检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 611-613页

作者：方瑾宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的　将抗人大肠癌单克隆抗体ND 1(mAb)的VH和VL 基因进行重组 ,构建和表达ND 1scFv ,并对其在体内外的生物学活性进行检测。方法　采用RT PCR技术 ,从能够分泌mAbND 1的鼠杂交瘤细胞中扩增VH 和VL 基因 ,通过重叠延伸拼接PCR在VH 和VL... 详细信息

目的　将抗人大肠癌单克隆抗体ND 1(mAb)的VH和VL 基因进行重组 ,构建和表达ND 1scFv ,并对其在体内外的生物学活性进行检测。方法　采用RT PCR技术 ,从能够分泌mAbND 1的鼠杂交瘤细胞中扩增VH 和VL 基因 ,通过重叠延伸拼接PCR在VH 和VL 基因间引入连接短肽 ,体外构建ND 1scFv基因 ,并在大肠杆菌中表达。采用间接免疫荧光 (IFA)及ELISA法测定ND 1scFv的免疫学活性。用99Tcm 标记ND 1scFv后 ,将偶联物给予荷瘤裸鼠 ,观察其在动物体内的显像及生物学分布。结果　SDS PAGE显示 ,重组蛋白Mr 为 30 0 0 0 ,同预期结果一致。IFA及ELISA检测表明 ,ND 1scFv保留了与亲本抗体相近的免疫学活性 ,对表达相应抗原的靶细胞具有特异结合活性。体内放射免疫实验显示 ,99Tcm ND 1scFv在荷瘤小鼠体内的生物学分布 ,呈明显的肿瘤积聚趋向 ,注入体内 1h血中T/NT即达2 .6 1。结论　获得免疫学活性良好的ND 1scFv ,对荷瘤动物体内肿瘤的定位快速、准确。

关键词：大肠癌单链抗体生物学活性肿瘤诊断 ^99Tc^m

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全反式维甲酸诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

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中国肿瘤临床 2003年第2期30卷 99-103页

作者：蔡威宋今丹中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室沈阳市110001

目的:观察全反式维甲酸(All-transretinoicacid,ATRA)诱导人卵巢癌细胞CAOV3产生凋亡。方法:应用扫描电镜、透射电镜、DNA断裂分析及流式细胞术观察ATRA诱导人卵巢癌细胞CAOV3凋亡。结果:ATRA作用后电镜下细胞逐渐变圆,细胞表面微绒毛消... 详细信息

目的:观察全反式维甲酸(All-transretinoicacid,ATRA)诱导人卵巢癌细胞CAOV3产生凋亡。方法:应用扫描电镜、透射电镜、DNA断裂分析及流式细胞术观察ATRA诱导人卵巢癌细胞CAOV3凋亡。结果:ATRA作用后电镜下细胞逐渐变圆,细胞表面微绒毛消失,核染色质更加致密,浓缩分块,胞质中有空泡形成,细胞表面出泡,脱落形成膜包裹的凋亡小体。流式细胞术不同浓度ATRA对CAOV3细胞凋亡作用的结果显示在DNA直方图上均出现低于G1期二倍体DNA含量的亚二倍体峰,随药物浓度增加,亚二倍体细胞从10-8mol/LATRA时的18.7%增加到10-6mol/L的37.4%;10-6mol/LATRA作用24h即诱导CAOV3细胞产生典型的梯形DNA条带(DNAladder),大小约180bp的整数倍递增,随ATRA作用时间延长而逐渐加强。结论:ATRA可以诱导卵巢癌细胞产生细胞凋亡,呈时间和浓度依赖性。

关键词：卵巢癌全反式维甲酸 CAOV3细胞细胞凋亡扫描电镜透射电镜 DNA断裂分析法流式细胞术

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hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位

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中国医科大学学报 2009年第11期38卷 816-819页

作者：蔡鑫泽顾卉刘彤李丰中国医科大学附属第一医院中心实验室中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋... 详细信息

目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。

关键词： hLMO1基因质粒构建基因表达与定位

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肿瘤相关抗原LEA与CEA在大肠癌表达的对比研究

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中国肿瘤临床 1999年第7期26卷 511-513页

作者：莫志成宋今丹中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室沈阳市110001

目的：探讨ＬＥＡ对大肠癌的诊断价值。方法：用免疫组织化学方法（Ｓ－Ｐ法）检测１１７例大肠癌组织和９９例大肠非癌病变组织ＬＥＡ（ＬａｒｇｅＥｘｔｅｒｎａｌＡｎｔｉｇｅｎ）与ＣＥＡ的表达状况。结果：ＬＥＡ在组织学... 详细信息

