检索结果-内蒙古大学图书馆

心血管康复医学杂志 2012年第1期21卷 5-9,F0002页

作者：王大南陈思娇郭英华刘芙蓉宋今丹中国医科大学附属第一医院干部医疗工作部老年病教研室沈阳辽宁110001 中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室

目的:探讨在2型糖尿病大鼠心肌损伤时肿瘤坏死因子(TNF)-α、核转录因子(NF)-κB介导的炎症反应中小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)可能的作用。方法:20只自发性糖尿病(GK)大鼠被随机分为DM1组(单纯糖尿病组,n=10)、DM2组(糖尿病+高脂饮食组,... 详细信息

目的:探讨在2型糖尿病大鼠心肌损伤时肿瘤坏死因子(TNF)-α、核转录因子(NF)-κB介导的炎症反应中小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)可能的作用。方法:20只自发性糖尿病(GK)大鼠被随机分为DM1组(单纯糖尿病组,n=10)、DM2组(糖尿病+高脂饮食组,n=10),另10只Wistar大鼠为健康对照组,以免疫组织化学法检测SU-MO1、TNF-α和NF-κB的表达。结果:1、DM1、DM2组血糖及TG水平明显高于健康对照组,DM2的又显著高于DM1组的(P均<0.05);2、光镜下:DM1组心肌细胞排列整齐,无明显肥大;DM2组心肌细胞肥大呈疏松样排列;3、免疫组化显示:SUMO1表达在DM2组和DM1组较健康对照组明显增加[(44.5±1.1)比(27.2±2.2)比(21.7±3.0)],且DM2组的较DM1组的显著增加(P均<0.01);TNF-α表达在DM2组和DM1组较健康对照组明显增加[(27.5±1.5)比(20.2±2.7)比(13.1±1.6)],且DM2组的较DM1的显著增加(P均<0.01);NF-κB表达在DM2组和DM1组较健康对照组明显增加[(30.1±1.7)比(40.7±1.5)比(16.0±2.6)],但DM1组的较DM2组的显著增加(P均<0.01)。结论:2型糖尿病大鼠存在着明显的糖脂代谢紊乱,伴有与人类糖尿病心肌病变相似的心肌组织形态学改变;且血SUMO1、TNF-α和NF-κB的表达均显著增加,提示SUMO1参与了2型糖尿病大鼠心肌病变由NF-κB、TNF-α介导的炎症反应,并有抑制NF-κB,保护心肌的作用。

关键词：小泛素相关修饰蛋白质类转录因子肿瘤坏死因子α 糖尿病,2型

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hLMO3基因全长及截短序列原核表达载体的构建及蛋白诱导表达

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解剖科学进展 2012年第1期18卷 8-11页

作者：刘彤顾卉李洋李丰中国医科大学基础医学院细胞生物教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院中心实验室沈阳110001

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达... 详细信息

目的构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达。方法提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中。在*** BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果 hLMO3全长及5个截短基因序列克隆到了原核表达载体pGEX-5X-2中,并经测序鉴定正确。Westernblot在*** Bl21中检测到了相应融合蛋白的表达。结论成功构建hLMO3全长及5个截短基因序列原核表达载体,在*** BL21中诱导表达出GST-LMO3全长及截短融合蛋白。

关键词： hLMO3 工具细胞HEK293 原核表达截短蛋白

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不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

不同胎龄人皮肤角质形成细胞生物学特性的实验研究

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王哲施萍刘晓玉王喜良张殿宝庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情...

目的：比较不同胎龄人皮肤角质形成细胞的生物学特性，探讨胎儿无瘢痕愈合的机制。方法：收集中国医科大学附属盛京医院产科意外流产的不同胎龄的胎儿小腿皮肤标本和整形外科手术过程中作为供皮区的成人小腿的正常皮肤标本，患者均知情同意，医院伦理委员会批准。分别用两步消化法和组织块法分离培养胎儿皮肤角质形成细胞和成人真皮成纤维细胞。将角质形成细胞按胎龄分为小于28周组和大于28周。在倒置相差显微镜观察两种细胞形态，应用免疫荧光检测角蛋白和波形蛋白在细胞内的表达，划痕实验观察两组角质形成细胞的迁移能力及两组角质形成细胞作用下成纤维细胞迁移能力。

关键词：

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聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞和导入siRNA的研究

聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞...

