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中国实验血液学杂志 2001年第3期9卷 236-239页

作者：刘海丽许彩民刘复强吕照江潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京同仁医院北京100730 北京协和医院北京100730

采用无血清培养诱导细胞凋亡 ,用Annexin V荧光试剂盒标记、PI标记、流式细胞仪检测 ,以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂等方法 ,研究糖基磷脂酰肌醇锚蛋白 (GPI Pr)缺失与阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)粒细胞凋亡的关系。结果显示 ,PNH... 详细信息

采用无血清培养诱导细胞凋亡 ,用Annexin V荧光试剂盒标记、PI标记、流式细胞仪检测 ,以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂等方法 ,研究糖基磷脂酰肌醇锚蛋白 (GPI Pr)缺失与阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)粒细胞凋亡的关系。结果显示 ,PNH粒细胞的凋亡率比正常人粒细胞的凋亡率明显为低 ;分析凋亡率与粒细胞的CD5 9缺失率之间的关系 ,未发现二者有相关性。结果表明 ,PNH的粒细胞比正常人粒细胞相对不易凋亡 ,粒细胞上GPI PrCD5

关键词：糖基磷酯酰肌醇锚蛋白阵发性睡眠性血红蛋白尿症 CD59 PNH GPI-Pr 粒细胞细胞凋亡

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嗜水气单胞菌hec毒素溶血试验诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症

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中华血液学杂志 2000年第10期21卷 517-520页

作者：刘海丽许彩民吕照江陆承平潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院南京农业大学

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素... 详细信息

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素。粗提毒素作用于PNH和其他贫血患者及正常人的红细胞 ,采用 96孔板在波长 6 30nm酶标仪比色 ;同时用CD59单抗和FITC标记的羊抗鼠IgG标记红细胞 ,以流式细胞仪分析毒素作用前后CD59标记率。结果　对 15例PNH患者、15名正常人、15例非PNH贫血患者的红细胞 ,进行hec毒素试验 ,发现毒素在 0 .12 5g/L、37℃作用 2 0min后 ,正常人和非PNH贫血患者的红细胞完全溶解 ,而PNH患者存留红细胞的百分率与CD59标记率成反比。毒素作用前后流式细胞仪检测结果表明 ,毒素可以特异地作用于CD59阳性细胞。结论　PNH患者的红细胞比其他非PNH贫血患者及正常人的红细胞有明显的抗毒素溶破作用 ,且毒素作用后存留细胞的百分数反映CD59标记率 ,故可作为PNH诊断的敏感、特异、简便可行的新诊断方法。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿嗜水气单胞菌 hec毒素

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幽门螺杆菌空泡毒素基因的单链构象多态性研究

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中华医学杂志 1999年第3期79卷 181-184页

作者：彭惠潘国宗曹世植方福德中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室

目的应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性，借此区分不同来源的Ｈｐ。方法用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃、十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增，其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕ... 详细信息

目的应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性，借此区分不同来源的Ｈｐ。方法用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃、十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增，其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。对３例具不同ＳＳＣＰ带型的十二指肠溃疡（ＤＵ）患者的Ｈｐ进行基因序列分析。结果ｖａｃＡ的两种产物ｖａｃＡ１和ｖａｃＡ２各占７６．５％（１１４／１４９）和２３．５％（３５／１４９），每个胃粘膜仅能扩增出一种产物。８种不同的ＳＳＣＰ带型中以Ｂ型为最多（４５．７％），ＤＵ占８０％。ＤＮＡ测序显示Ｈｐ的ｖａｃＡ信号序列有不同程度的差异。结论不同ＨｐｖａｃＡ基因的变异度较大，利用ＰＣＲＳＳＣＰ可将不同来源的Ｈｐ区分开，从而可用于Ｈｐ流行病学研究和治疗后的追踪观察，鉴别Ｈｐ的感染和重复感染等。

关键词：幽门螺杆菌空泡毒素基因单链构象胃肠疾病

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症临床缓解患者仍可查出异常血细胞

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中华血液学杂志 1999年第4期20卷 183-186页

作者：李强张之南吕照江刘尔坤武永吉许彩民中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血液科华西医科大学附属第二医院儿科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的观察临床完全缓解的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内是否仍有异常造血细胞并探讨其临床意义。方法用免疫荧光标记及流式细胞术检测患者骨髓有核细胞、外周血红细胞ＣＤ５９抗原表达及骨髓ＣＤ３４＋造血干／祖细胞数。... 详细信息

目的观察临床完全缓解的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内是否仍有异常造血细胞并探讨其临床意义。方法用免疫荧光标记及流式细胞术检测患者骨髓有核细胞、外周血红细胞ＣＤ５９抗原表达及骨髓ＣＤ３４＋造血干／祖细胞数。结果２例临床完全缓解的ＰＮＨ患者体内仍呈正常造血细胞与异常克隆并存状态，但与未缓解ＰＮＨ患者相比，完全缓解患者外周血红细胞、骨髓单个核细胞及ＣＤ３４＋细胞中均以正常的ＣＤ５９＋细胞为主，表明体内异常克隆造血优势已经消失。结论临床完全缓解的ＰＮＨ患者仍可有残存的异常克隆；ＰＮＨ达到临床完全缓解并不一定需要体内异常克隆的彻底消灭；ＰＮＨ患者体内异常克隆的造血优势在一定条件下是可以消失的。