目的：探讨ＬＥＡ对大肠癌的诊断价值。方法：用免疫组织化学方法（Ｓ－Ｐ法）检测１１７例大肠癌组织和９９例大肠非癌病变组织ＬＥＡ（ＬａｒｇｅＥｘｔｅｒｎａｌＡｎｔｉｇｅｎ）与ＣＥＡ的表达状况。结果：ＬＥＡ在组织学上诊断大肠癌的灵敏度为８６．３％，特异度为５３．５％，与ＣＥＡ相比，灵敏度与ＣＥＡ相似（Ｐ＞０．０５），特异度要强于ＣＥＡ（Ｐ＜０．０５）。两种抗原联合应用并不比ＬＥＡ单独应用的诊断价值高。ＬＥＡ与ＣＥＡ在大肠癌和大肠腺瘤中的表达明显正相关（Ｐ＜０．０５），而在非腺瘤息肉和正常粘膜中，两者不相关（Ｐ＞０．０５）。结论：ＬＥＡ在大肠癌的诊断上有一定的实用价值。

关键词：肿瘤相关抗原大肠癌诊断

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野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达

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吉林大学学报（医学版） 2014年第1期40卷 27-30页

作者：刘彤李丹妮李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段... 详细信息

目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG。将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达。结果:PCR扩增出约200bp大小的野生型和失活型PAK1AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000。结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1AID的融合蛋白。

关键词： p21活化激酶1 自我抑制域失活型(L107F) 真核表达 GST标签

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一种新的短链脱氢/还原酶家族新成员:NADP(H)-依赖的视黄醇脱氢酶基因的克隆和分析

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Acta Genetica Sinica 2004年第4期31卷 403-410页

作者：王桂玲黄东阳中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 汕头大学医学院分子生物学中心汕头515031

从牛的肝脏中快速抽提总RNA ,根据GenBank已发表NADP(H) 依赖的视黄醇脱氢酶基因 (NRDR)的cDNA序列 ,设计并合成特异引物 ,利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法和反转录聚合酶链式反应 (RT PCR) ,得到牛肝内的NRDRcDNA的全长序列。经测... 详细信息

从牛的肝脏中快速抽提总RNA ,根据GenBank已发表NADP(H) 依赖的视黄醇脱氢酶基因 (NRDR)的cDNA序列 ,设计并合成特异引物 ,利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法和反转录聚合酶链式反应 (RT PCR) ,得到牛肝内的NRDRcDNA的全长序列。经测序证实 ,牛肝NRDR的全长cDNA序列为 12 6 6bp ,其开放读码框架在 2 4～ 80 6bp ,编码 2 6 0个氨基酸 (GenBank登录号 :AF4 874 5 4 )。根据NRDR基因推导出的氨基酸序列与人、鼠、兔有高度同源性 ,并含有SDR超家族成员的两个高度保守的模序 ,在其C 端含有过氧化物酶体的靶向序列为SHL。结果表明 ,牛的NRDR应属于过氧化物酶体内SDR超家族成员并在维甲酸合成的限速步骤起作用的酶 ,也为维甲酸合成的传统通路提供一个补充。

关键词： NADP(H)-依赖的视黄醇脱氢酶基因(NRDR) 克隆 cDNA末端快速扩增(RACE) 序列分析短链脱氢/还原酶(SDR)

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WEB2基因参与酿酒酵母S期检查点调控

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细胞生物学杂志 2002年第2期24卷 121-124页

作者：李新鸣孙黎光宣忠信宋今丹中国医科大学病原生物学教研室沈阳110001 中国中国医大生物化学与分子生物学教研室中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室

WEB2基因编码产物为一种DNA解链酶。WEB2突变株经hydroxyurea阻断DNA合成后,经流式细胞仪检测DNA含量、纺锤体微管间接免疫荧光染色及存活率测定,结果显示WEB2突变株表现S期检查点缺失。推测WEB2除了具有解链酶作用外,还参与酿酒酵母S... 详细信息