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：王瑞施萍张殿宝刘晓玉庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRN... 详细信息

目的：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒是近来新发现的活体示踪剂和转染剂,本实验以人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)为靶点,探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的标记率和转染siRNA干扰目的基因.方法：1.颗粒来源：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒购买于东纳生物科技有限公司.2.实验方法：原代分离人羊膜间充质干细胞(hAMSCs),向人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)中加入10％胎牛血清,含20ug/L碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12培养基,置于37℃,体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱培养,待细胞达到80％-90％融合时用胰酶消化传代.取传至第三代的细胞放入含DMEM/F12培养基的六孔板中.设立2个实验组和1个对照组,分别向两个实验组培养基中加入终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH,对照组仅加入DMEM/F12培养基.3.实验评估：实验组于标记24h后,分别用普鲁士蓝染色和Western-blot方法检测PEI-siGAPDH进入细胞和siGAPDH干扰情况.结果：光镜下观察,发现终浓度为8ug/L的聚乙烯亚胺修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒普鲁士蓝染色几乎为100％.Western-blot方法检测,发现终浓度为8ug/L的PEI-siGAPDH干扰组较对照组GAPDH表达减低.结论：聚乙烯亚胺(PEI)修饰的四氧化三铁磁性纳米颗粒能标记人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)和导入小干扰RNA.为进一步应用人羊膜间充质干细胞移植治疗提供活体示踪方法奠定实验基础.

关键词：人羊膜间充质干细胞聚乙烯亚胺四氧化三铁磁性纳米颗粒标记转染

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高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

高密度接种对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：张殿宝施萍庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2...

背景：细胞密度是影响细胞分化与去分化状态的因素之一,对于细胞密度在TGF-beta1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化中的作用尚缺乏深入研究。目的：观察细胞密度对TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的影响。方法：将HaCaT细胞分别以103/cm2和105/cm2接种于六孔板,使用2ng/mL的TGF-β1作用48h,观察细胞形态变化,应用Realtime PCR和western blot分别检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和ZO-1的转录水平和表达水平：免疫荧光检测E-Cadherin和Vimentin表达。结果：低密度组的HaCaT细胞在TGF-β1处理48h后细胞间隙变大,细胞形态由多角形变为长梭形,高密度组的细胞间隙变大,但形态变化不明显;Realtime PCR和westem blot显示两组上皮细胞标志物E-Cadherin和ZO-1的转录及表达均下调,但高密度组下调比例低于低密度组,间充质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin的转录及表达均上调,上调比例无显著差异;免疫荧光结果发现,高密度组表达E-Cadherin的细胞比率明显高于低密度组,Vimentin的表达无显著差异。结论：高接种密度降低TGF-β1诱导HaCaT细胞上皮间充质转化的效率。

关键词：

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EGF激活PAK1对人羊膜间充质干细胞体外迁移的重要作用

EGF激活PAK1对人羊膜间充质干细胞体外迁移的重要作用

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：李彩虹施萍庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的：研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)能否促进人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cell,hAMSC)增殖和定向迁移及其机理.方法：酶消化法体外分离hAMSCs,37℃,5％的CO2培养箱中培养.免疫细胞化学方法检...

目的：研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)能否促进人羊膜间充质干细胞(human amnion mesenchymal stem cell,hAMSC)增殖和定向迁移及其机理.方法：酶消化法体外分离hAMSCs,37℃,5％的CO2培养箱中培养.免疫细胞化学方法检测干细胞表面标志波形蛋白、CD44、*** chamber法观察EGF浓度梯度对hAMSCs定向迁移的影响.Transwell小室测定EGF对hAMSCs迁移的作用,及EGFR抑制剂AG1478、PI3K抑制剂LY294002、ERK抑制剂U0126对EGF作用的影响.蛋白免疫印迹法检测EGF处理后EGFR、AKT、ERK的磷酸化水平的变化,分析其与细胞迁移的关系.结果：使用Dunn chemotaxis chamber对EGF刺激后的hAMSC进行超过两小时的细胞运动研究,发现经线性浓度梯度的EGF刺激hAMSC后,其表现为特异性的定向迁移,平均迁移率为6.45μm/h.同时EGF还能增加表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白酶B(AKT)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK)的磷酸化水平.EGF诱导的ERK活性能被EGFR阻滞剂AG1478和PI3K阻滞剂LY-294002所抑制.我们还发现EGF调节PAK1信号通路很可能与hAMSC的定向迁移相关.此外,AG1478、LY-294002、U0126(ERK阻滞剂)能够减弱EGF促进的hAMSC定向迁移.结论：我们的研究表明EGF诱导的hAMSC增殖和迁移受EGFR调控—EGFR激活下游PI3K/AKT和ERK信号通路,并且hAMSC的迁移与PAK1相关.

