进行自动捕获,对细胞膜表面糖链进行总体、即时的观察,对细胞膜糖链特征有一个总体的认识,建立各种细胞膜表面糖谱,为细胞膜表面糖链特征检测提供一个新的分析方法。

关键词：凝集素糖组学细胞膜

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西咪替丁增强5-氟脲嘧啶对人胃癌细胞的生长抑制作用

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中国医科大学学报 2010年第12期39卷 1021-1023,1027页

作者：刘芙蓉张成宏高建李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学实验技术中心沈阳110001

目的观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响。方法用MTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用... 详细信息

目的观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响。方法用MTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞凋亡率的影响。结果西咪替丁与5-Fu联合应用时,西咪替丁在无毒浓度(5～50μmol/L)即可显著增强低浓度5-Fu对胃癌细胞的生长抑制作用。同时还发现,西咪替丁能增强5-Fu诱导胃癌细胞凋亡。结论西咪替丁可提高人胃癌细胞MGC-803、BGC-823对化疗药物5-Fu的敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

关键词：西咪替丁 5-氟脲嘧啶联合应用胃肿瘤细胞株

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胃癌细胞中p21活化激酶4的表达和定位

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中国医科大学学报 2009年第8期38卷 565-568页

作者：邵阳光李妍王春玉佟宇鑫李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学生物科学与生物技术系沈阳110001

目的构建真核表达载体pEGFP-PAK4,利用它鉴定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌细胞中的定位,并检测外源性和内源性PAK4在胃癌细胞中的表达。方法以pCAN2-MYC-PAK4为模板,采用PCR法进行人PAK4编码序列的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1... 详细信息

目的构建真核表达载体pEGFP-PAK4,利用它鉴定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌细胞中的定位,并检测外源性和内源性PAK4在胃癌细胞中的表达。方法以pCAN2-MYC-PAK4为模板,采用PCR法进行人PAK4编码序列的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。将pCAN2-MYC-PAK4质粒瞬时转染到胃癌BGC-823细胞中,用Western blot方法检测MYC-PAK4融合蛋白的表达;并用Western blot方法检测不同胃癌细胞系中内源性PAK4的表达;瞬时转染pEGFP-PAK4到胃癌BGC-823细胞中,用激光扫描共聚焦显微镜观察PAK4的定位。结果(1)hPAK4编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP-C1中;(2)证实了MYC-PAK4融合蛋白及内源性PAK4在胃癌细胞中的表达;(3)转染pEGFP-PAK4后,在胃癌BGC-823细胞胞质内可见明亮的绿色荧光。结论成功地构建了pEGFP-PAK4载体,证实了外源性和内源性PAK4的表达,证明在胃癌BGC-823细胞中PAK4主要定位于细胞质,为进一步研究PAK4的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础。

关键词： p21活化激酶4 绿色荧光蛋白融合蛋白转染胃癌

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大鼠海马内注射β淀粉样蛋白对脑内小胶质细胞活化和神经元凋亡的影响

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中华老年医学杂志 2007年第1期26卷 43-46页

作者：郭大文马怡然方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳市110001

目的观察脑内β淀粉样蛋白（β-amyloid，Aβ）沉积早期对脑内胶质活化和细胞凋亡的影响。方法通过立体定位技术将Aβ1-42注射至大鼠双侧海马，对照组注射反序列Aβ42-1或PBS。分别于注射后3、7、14d，用免疫组织化学和免疫荧光法检测... 详细信息

目的观察脑内β淀粉样蛋白（β-amyloid，Aβ）沉积早期对脑内胶质活化和细胞凋亡的影响。方法通过立体定位技术将Aβ1-42注射至大鼠双侧海马，对照组注射反序列Aβ42-1或PBS。分别于注射后3、7、14d，用免疫组织化学和免疫荧光法检测CD11b、MHCⅡ及活化caspase-3的表达。结果海马内注射Aβ1-42后3d，大鼠脑内CD11b和MHCⅡ阳性小胶质细胞数量[分别为（345．22±75．86）和（200．22±42．88）]，较PBS组[分别为（98．61±20．79）和（35．43±12．46）]和Aβ42-1组[分别为（103．44±22．13）和（43．41±15．63）3明显升高（P〈0．01），7d达到高峰[分别为（486．22±81．51）和（223．62±66．99）]，表现为明显的激活状态。注射后3d，大脑皮质、海马的活化caspase-3阳性细胞数量（132．42±31．80）比PBS组（4．41±3．13）和AB㈨组（4．85±3．70）明显升高（P〈0．01），7d后更明显（165．24±33．95），以海马更为显著。结论海马内注射A？可以诱导小胶质活化和神经细胞凋亡，有可能作为研究阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）发病早期的动物模型。