WEB2基因编码产物为一种DNA解链酶。WEB2突变株经hydroxyurea阻断DNA合成后,经流式细胞仪检测DNA含量、纺锤体微管间接免疫荧光染色及存活率测定,结果显示WEB2突变株表现S期检查点缺失。推测WEB2除了具有解链酶作用外,还参与酿酒酵母S期检查点调控机制,位于已建立的S期检查点信号传导通路模型上。本研究有助于加深对真核细胞检查点调控的了解,为研究肿瘤的发生机制提供线索。

关键词： WEB2基因酿酒酵母 S期检查点调控

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Mu2蛋白亚细胞结构定位及其相互作用蛋白的筛选

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吉林大学学报（医学版） 2016年第6期42卷 1054-1058,I0011页

作者：霍云龙王春玉赵越中国医科大学盛京医院病理科辽宁沈阳110003 中国医科大学基础医学院染色质生物学研究室教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

目的:采用果蝇S2细胞表达FLAG-Mu2蛋白,观察其亚细胞结构定位并纯化鉴定FLAG-Mu2质粒蛋白复合物,为Mu2蛋白的研究提供依据。方法:FLAG-Mu2转染果蝇S2细胞后表达FLAG-Mu2融合蛋白,共聚焦激光扫描显微镜下观察FLAG-Mu2蛋白的亚细胞定位,... 详细信息

目的:采用果蝇S2细胞表达FLAG-Mu2蛋白,观察其亚细胞结构定位并纯化鉴定FLAG-Mu2质粒蛋白复合物,为Mu2蛋白的研究提供依据。方法:FLAG-Mu2转染果蝇S2细胞后表达FLAG-Mu2融合蛋白,共聚焦激光扫描显微镜下观察FLAG-Mu2蛋白的亚细胞定位,并通过核浆分离蛋白提取实验观察细胞核提取物中FLAG-Mu2蛋白的表达情况;采用免疫沉淀技术沉淀FLAG-Mu2复合物,并对其进行纯化及质谱测序以确定蛋白复合物的组分。结果:共聚焦激光显微镜下观察,FLAG-Mu2蛋白主要表达于细胞核中。核浆分离蛋白提取检测,融合蛋白相对分子质量约为140 000,主要存在于细胞核提取物中。纯化FLAG-Mu2蛋白复合物并进行蛋白质质谱分析,FLAG-Mu2复合物中可能含有pif1A、CG31782、mip120、CG31690和G protein-sa60A。结论:FLAG-Mu2蛋白在果蝇S2细胞中主要定位于细胞核,FLAG-Mu2蛋白复合物中有5种可能的蛋白组分。

关键词： Mu2蛋白融合蛋白亚细胞结构定位相互作用蛋白筛选

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ERα的辅调节因子与乳腺癌关系的研究进展

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生命科学 2011年第8期23卷 817-823页

作者：李丹妮赵越中国医科大学沈阳110001 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室沈阳110001

雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件(estrogen response element,ERE),进而诱导靶基因转录。ERα招募... 详细信息

雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)是配体依赖的转录因子,属于核受体超家族成员。ERα介导转录的经典途径是与雌激素结合后作用于靶基因启动子区的雌激素反应元件(estrogen response element,ERE),进而诱导靶基因转录。ERα招募辅调节因子(共激活子和共抑制子)参与ERα介导的基因转录调控。辅调节因子主要通过乙酰化、磷酸化、甲基化等表观遗传机制参与转录调控,影响靶蛋白表达水平。ΕRα介导的基因转录调控在乳腺癌的增殖、分化、侵袭转移等过程中发挥重要作用。综述在ERα介导的基因转录调控中几类辅调节因子对乳腺癌发生发展的影响。

关键词： ERα 辅调节因子转录调控表观遗传学乳腺癌

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西咪替丁增强5-氟脲嘧啶对人胃癌细胞的生长抑制作用

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中国医科大学学报 2010年第12期39卷 1021-1023,1027页

作者：刘芙蓉张成宏高建李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室沈阳110001 中国医科大学实验技术中心沈阳110001

目的观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响。方法用MTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用... 详细信息

目的观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响。方法用MTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞凋亡率的影响。结果西咪替丁与5-Fu联合应用时,西咪替丁在无毒浓度(5～50μmol/L)即可显著增强低浓度5-Fu对胃癌细胞的生长抑制作用。同时还发现,西咪替丁能增强5-Fu诱导胃癌细胞凋亡。结论西咪替丁可提高人胃癌细胞MGC-803、BGC-823对化疗药物5-Fu的敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

关键词：西咪替丁 5-氟脲嘧啶联合应用胃肿瘤细胞株

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