关键词：

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EGF作用人羊膜间充质干细胞创伤修复相关蛋白的Seq-RNA表达

EGF作用人羊膜间充质干细胞创伤修复相关蛋白的Seq-RNA表达

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：李彩虹施萍张殿宝刘晓玉张涛庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001

目的检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8;转化因子1,β的表达水平.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞用免疫...

目的检测人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)伤口愈合相关蛋白白细胞介素6,8;转化因子1,β的表达水平.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞用免疫细胞化学法和流式细胞术检测细胞表面抗原;用骨软骨脂肪表皮诱导分化培养基进行诱导分化.EGF100ng/ml作用hAMSC,分别提取hAMSC和EGF作用hAMSC总RNA,进行RNA-Seq分析.用qRT-PCR检测验证.结果培养的人羊膜间充质干细胞呈梭形,旋涡样生长.通过流式细胞术检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD44,CD90,CD105;免疫细胞化学法检测HAMSCs高表达间充质干细胞相关的细胞表面标志物CD90,CD73,***在骨,软骨,脂肪,表皮诱导分化培养基中可向成骨细胞、软骨和脂肪细胞及表皮细胞分化.Seq-RNA表达谱测序涉及创伤修复12个相关的表达基因,其中,上调基因9个(BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2);下调基因3个(C3、NGF、OLR1).并经qRT-PCR检测验证得到证实.结论人羊膜间充质干细胞具有多向分化的潜能和干细胞的生物学特性,并能在一定诱导条件下分化为表皮细胞;表达伤口愈合相关蛋白BMP2、CXCL3、IL1β、IL8、PLAT、PLAU、CCL2、CCL7、DCBLD2.这一结果支持了人羊膜间充质干细胞在创伤修复中的应用.

关键词：

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EGF干预人羊膜间充质干细胞差异表达基因及基因功能富集分析

EGF干预人羊膜间充质干细胞差异表达基因及基因功能富集分析

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：施萍李彩虹张殿宝刘晓玉张涛庞希宁中国医科大学附属第一医院全科医学教研室辽宁沈阳110001 教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的研究EGF干预人羊膜间充质干细胞前后的基因表达差异,在基因水平上探讨EGF作用的分子生物学机制.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞提...

目的研究EGF干预人羊膜间充质干细胞前后的基因表达差异,在基因水平上探讨EGF作用的分子生物学机制.方法无菌条件下取孕期38～40周的人羊膜,胰酶胶原酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,待细胞传至P1代后更换无血清培养液;取4-6代细胞提取总RNA,用高通量Illumina测序RNA-Seq表达谱分析技术,对体外培养的用EGF干预人羊膜间充质干细胞,对干预前后mRNA进行测序,筛选差异表达基因并进行数字基因表达谱分析、聚类分析、Gene Ontology功能显著性富集分析、Pathway显著性富集分析和蛋白互作网络分析;采用qRT-PCR检测对上述结果进行验证.结果与人类基因组数据库(Hg18)进行比对,比较人羊膜间充质干细胞和EGF干预人羊膜间充质干细胞差异表达,发现差异表达基因104个,其中上调已知基因56个;下调已知基因48个.RNA-Seq的KEGG pathways的显著性富集分析,细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路为差异表达基因中显著富集的pathways(q≤0.05).该通路共涉及9个差异表达基因,其中上调差异表达基因7个(BMP2,CXCL3,IL1B,IL8,TNFRSF9,CCL2,CCL7),下调差异表达基因2个(INHBE,IFNE).经qRT-PCR检测验证获得证实.结论 EGF干预人羊膜间充质干细胞前后存在多组基因表达差异.细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路在启动人在羊膜间充质干细胞增殖和迁移过程中起着调节作用,有望成为促进羊膜间充质干细胞增殖和迁移的靶通路,对其应用于促进创面愈合具有指导意义.