关键词：淀粉样β蛋白小神经胶质细胞细胞凋亡阿尔茨海默病

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应用凝集素芯片检测兔组织细胞膜表面糖谱

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中国医科大学学报 2009年第1期38卷 1-4页

作者：何群张艳宋春阳潘忠诚王天骄张玉魁赵雨杰中国医科大学基础医学院生物芯片中心卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 沈阳医学院细胞生物学教研室沈阳110034

目的应用凝集素芯片检测兔不同组织细胞膜表面糖链类型。方法分别用不同胶原酶消化兔的脾、肾和肝组织,对消化后得到的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖谱。结果兔不同组织细胞表面... 详细信息

目的应用凝集素芯片检测兔不同组织细胞膜表面糖链类型。方法分别用不同胶原酶消化兔的脾、肾和肝组织,对消化后得到的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖谱。结果兔不同组织细胞表面糖链类型不同:肝细胞特异亲和的凝集素为LTL,脾细胞为SNA和WGA,3种组织细胞共有DSL、MAL、AAL、STL。结论肝细胞膜表面特有糖链为L-岩藻糖,脾细胞特有糖链为唾液酸,使用凝集素芯片检测细胞膜表面的糖链特异性为建立各种细胞膜表面糖谱提供依据。

关键词：凝集素糖组学细胞膜

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骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第3期28卷 237-239页

作者：沈涛李妍杨礼庆梁爽巴根付勤中国医科大学附属盛京医院骨科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室辽宁沈阳110001 明尼苏达大学实验病理系美国艾波利斯55455

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉... 详细信息

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。

关键词： ArgBP2 Western blot 免疫沉淀

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雌激素受体ERα的功能调控及相关疾病的研究进展

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中国细胞生物学学报 2011年第1期33卷 65-71页

作者：刘晓霞翟曜耀赵越中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室染色质生物学研究室沈阳110001

雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)是依赖配体活化转录因子的核受体家族成员之一,参与靶细胞的增殖和分化。ERα活化的经典途径是与雌激素结合后直接作用于靶基因上游的雌激素受体反应元件(ERE),从而诱导靶基因转录。雌激素受体的... 详细信息

雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)是依赖配体活化转录因子的核受体家族成员之一,参与靶细胞的增殖和分化。ERα活化的经典途径是与雌激素结合后直接作用于靶基因上游的雌激素受体反应元件(ERE),从而诱导靶基因转录。雌激素受体的功能受许多因子调节,包括与之结合的配体、DNA上的顺式元件、募集的辅助调节因子及细胞环境等。在雌激素受体相关疾病中,除乳腺癌和子宫内膜癌外,近年研究表明心血管疾病、骨质疏松症、阿尔茨海默氏病等疾病也与雌激素受体密切相关。雌激素的生物效应与多种疾病的发生、转归和预后密切相关。本文将综述几类辅助调节因子对雌激素受体介导的基因转录的调控,雌激素受体相关疾病,及环境有害物质对ERα功能的影响。

关键词：雌激素受体辅助调节因子雌激素受体相关疾病环境有害物质

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hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达

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中国医科大学学报 2010年第2期39卷 84-86,94页

作者：张红艳李彦姝王春玉苏楠李丹妮李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学第94期临床医学系沈阳110001

目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转... 详细信息

目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时进行GST-pulldown实验。结果hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1800bp。Westernblot检测到融合蛋白GST-hPAK4的表达,分子量约为94kDa,融合蛋白能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。结论成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。

关键词： PAK4基因蛋白质印迹融合蛋白

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