关键词：血红蛋白尿 PNH 抗原造血干细胞流式细胞术

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重组人甲胎蛋白基因顺式调控元件功能的研究

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基础医学与临床 1999年第1期19卷 38-42页

作者：全硕潘国宗刘东远鲁重美左瑾方福德中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化内科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

将６种含有人甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因启动子、增强了和／或沉寂子不同组合的荧光素酶报告基因真核表达载体分别转染３种人肝癌细胞系及１种肺腺癌细胞系，测定瞬时表达的荧光素酶活性。结果显示６种重组人ＡＦＰ基因顺式作用元件在ＡＦ... 详细信息

将６种含有人甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因启动子、增强了和／或沉寂子不同组合的荧光素酶报告基因真核表达载体分别转染３种人肝癌细胞系及１种肺腺癌细胞系，测定瞬时表达的荧光素酶活性。结果显示６种重组人ＡＦＰ基因顺式作用元件在ＡＦＰ阳性肝癌细胞均具有特异启动活性，而在ＡＦＰ阴性的肝癌细胞和非肝癌细胞无启动活性。在这６种重组人ＡＦＰ顺式元件中，以２．２ｋｂ的调控元件（去除了ＡＦＰ基因沉寂子。保留其启动子和增强子序列）启动活性最高，从而为下一步的靶向性肝癌基因治疗提供了较理想的肝癌细胞特异性启动元件。

关键词：肝癌甲胎蛋白转录调控元件

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中国人2型糖尿病的基因分型和定位

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解剖学报 1999年第4期30卷 289-292页

作者：赵进英王姮左瑾李玉秀孙琦黄薇陈竺蔡有余方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院上海第二医科大学瑞金医院中国医学科学院实验动物研究所

目的　对中国人２型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。　方法　采用分布于１～２２号染色体及Ｘ染色体上的３５８对荧光标记的微卫星引物，进行多重ＰＣＲ，ＰＣＲ扩增产物用聚... 详细信息

目的　对中国人２型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。　方法　采用分布于１～２２号染色体及Ｘ染色体上的３５８对荧光标记的微卫星引物，进行多重ＰＣＲ，ＰＣＲ扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分离，然后进行电泳图谱及信息收集。应用ＧｅｎｅｓｃａｎＴＭ３．０软件和Ｇｅｎｏ－ｔｙｐｅＴＭ２．１软件进行基因分型和基因定位。　结果　在３５个家系中共有１９３个微卫星标志能准确进行基因分型。共得４１４９５个基因型。经过多点连锁分析和患病同胞对分析，初步确定在１，１０，１２，１８，２０号染色体上存在ＮＩＤＤＭ相关基因位点。　结论　用全基因组扫描技术可以对中国人２型糖尿病相关基因位点进行基因分型和基因定位。

关键词：糖尿病 Ⅱ型基因分型基因定位

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体外转运红细胞囊泡的GPI锚定蛋白CD59保护阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞<英文>

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中国实验血液学杂志 1999年第2期7卷 123-127页

作者：许彩民杨洋吕照江潘华珍张之南中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院北京100730

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性克隆溶血疾病,由于血细胞膜上缺乏具有调节蛋白补体的GPI-锚定蛋白如CD59和CD55等,所以对补体敏感,易产生溶血。红细胞存储或ATP耗空时有囊泡释放,经免疫印迹试验证明囊泡中富含CD59。应... 详细信息

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性克隆溶血疾病,由于血细胞膜上缺乏具有调节蛋白补体的GPI-锚定蛋白如CD59和CD55等,所以对补体敏感,易产生溶血。红细胞存储或ATP耗空时有囊泡释放,经免疫印迹试验证明囊泡中富含CD59。应用免疫亲和层析柱分离PNH CD59^-红细胞,然后与红细胞囊泡保温,保温后分别测定PNH CD59^-细胞表面CD59含量和溶血度。用流式细胞仪测定CD59,结果发现保温后CD59含量增加;用蛇毒因子溶血试验测得溶血度有显著下降。体外实验证明囊泡上的CD59可以转运到PNH CD59^-红细胞上,并具有抑制补体溶血的功能,使PNH CD59^-红细胞在受补体攻击时不易溶血。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿症 GPI-描定蛋白红细胞囊泡 CD59

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经EB病毒转染建立阵发性睡眠性血红蛋白尿症永生细胞系的方法改进

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中国实验血液学杂志 1999年第4期7卷 282-285页

作者：杜涛许彩民朱苏玲徐文瑾潘华珍张之南中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血液科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所分子生物学国家重点实验室中国科学院遗传学研究所

为提高EB病毒(Epstein-Barr virus)转染阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)异常细胞建立永生性细胞株的成功率及加快建株时间,在改进培养方法方面进行了一些初步探索性研究。根据PNH异常细胞易受氧化损伤的原理,在培养体系中加入一种抗氧化... 详细信息