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超重、肥胖对2型糖尿病患者凝血及代谢指标的影响(英文)

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心血管康复医学杂志 2012年第2期21卷 125-129页

作者：徐锦春陈思娇王大南陈婕胡怡宋今丹中国医科大学附属第一医院干部医疗工作部老年病教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室

目的:了解超重、肥胖对2型糖尿病患者凝血及代谢紊乱的影响。方法:选择初诊为2型糖尿病的患者248例,根据人体质量指数(BMI)分为正常BMI对照组(95例)、超重组(87例)、肥胖组(66例),均测定血脂、血糖、空腹胰岛素等相关指标,计算胰岛素抵... 详细信息

目的:了解超重、肥胖对2型糖尿病患者凝血及代谢紊乱的影响。方法:选择初诊为2型糖尿病的患者248例,根据人体质量指数(BMI)分为正常BMI对照组(95例)、超重组(87例)、肥胖组(66例),均测定血脂、血糖、空腹胰岛素等相关指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并进行统计学处理。结果:与正常BMI对照组相比,超重组、肥胖组血浆纤维蛋白原(fg)[(3.37±0.55)g/L比(4.04±0.70)g/L比(5.20±0.69)g/L]、尿微量白蛋白(UMA)[(14.46±8.90)mg/g比(47.33±42.54)mg/g比(104.45±60.78)mg/g]、空腹血糖(FBG)[(7.15±0.97)mmol/L比(8.84±1.81)mmol/L比(10.06±2.28)mmol/L]、空腹胰岛素(FINS)[(10.09±8.21)IU/ml比(14.33±15.55)IU/ml比(19.69±10.86)IU/ml]、HOMA-IR[(3.19±2.59)比(5.51±5.38)比(8.48±4.62)]及血甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平均明显升高,且随肥胖程度的增加而呈上升趋势,而血浆凝血酶原时间(PPT)[(13.33±0.69)s比(12.74±0.69)s比(11.43±0.53)s]、血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)[(37.32±2.31)s比(36.55±2.41)s比(34.61±1.53)s]、HDL-C[(1.54±1.12)mmol/L比(1.27±0.41)mmol/L比(1.09±0.28)mmol/L]水平均明显降低,且随肥胖程度的加深而呈下降趋势(P均<0.05)。结论:超重及肥胖加重2型糖尿病凝血功能及代谢障碍,并加重胰岛素抵抗的程度,且此异常随肥胖程度的加深而更加严重。

关键词：糖尿病,2型肥胖症凝血酶原高脂血症

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2型糖尿病核因子κB信号通路相关微血管内皮损伤与SUMO化修饰

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医学综述 2012年第7期18卷 1077-1080页

作者：杨红艳陈婕陈思娇宋今丹中国医科大学附属第一医院老年病学研究室沈阳110001 中国医科大学医学分子生物学研究所卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001

NF-κB通路的持续激活在血管的炎性反应和内膜的过度增生中起关键的作用,可能是糖尿病血管内皮细胞损伤及随后的糖尿病血管病变的始动机制之一,2型糖尿病微血管病患者NF-κB相关外周血淋巴细胞DNA氧化损伤及其下游影响因子信号的不同,为... 详细信息

NF-κB通路的持续激活在血管的炎性反应和内膜的过度增生中起关键的作用,可能是糖尿病血管内皮细胞损伤及随后的糖尿病血管病变的始动机制之一,2型糖尿病微血管病患者NF-κB相关外周血淋巴细胞DNA氧化损伤及其下游影响因子信号的不同,为2型糖尿病微血管病理变化的早期干预提供依据。SUMO化很可能通过对NF-κB信号通路的复杂性调控,正性调节胰岛素受体信号来阻止糖尿病的发生。

关键词： 2型糖尿病核因子κB信号通路微血管内皮损伤 SUMO化修饰

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