检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：赵伟东刘东鑫刘巍方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

从细胞分子水平探讨病原体与宿主细胞相互作用的机理逐渐成为细胞生物学领域的新兴热点。研究表明,新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌是带有K1抗原的大肠杆菌(即***1),*** K1导致脑膜炎的前提条件是播散入血的*** K1能够穿过... 详细信息

从细胞分子水平探讨病原体与宿主细胞相互作用的机理逐渐成为细胞生物学领域的新兴热点。研究表明,新生儿细菌性脑膜炎最常见的革兰氏阴性致病菌是带有K1抗原的大肠杆菌(即***1),*** K1导致脑膜炎的前提条件是播散入血的*** K1能够穿过血脑屏障进入脑内。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)构建了体外血脑屏障模型,在此基础上探讨*** K1侵袭血脑屏障的分子机制。我们首次发现,HBMEC上的血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1)参与了***1侵袭HBMEC。VEGFR受体抑制剂和针对VEGFR1的siRNA可以明显阻断***1侵袭所导致的HBMEC肌动蛋白微丝的重排,并可抑制*** K1侵袭HBMEC。在*** K1侵袭HBMEC时,VEGFR1和*** K1有明显的共定位。VEGFR1能够与PI3K的p85亚单位形成复合物,导致PI3K下游的Akt的活化。此外,Src激酶作为PI3K/Akt上游的信号分子也参与了Ecoli K1侵袭HBMEC。这些结果进一步揭示了大肠杆菌侵袭血脑屏障的分子机制。

关键词：大肠杆菌K1株人脑微血管内皮细胞信号转导

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EphA2受体参与维持脑微血管内皮细胞的紧密连接结构

EphA2受体参与维持脑微血管内皮细胞的紧密连接结构

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：赵伟东周娜梁悦方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室

Eph受体与其配体ephrin参与调控多种生物学过程,如神经发育、血管发生和肿瘤生成等。目前,关于Eph受体与其配体ephrin在脑内皮细胞中的作用尚不清楚。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC),检测了EphA受体和ephrin-A配体的表达... 详细信息

Eph受体与其配体ephrin参与调控多种生物学过程,如神经发育、血管发生和肿瘤生成等。目前,关于Eph受体与其配体ephrin在脑内皮细胞中的作用尚不清楚。我们利用分离培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC),检测了EphA受体和ephrin-A配体的表达谱,发现EphA1,2,3,4,6,7,10以及ephrin-A1,3,4,5在HBMEC中有表达。以重组ephrin-A1蛋白对HBMEC进行处理后,可以使HBMEC的EphA2受体发生明显的酪氨酸磷酸化,并使HBMEC单层的通透性升高,紧密连接蛋白ZO-1和occludin的分布发生改变(由连续、线状变为断续、紊乱)。RNA干扰HBMEC的EphA2后,可以改善HBMEC单层的通透性,并能促进紧密连接形成。将EphA2激酶缺失突变体转染至HBMEC后,也获得了与RNA干扰EphA2相似的结果。我们还发现,EphA2的功能失活后,可以削弱HBMEC的迁移能力,抑制HBMEC的血管生成能力。体内实验发现,EphA2特异性表达于脑微血管中。综上,我们认为EphA2受体是维持脑微血管内皮细胞紧密连接结构的重要分子。

关键词： EphA2受体脑微血管紧密连接血管生成

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水溶性CdTe量子点的制备及对大肠癌细胞的免疫成像研究

水溶性CdTe量子点的制备及对大肠癌细胞的免疫成像研究

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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议

作者：王蒴刘畅方瑾中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳 110001

量子点(QD)是由半导体材料制成的直径为2～10 nm的纳米晶体，是一种新型的荧光染料。利用量子点的荧光特性，通过与生物大分子耦联，可以制备出灵敏度高、特异性强的生物探针。本研究采用水热合成法制备出巯基乙酸包被的CdTe量子点，采... 详细信息

量子点(QD)是由半导体材料制成的直径为2～10 nm的纳米晶体，是一种新型的荧光染料。利用量子点的荧光特性，通过与生物大分子耦联，可以制备出灵敏度高、特异性强的生物探针。本研究采用水热合成法制备出巯基乙酸包被的CdTe量子点，采用紫外可见光谱、荧光光谱技术和透射电子显微镜对该量子点的光学特性进行了研究。并以EDAC为交联剂，将该量子点与单克隆抗体ND-1进行耦联，制备出检测LEA(一种表达于大肠癌细胞膜表面的肿瘤相关抗原)的生物探针。

关键词：量子点大肠癌细胞外大抗原(LEA) ND-1

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MiR-21下调SPRY2表达对多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

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现代肿瘤医学 2015年第2期23卷 157-162页

作者：王金行丁奇周雯雯刘柏新刘芙蓉宋鉴清中国医科大学附属第一医院检验科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21... 详细信息