为提高EB病毒(Epstein-Barr virus)转染阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)异常细胞建立永生性细胞株的成功率及加快建株时间,在改进培养方法方面进行了一些初步探索性研究。根据PNH异常细胞易受氧化损伤的原理,在培养体系中加入一种抗氧化剂AA_2保护PNH异常细胞的生存。研究结果表明:2例PNH患者细胞均建株成功,不加药对照组有1例失败;建株时间明显缩短,并且建株后CD59^-细胞百分率无明显下降。实验结果提示,氧化损伤是PNH细胞建株困难的重要原因;在培养初期加抗氧化剂可提高建株的成功率及缩短建株时间,这是一个重要的改进;因观察例数尚少,有待进一步证实。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿症 EB病毒永生性细胞系 CD59^-细胞抗氧化剂

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓中正常及异常造血干/祖细胞含量分析

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中华血液学杂志 1998年第10期19卷 518-521页

作者：李强张之南刘尔坤沈悌武永吉许彩民中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血液科华西医科大学附属第二医院儿科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：根据阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓造血干／祖细胞的含量，探讨异常细胞获得造血优势的可能原因。方法：骨髓有核细胞以ＣＤ３４ＦＩＴＣ及ＣＤ５９ＰＥ免疫荧光双标记，经流式细胞仪测定不同细胞群内ＣＤ３４... 详细信息

目的：根据阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓造血干／祖细胞的含量，探讨异常细胞获得造血优势的可能原因。方法：骨髓有核细胞以ＣＤ３４ＦＩＴＣ及ＣＤ５９ＰＥ免疫荧光双标记，经流式细胞仪测定不同细胞群内ＣＤ３４＋细胞含量。结果：①正常对照及ＰＮＨ患者骨髓中的ＣＤ３４＋细胞均分布在“淋巴细胞窗”（Ａ窗）及“原始细胞窗”（Ｄ窗）内。②正常对照Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞数分别为（３７０１±８９６）／１０５个细胞、（１１３７３±１５７４）／１０５个细胞；ＰＮＨ患者Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞分别为（１２１５±７４９）／１０５个细胞及（６４２０±２３３７）／１０５个细胞，均较正常对照显著减少（Ｐ＜０．０１）。③患者ＣＤ５９＋细胞群中ＣＤ３４＋细胞的减少比ＣＤ５９－细胞群更为显著，Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ５９－细胞群中ＣＤ３４＋细胞分别相当于ＣＤ５９＋细胞群的５．６２倍、１．８５倍。④正常对照Ａ窗及Ｄ窗内ＣＤ３４＋细胞几乎均为ＣＤ５９＋表型（分别为９９．２％±１．０％、９８．７％±０．８％），而ＰＮＨ患者Ａ窗及Ｄ窗内则都以ＣＤ３４＋ＣＤ５９－细胞占据数量优势（分别为７９．３％±１５．５％、８５．９％±７．８％）。结论：ＰＮ?

关键词：血红蛋白尿症 PNH 骨髓造血干细胞流式细胞术

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血管紧张素转换酶基因多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征

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中华结核和呼吸杂志 1998年第8期21卷 489-491页

作者：肖毅黄席珍邱长春朱席琳刘怡文中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院呼吸内科中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（ＯＳＡＳ）之间的关系。方法以ＡＣＥ基因内含子１６的一个２８７ｂｐ的Ａｌｕ顺序Ｉ／Ｄ（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ）型为多态标志，用聚合酶... 详细信息

目的探讨血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（ＯＳＡＳ）之间的关系。方法以ＡＣＥ基因内含子１６的一个２８７ｂｐ的Ａｌｕ顺序Ｉ／Ｄ（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ）型为多态标志，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增基因片段，对５０例ＯＳＡＳ患者和５０名正常人ＡＣＥ基因多态性的分布进行了观察，并结合临床特点和多导睡眠监测结果进行了分析。结果发现在中国汉族正常人群中，ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态Ｉ、ＩＤ、ＤＤ基因型频率分别为１６％，５２％，３２％，其Ｄ和Ｉ等位基因频率分别为４２％和５８％。Ｉ／Ｄ多态分布符合Ｈａｒｄｙｗｅｉｎｂｅｒｇ定律，达到了遗传平衡，具有群体代表性。ＯＳＡＳ患者Ⅱ基因型显著高于正常人，ＤＤ基因型则明显低于正常人；Ｄ和Ｉ等位基因频率分别为２８％和７２％，其差异也具有统计学意义。Ⅱ基因型的ＯＳＡＳ患者较ＩＤ基因型，最长呼吸暂停时间，最低血氧饱和度和睡眠呼吸暂停低通气指数（ＡＨＩ）均较严重。另外，合并高血压的ＯＳＡＳ患者其最长呼吸暂停时间，最低血氧饱和度和ＡＨＩ较无高血压的ＯＳＡＳ患者严重。结论中国汉族人ＯＳＡＳ发病与ＡＣＥ基因Ｉ／Ｄ多态性相关联，基因型ＩＩ和等位基因Ｉ可能是中国人?

关键词：睡眠呼吸暂停综合征 ACE 基因多态性

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