目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用。方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系。应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21表达和SPRY2蛋白表达水平。四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:实时定量PCR及Western blot检测结果表明:转染U266细胞后,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量较U266/un组差异明显下降(P<0.05);转染miR-21 mimics组的U266细胞SPRY2的蛋白表达量较无转染组(untreated)和阴性对照组(siRNA)明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与无转染组、阴性对照组相比:MTT法显示转染组48、72、96h细胞的生长速度明显减慢,增殖率明显下降(P<0.01);流式细胞术表明miR-21 mimics转染U266细胞48、72h后,细胞凋亡率分别为U266组[(24.7±1.97)%、(38.6±1.56)%]、siRNA组[(27.3±1.72)%、(37.3±1.59)%]和U266/miR-21组[(12.7±1.27)%、(22.1±1.63)%],与两对照组比较,U266/miR-21组细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示转染组24、48h细胞迁移的能力明显减弱(P<0.05);Transwell实验证实转染组48、72h细胞穿过聚磷酸酯膜的U266细胞数明显减少,细胞穿膜能力明显降低(P<0.05)。结论:MiR-21下调SPRY2基因表达能够在体外条件下促进MM细胞的增殖和侵袭作用,揭示其在MM的发生、发展及转移过程中的作用及可能的机制,为确立新分子靶向治疗提供可靠的研究依据。

关键词：多发性骨髓瘤 miR-21 SPRY2 增殖侵袭

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一种转移性大肠癌特异性核酸适配体的分析鉴定及其在循环肿瘤细胞捕获中的应用

一种转移性大肠癌特异性核酸适配体的分析鉴定及其在循环肿瘤细胞...

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中国细胞生物学学会2017年全国学术大会

作者：李婉明王蒴周琳琳程雅洁方瑾医学细胞生物学教育部重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室沈阳 110001

转移是肿瘤患者死亡的主要原因.研究表明，对外周血中的循环肿瘤细胞(CTCs)进行检测分析，有助于早期发现肿瘤的微转移、转移风险的预测和判断，以及评估预后和监测复发.核酸适配体是利用指数富集的系统进化技术(SELEX)从一个库容量达1...

转移是肿瘤患者死亡的主要原因.研究表明，对外周血中的循环肿瘤细胞(CTCs)进行检测分析，有助于早期发现肿瘤的微转移、转移风险的预测和判断，以及评估预后和监测复发.核酸适配体是利用指数富集的系统进化技术(SELEX)从一个库容量达1018的随机寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶细胞高亲和力和高特异性结合的寡核苷酸序列.W3是本课题组在前期工作中以转移性大肠癌细胞系LoVo为靶细胞，通过消减Cell-SELEX技术筛选得到的能与转移性肿瘤细胞特异性结合的核酸适配体.

关键词：

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hLMO3基因全长及截短序列原核表达载体的构建及蛋白诱导表达

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解剖科学进展 2012年第1期18卷 8-11页

作者：刘彤顾卉李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院中心实验室沈阳110001

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达... 详细信息

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hLMO3全长及5个截短基因序列克隆到了原核表达载体pGEX-5X-2中,并经测序鉴定正确。Westernblot在*** Bl21中检测到了相应融合蛋白的表达。结论成功构建hLMO3全长及5个截短基因序列原核表达载体,在*** BL21中诱导表达出GST-LMO3全长及截短融合蛋白。

关键词： hLMO3 工具细胞HEK293 原核表达截短蛋白

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溶酶体组织蛋白酶A在小鼠脑海马发育过程中发生核转位

溶酶体组织蛋白酶A在小鼠脑海马发育过程中发生核转位

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：尚德淑姜静宜方文刚陈誉华中国医科大学基础医学院发育生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室

前期研究发现大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞相关基因—ibeB可诱导小鼠ES细胞向神经前体细胞分化。利用酵母双杂交筛选AB2.1中IbeB靶蛋白,经验证表明组织蛋白酶A(CathepsinA)和IbeB蛋白在真核细胞发生相互作用。提示Cathepsin A也可能... 详细信息

前期研究发现大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞相关基因—ibeB可诱导小鼠ES细胞向神经前体细胞分化。利用酵母双杂交筛选AB2.1中IbeB靶蛋白,经验证表明组织蛋白酶A(CathepsinA)和IbeB蛋白在真核细胞发生相互作用。提示Cathepsin A也可能定位在细胞核,并在神经前体细胞分化过程中发挥作用。为确定Cathepsin A的功能,选择发育期小鼠脑探讨是否Cathepsin A在发育的脑中表达。Western Blot结果表明,CathepsinA随发育成熟表达降低。进一步,细胞组分抽提实验表明胚胎期小鼠脑中,有一部分CathepsinA在细胞核表达。由于IbeB与CathepsinA可以相互作用,IbeB具有诱导神经前体细胞分化的作用,因此我们选取神经前体细胞丰富的海马进行研究,以初步确定Cathepsin A在神经前体细胞分化和海马发育过程中的表达定位。免疫组化结果表明,在海马发育过程中,CathepsinA的表达发生了核转位。CathepsinA是一种溶酶体蛋白水解酶,主要在细胞内环境稳定方面发挥作用。我们发现在小鼠脑发育过程中部分CathepsinA也在细胞核表达,提示它可能具有基因表达调控的功能。对Cathepsin A功能的深入研究可为揭示Cathepsin A的新功能积累资料。

关键词： ibeB 神经分化 Cathepsin A

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基于转移性乳腺癌特异性核酸适配子的循环肿瘤细胞靶向捕获研究

基于转移性乳腺癌特异性核酸适配子的循环肿瘤细胞靶向捕获研究

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第三届中国核酸适配体学术研讨会

作者：李婉明周琳琳方瑾教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学基础医学院细胞生物教研室沈阳110001

在肿瘤转移的过程中,脱离原发肿瘤、侵袭并进入循环系统的肿瘤细胞被称为循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)。许多研究表明,对外周血中的CTCs进行检测分析,有助于早期发现肿瘤的微转移、转移风险的预测和判断,以及评估预后和...

在肿瘤转移的过程中,脱离原发肿瘤、侵袭并进入循环系统的肿瘤细胞被称为循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)。许多研究表明,对外周血中的CTCs进行检测分析,有助于早期发现肿瘤的微转移、转移风险的预测和判断,以及评估预后和监测复发[1]。高效富集外周血中含量稀少的CT℃是临床应用的关键问题,但目前基于CTC上皮特性的富集方法难以富集到失去上皮特性如发生上皮间质转化(EMT)的细胞群体,有可能遗失最具有诊断意义的信息[2]。因此,发现新的特异性更高的肿瘤转移相关标志物以提高CTC的检测有效性,对于转移性肿瘤的早期诊断和早期治疗具有重要的科学意义和临床价值。

关键词：

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研究生分子生物学实验技术教学的思考与实践

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中国医学教育技术 2018年第5期32卷 585-588页

作者：刘琦王述森高锦兰罗阳中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122

分子生物学实验教学是医学院校中研究生分子生物学教学的重要组成部分。文章就教学内容(综合性实验的设置、新技术实验的增设、与生物信息学教学的结合)、教学方式(实验理论与实验操作穿插式教学、小班授课)、考核方法(实验操作及科研... 详细信息

分子生物学实验教学是医学院校中研究生分子生物学教学的重要组成部分。文章就教学内容(综合性实验的设置、新技术实验的增设、与生物信息学教学的结合)、教学方式(实验理论与实验操作穿插式教学、小班授课)、考核方法(实验操作及科研设计加入考核体系)及师资队伍建设(教师队伍选择与培养、研究生助教)等方面提出建议,以期为相同层次教学的设置与安排提供有益的借鉴与参考。

关键词：分子生物学实验课程研究生教学

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人IKKγ基因重组载体的构建及在原核体内的表达纯化

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解剖科学进展 2013年第1期19卷 71-74页

作者：郭文东朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教育部重点实验室细胞病理生物学研究室辽宁沈阳110001

目的构建重组原核表达载体pGEX-5X-1-IKKγ,诱导GST-IKKγ融合蛋白的表达并以GST-pulldown方法得到纯化的融合蛋白。方法应用PCR技术,以M6P8载体为模板扩增得到IKKγ全长序列,并亚克隆至带有GST标签的pGEX-5X-1载体中。经酶切、测序鉴定... 详细信息

目的构建重组原核表达载体pGEX-5X-1-IKKγ,诱导GST-IKKγ融合蛋白的表达并以GST-pulldown方法得到纯化的融合蛋白。方法应用PCR技术,以M6P8载体为模板扩增得到IKKγ全长序列,并亚克隆至带有GST标签的pGEX-5X-1载体中。经酶切、测序鉴定后,重组载体转化至原核细胞中并进行诱导表达,以SDS-PAGE凝胶电泳染色鉴定融合蛋白的表达。融合蛋白经GSTbeads沉降后,Western blot分析、鉴定融合蛋白的表达及纯化情况。结果将人IKKγ亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-1,酶切、测序鉴定无误。经诱导得到高表达的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳染色后可见高表达条带。Westernblot鉴定经GSTbeads沉降后的蛋白,在74kD鉴定出融合蛋白的特异性条带。结论成功构建了原核表达载体pGEX-5X-1-,并在原核细胞内表达,融合蛋白可以经GSTbeads沉降用于GST-pulldown实验。

关键词： IKKγ基因载体构建诱导表达

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